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基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立被引量：5: 2015年; 目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。; 赵娟娟徐华林陶弋婧郭萌萌周涯陈超秦娜琳郑静田丹徐林; 关键词：SYBR

基于RGSE模式的本科免疫学实践教学改革的初探被引量：1: 2013年; 教育部在＂十一五＂教育规划纲要中明确提出,高等医学教学的主要目的是培养基础理论扎实、实践操作熟练和创新意识突出的复合型人才。这需要相关教学理论、教学模式和内容的不断改革和创新,以适应当前社会对医学人才的需求[1]。; 徐林罗军敏秦娜琳田丹覃明陈富超郑静; 关键词：实践教学改革免疫学本科高等医学教学

重组hIL-31抗体制备及其拮抗皮肤炎症的研究: 2011年; 目的:高效表达重组hIL-31制备IL-31抗体,探讨IL-31抗体拮抗皮肤炎症的作用,为研发IL-31抗体治疗性新药奠定基础。方法:①培养工程菌、IPTG诱导、菌体、超声破碎,用镍NTA柱纯化重组蛋白。②重组hIL-31蛋白溶液加佐剂免疫家兔,制备兔抗IL-31多克隆抗体。③将IL-31抗体分为3个剂量,经皮下注射和皮肤直接涂抹的途径,对已经致皮肤炎症的BALB/c小鼠治疗7d,治疗后3d取治疗部位皮肤作石蜡切片进行HE染色观察组织学变化,并检测血清中IL-6、IL-8、L选择素和MIP-3β等细胞因子的变化。结果:①SDS-PAGE电泳证实获得了高纯度的纯化人IL-31蛋白。②用重组hIL-31蛋白疫苗免疫家兔,在免疫后4周抗体滴度达到高峰,经ELISA法测血清抗体滴度为1∶15000～1∶20000,双扩滴度为1∶16。Western blot结果重组IL-31蛋白能与抗IL-31抗体特异性结合。③小鼠皮肤组织切片HE染色显示,治疗组皮下和皮内均有炎症细胞浸润,呈现剂量依赖性趋势。④血清中炎性因子ELISA检测,涂抹组和注射组小鼠血清中IL-6、IL-8、MIP-3β均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:①获得稳定表达的重组人IL-31蛋白,以此作为免疫原免疫家兔,诱导分泌高滴度的IL-31抗体。②IL-31抗体使皮肤炎症中炎性细胞减少,血清中炎症相关细胞因子明显降低。; 魏培孙万邦黄俊琼曹雪梅罗军敏郑静王胜香宋明英; 关键词：IL-31 抗体拮抗皮肤炎症

下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响被引量：6: 2015年; 研究下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响。利用反义核酸技术设计针对miRNA-21成熟体的ASO序列,构建pcDNA-6.2-miRNA-21-ASO真核表达载体(命名为p-miR-21-ASO);将重组载体p-miR-21-ASO体外瞬时转染HCT116细胞,real-time PCR检测细胞中miRNA-21的表达变化;CCK-8法及克隆形成实验检测HCT116细胞的增殖及克隆形成能力改变;划痕法观察HCT116细胞的体外迁移能力变化;western blot检测细胞中VEGF蛋白的表达变化。结果显示,p-miR-21-ASO载体能下调miRNA-21的表达(P<0.05);CCK-8及克隆形成实验结果显示HCT116细胞的增殖及克隆形成能力明显下降(P<0.05);划痕实验结果发现细胞的体外迁移能力削弱(P<0.05);western blot检测结果表明转染组细胞VEGF表达下调(P<0.05)。结果表明,下调miRNA-21能明显抑制HCT116细胞的体外生长,这可能与VEGF的表达降低有关。; 陶弋婧赵娟娟李永菊郭萌萌周涯秦娜琳郑静罗军敏徐林; 关键词：MIRNA-21 结肠癌真核表达

MicroRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响: 目的：研究miR-7 (MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法：利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋...; 赵娟娟朱顺飞徐华林胡燕郭萌萌陶弋婧周涯秦娜琳郑静徐林; 关键词：肠系膜淋巴结 ΑΒT细胞

自身启动子调控miR-7真核表达载体的构建及其意义被引量：4: 2015年; 目的构建带有miR-7自身启动子的miR-7重组真核表达载体,研究其对人肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法预测miR-7启动子序列,设计含有该序列和miR-7前体序列目的片段的引物,PCR扩增后亚克隆入p GL3.0-Basic载体以构建miR-7自身启动子调控的真核表达载体p GL3.0-Basic-miR-7-promoter(命名为p-miR-7-pro);将所构建载体转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测95D细胞中miR-7的表达水平;MTT和克隆形成实验分别检测95D细胞的增殖和克隆形成能力;划痕法观察95D细胞体外迁移能力的变化;FACS检测95D细胞的凋亡情况。结果酶切和测序结果证明成功构建p-miR-7-pro真核表达载体,转染95D细胞后可有效表达miR-7;与对照组相比,p-miR-7-pro转染组95D细胞的体外增殖能力受到明显的抑制(0.60±0.03 vs 0.19±0.05,P<0.05);同时其迁移能力也显著降低(473±7 vs 99±2,P<0.05);而细胞凋亡则显著增加(9.233±0.586%vs 12.967±0.643%,P<0.05)。结论成功构建由自身启动子调控的miR-7真核表达载体,为后续研究miR-7在肺癌基因治疗中的作用提供重要实验基础。; 郭萌萌廖珍媛赵娟娟陶弋婧胡燕陈超秦娜琳郑静徐林; 关键词：真核表达肺癌增殖凋亡

气管滴注地塞米松对大鼠急性肺损伤的影响被引量：1: 2014年; 目的研究气管滴入地塞米松对大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法 48只SD大鼠随机分为6组:①正常对照组;②ALI组;③ALI气管滴生理盐水组;④ALI气管给药组;⑤ALI腹腔注生理盐水组;⑥ALI腹腔给药组。第②组至第⑥组尾静脉注射LPS15min后,③组、④组分别气管滴生理盐水和地塞米松,⑤组、⑥组分别腹腔注射生理盐水和地塞米松。4h后处死大鼠,用ELISA法测血TNF-α和IL-10;取肺组织作病理学观察并测定湿/干重比。结果各试验组TNF-α和IL-10均高于正常组(P<0.05)。给予地塞米松后,TNF-α下降,而IL-10升高(P<0.01),这两种变化趋势在气管给药组比腹腔给药组明显(P<0.05)。结论 ALI早期应用地塞米松可降低TNF-α并增加IL-10表达,缓解炎症。气道局部应用地塞米松能改善ALI大鼠的呼吸功能。; 赵麒麟陈静罗军敏郑静秦娜琳陈富超; 关键词：急性肺损伤 TNF-Α IL-10 地塞米松

下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响: 目的:研究下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响。方法:利用反义核酸技术设计针对miRNA-21成熟体的ASO序列,构建pcDNA-6.2-miRNA-21-ASO真核表达载体(命名为P-miR...; 陶弋婧赵娟娟李永菊郭萌萌周涯秦娜琳郑静罗军敏徐林; 关键词：MIRNA-21 结肠癌真核表达; 文献传递

微小RNA-126基因在CD4＋T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用被引量：1: 2017年; 目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。; 褚风云胡燕郭萌萌陈超赵娟娟刘云秦娜琳郑静徐林; 关键词：CD4+T细胞 IBD 肠炎模型

微小RNA-7对人肺癌95D细胞体外增殖的作用被引量：20: 2010年; 目的:探讨微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)对人肺癌95D细胞体外增殖的作用。方法:采用体外转染法将miR-7瞬时转染95D细胞后,应用Real-time PCR特异探针法检测95D细胞中miR-7的表达情况,应用MTT法检测95D细胞的生长情况,FCM法分析细胞周期变化,并用Western印迹法检测95D细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的变化。结果:与对照组相比,miR-7转染组95D细胞的miR-7表达水平显著增加(P<0.05),细胞生长明显受抑(P<0.05),且主要阻滞在G1期(P<0.05),而EGFR表达显著下调。结论:miR-7可以抑制人肺癌95D细胞的体外增殖,可能作为后续肺癌生物治疗的新靶点。; 徐林任涛周涯秦安东郑静; 关键词：人肺癌体外增殖 WESTERN印迹法体外转染瞬时转染 EGFR表达

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郑静

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