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微小隐孢子虫棒状体蛋白CpPRP1 sushi结构域的定位及其重组蛋白对小鼠隐孢子虫感染的免疫保护效果研究: 微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)是严重危害人和动物健康的寄生原虫,目前,隐孢子虫病尚无有效的治疗药物和预防疫苗.棒状体蛋白在隐孢子虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用,微小隐孢子虫假定棒状体蛋白1...; 黄燕石凯米荣升刘宇轩胡盼詹婷婷宋悦贾海燕陈兆国

三种实时荧光定量PCR方法检测粪便中隐孢子虫卵囊的比较: 传统镜检方法检测粪样中的隐孢子虫(Cryptosoridium spp.)卵囊存在敏感性低、计数困难等缺点,本研究旨在对三种隐孢子虫实时荧光定量PCR检测方法进行比较,筛选一种有效的检测方法,用于准确评估小鼠粪便中隐孢子...; 黄燕米荣升贾海燕胡盼詹婷婷宋悦陈兆国; 关键词：隐孢子虫粪便

弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶基因的原核表达及蛋白的定位研究: 2017年; 为表达刚地弓形虫Ⅰ型蛋白磷酸酶(Toxoplasma gondii protein phosphatase 1,Tg PP1)基因、确定Tg PP1在弓形虫速殖子上的定位,将全基因合成的Tg PP1基因克隆到表达载体p ET-30a(+)中,构建重组载体p ET30a-Tg PP1,转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导,利用SDS-PAGE和Westernblot检测重组蛋白表达情况及其免疫学活性。通过亲和层析获得Tg PP1重组蛋白,制备抗血清,采用间接ELISA检测血清效价、免疫荧光法检测Tg PP1蛋白在弓形虫中的定位。结果显示,成功构建了重组表达载体p ET30a-Tg PP1并实现了在大肠杆菌中的表达,表达产物的分子质量约为36 ku。Western-blot检测结果显示,重组蛋白能与弓形虫感染小鼠阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。免疫荧光检测结果显示,Tg PP1主要定位于弓形虫速殖子顶端。上述结果为进一步研究Tg PP1在弓形虫入侵和繁殖过程中的作用及其机制打下了基础。; 程龙詹婷婷周鹏黄燕米荣升宋悦游艳敏韩先干陈兆国; 关键词：刚地弓形虫原核表达抗血清

隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较被引量：6: 2017年; 为筛选一种检测谱广、敏感性好、特异性高的隐孢子虫实时荧光定量PCR法,对JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法三种隐孢子虫实时荧光定量PCR方法的敏感性、特异性和重复性进行了检测,并与基于18S r DNA序列的套式PCR方法进行了比较。结果显示,以10倍倍比稀释的含有微小隐孢子虫18S r DNA基因片段的重组质粒为模板,成功地建立了三种实时荧光定量PCR方法;敏感性试验显示,JVAP18S法和Csp18S法最低可检测0.1个卵囊,而CRU18S法最低只能检测到1个卵囊,但他们均比套式PCR方法敏感;特异性试验结果显示,三种实时荧光定量PCR法均可检测微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)和贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi),而其他属寄生虫和细菌DNA的检测结果均为阴性;重复性试验结果显示,JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法的批内变异系数分别为0.69%~2.68%、0.11%~4.93%、0.04%~2.89%,批间变异系数分别为0.52%~5.75%、2.09%~5.13%、1.15%~3.71%;对50份小鼠田间粪便样品检测结果显示,JVAP18S法检测的阳性率为84.00%,显著高于套式PCR法检测的64.00%的阳性率。上述结果表明,三种实时荧光定量PCR法均能有效检测隐孢子虫,比较而言,JVAP18S法敏感性高、特异性强、重复性好,尤其适合于隐孢子虫含量较少的样品检测。; 宋悦赵权黄燕米荣升游艳敏贾海燕程龙张烨华张晓丽韩先干陈兆国; 关键词：隐孢子虫实时荧光定量PCR 敏感性特异性

泰泽隐孢子虫CP15基因的原核表达及抗血清制备被引量：1: 2017年; 将泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)CP15基因从pMD18-T-CP15重组质粒中切下,连接至pET-28a(+)原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确后,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化的重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体。结果显示,重组表达载体pET-28a-CP15在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白分子量约为17 kDa。Western blot显示重组蛋白能被泰泽隐孢子虫感染小鼠血清所识别。ELISA结果显示重组蛋白免疫小鼠血清能和泰泽隐孢子虫卵囊可溶性抗原特异性反应,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。; 宋悦米荣升赵权薛方民苏庆美黄燕游艳敏陆珂韩先干陈兆国; 关键词：原核表达多克隆抗体

猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究被引量：1: 2016年; 为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388-609位区域为HspA1表位区。分别对HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到pBiFC-VC155载体中,同时将DnaJ编码基因dnaj克隆到pBiFC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果显示,成功地构建了含HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi、DnaJ编码基因dnaj的真核重组表达质粒pBiFC-VC155-a1、pBiFC-VC155-a1-epi和pBiFC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光,表明HspA1和HspA1表位区均与DnaJ存在相互作用。本研究为进一步探讨HspA1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。; 胡盼米荣升黄燕陆珂贾海燕程龙詹婷婷宋悦王香平韩先干陈兆国; 关键词：猪附红细胞体 DNAJ 蛋白相互作用

典型城市屠宰及销售猪肉中弓形虫的分子检测研究被引量：4: 2016年; 为了解我国重庆市、广州市和上海市3个典型城市屠宰环节和销售环节猪肉中弓形虫的携带情况,在这3个城市共采集猪膈肌样品393份,分别进行胃蛋白酶消化并提取基因组DNA,以弓形虫529 bp重复序列为目的基因,进行PCR扩增。结果显示,3个城市猪膈肌肉中弓形虫的阳性率为5.34%,其中重庆市的阳性率最高,达9.83%;其次是上海市,为3.17%;而广州市则未检出阳性样品。夏季和秋季间、屠宰环节和销售环节间的阳性率差异均不具备显著统计学意义。本研究结果为减少弓形虫对上述地区人群的危害,预防和控制弓形虫病流行,指导猪群的饲养管理以及提高畜牧业经济效益提供了有益指导。; 詹婷婷米荣升黄燕陆珂程龙贾海燕胡盼宋悦韩先干赵权陈兆国; 关键词：弓形虫 PCR 膈肌

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宋悦

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