袁慧敏
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：上海市宝山区科学技术委员会科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- OC-STAMP基因过表达载体及稳转细胞系的构建
- 2017年
- 目的构建破骨细胞多次跨膜蛋白(OC-STAMP)基因过表达质粒,体外转染RAW264.7细胞构建稳转细胞系,为进一步研究OC-STAMP的功能提供工具。方法根据NCBI数据库中OC-STAMP基因信息,设计引物,采用PCR扩增其基因片段;运用基因重组方法双酶切目的基因,并将其克隆至含有绿色荧光蛋白(GFP)的p CDH-CMV慢病毒载体,经酶切测序对重组质粒进行鉴定;转染成功构建的质粒至293T细胞中Western blotting验证蛋白过表达情况;采用ps PAX2和p MD2.G两种包装质粒包装p CDH-CMV-oc-stamp重组质粒获得病毒液,病毒感染RAW264.7细胞获得OC-STAMP过表达稳转细胞系,Q-PCR和Western blotting验证蛋白过表达情况。结果酶切和测序鉴定表明成功构建p CDH-CMV-oc-stamp的基因重组质粒;将成功构建的p CDH-CMV-oc-stamp质粒转染至293T,可观察到大量绿色荧光表达;将成功包装获得的病毒液感染RAW264.7细胞后q-PCR及Western blotting结果证实OC-STAMP成功过表达。结论成功构建p CDH-CMV-oc-stamp重组质粒及OC-STAMP过表达的稳转细胞系。
- 袁慧敏何茳萍张光亚张丹丹陈凤玲
- 关键词：质粒构建病毒转染RAW264.7细胞
- OC-STAMP及其在巨噬细胞系细胞融合中作用机制的研究进展被引量：1
- 2017年
- 破骨细胞(OC)是唯一执行骨吸收功能的细胞,来源于单核细胞/巨噬细胞谱系。在OC形成过程中,前体OC融合形成多核成熟OC。而细胞融合是一个非常复杂的生物学过程,需要一些特殊蛋白或分子参与。OC多次跨膜蛋白(OC-STAMP)是近年来新发现的细胞融合分子。在OC-STAMP基因敲除的小鼠体内,OC和外源异物巨噬细胞的融合都被完全抑制,且在OC-STAMP缺乏的OC中,其骨吸收功能也明显下降。目前,OC-STAMP调节细胞融合的机制尚未明确,研究认为OC-STAMP主要通过核因子κB和信号转导及转录激活因子家族所介导的信号通路发挥作用。
- 袁慧敏陈凤玲
- 关键词：细胞融合破骨细胞
