苏文强
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：河南科技学院动物科学学院更多>>
- 发文基金：家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化被引量：1
- 2017年
- 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。
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- 关键词：猪囊尾蚴原核表达
- 新乡市犬肠道寄生虫流行病学调查被引量：5
- 2015年
- 为了解新乡市犬肠道寄生虫感染情况,从新乡市宠物市场、几家动物医院及农村采集了120份犬粪便,采用饱和盐水漂浮法和沉淀法对犬粪便中寄生虫卵进行检查,通过显微镜观察虫卵形态特征,结合流行病学资料确定其种类,并统计其感染率.结果表明:根据查到的寄生虫卵,判断感染的优势虫种为犬弓首蛔虫、钩虫、犬复孔绦虫、等孢球虫等4种寄生虫.在这4种寄生虫中,犬弓首蛔虫感染率最高,达到40.0%;其次是犬钩虫,为19.2%;犬复孔绦虫的感染率为15.0%,等孢球虫感染率为7.5%.调查查到的寄生虫多为人畜共患种,因此需加强宠物犬肠道寄生虫病的综合防控.
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- 关键词：肠道寄生虫流行病学调查感染率
- 猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达
- 2016年
- 为了探究凋亡蛋白酶抑制剂基因在猪囊尾蚴生活过程中的作用,利用RT-PCR技术克隆了猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂基因,并将其克隆至原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(D E3),经IPTG诱导后,用SDS-PAGE进行初步分析,在53 ku处出现明显的蛋白条带,与预期结果一致。W estern-blot结果表明,重组融合蛋白能够与抗H is特异性抗体发生反应。凋亡蛋白酶抑制剂基因的成功表达为后续对其功能进行研究奠定了基础。
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- 关键词：猪囊尾蚴克隆
