何茳萍 作品数:4 被引量:9 H指数:2 供职机构: 上海交通大学医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市宝山区科学技术委员会科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
OC-STAMP基因过表达载体及稳转细胞系的构建 2017年 目的构建破骨细胞多次跨膜蛋白(OC-STAMP)基因过表达质粒,体外转染RAW264.7细胞构建稳转细胞系,为进一步研究OC-STAMP的功能提供工具。方法根据NCBI数据库中OC-STAMP基因信息,设计引物,采用PCR扩增其基因片段;运用基因重组方法双酶切目的基因,并将其克隆至含有绿色荧光蛋白(GFP)的p CDH-CMV慢病毒载体,经酶切测序对重组质粒进行鉴定;转染成功构建的质粒至293T细胞中Western blotting验证蛋白过表达情况;采用ps PAX2和p MD2.G两种包装质粒包装p CDH-CMV-oc-stamp重组质粒获得病毒液,病毒感染RAW264.7细胞获得OC-STAMP过表达稳转细胞系,Q-PCR和Western blotting验证蛋白过表达情况。结果酶切和测序鉴定表明成功构建p CDH-CMV-oc-stamp的基因重组质粒;将成功构建的p CDH-CMV-oc-stamp质粒转染至293T,可观察到大量绿色荧光表达;将成功包装获得的病毒液感染RAW264.7细胞后q-PCR及Western blotting结果证实OC-STAMP成功过表达。结论成功构建p CDH-CMV-oc-stamp重组质粒及OC-STAMP过表达的稳转细胞系。 袁慧敏 何茳萍 张光亚 张丹丹 陈凤玲关键词:质粒构建 病毒转染 RAW264.7细胞 ABCC8基因突变与新生儿糖尿病关系的研究进展 被引量:3 2017年 由ABCC8基因编码的磺脲类受体1(SUR1)广泛存在于胰岛β细胞、脑和肌肉组织中,它是腺苷三磷酸(ATP)敏感性钾离子通道的组成亚基之一。在胰岛β细胞中,SUR1亚基可以通过调节K_(ATP)通道的活性影响胰岛素的分泌。当ABCC8基因发生激活突变后会导致K_(ATP)通道活动发生异常,从而导致新生儿糖尿病(NDM)。当磺酰脲类药物与SUR1结合后发挥K_(ATP)通道阻滞剂的作用,可以促进胰岛素的分泌。因此,磺酰脲类药物在治疗NDM中具有重要的意义。 朱静 何茳萍 张光亚 张丹丹 陈凤玲关键词:新生儿糖尿病 突变 XBP1在氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡中机制研究 被引量:1 2017年 目的探讨X盒结合蛋白1(XBP1)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡中的机制。方法不同浓度的ox-LDL刺激人巨噬细胞THP-1后,利用Western bolt法检测XBP1表达的变化。ox-LDL刺激THP-1细胞不同时间(6 h、12 h和24 h)后,用Western bolt法检测XBP1表达的变化。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术及基因过表达技术,分别构建XBP1基因干扰与过表达的THP-1细胞系后,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹检测干扰或过表达XBP1基因后对ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡的影响。结果用不同浓度ox-LDL处理THP-1细胞,XBP1表达强度随着ox-LDL诱导浓度的增加而增强。用100 mg/L ox-LDL处理THP-1细胞不同的时间,XBP1表达强度出现时间依赖性的增强。用100 mg/L ox-LDL处理THP-1细胞24 h出现细胞凋亡。ox-LDL诱导巨噬细胞,与对照组CHOP mRNA和C-Caspase-3 mRNA相比,THP-1细胞干扰XBP1基因表达后,CHOP mRNA和C-Caspase-3 mRNA表达水平明显增强(对照组CHOP 31.93±0.21,C-Caspase-3 24.16±1.18;干扰组CHOP 48.30±0.53,C-Caspase-3 39.12±2.75;P<0.01)。ox-LDL诱导巨噬细胞,与对照组CHOP mRNA和C-Caspase-3 mRNA相比,当THP-1细胞过表达XBP1基因后,CHOP mRNA和C-Caspase-3 mRNA表达水平明显减少(对照组CHOP 31.53±0.47,C-Caspase-3 22.23±0.63;过表达组:CHOP 14.79±0.51,C-Caspase-3 10.69±0.29;P<0.01)。结论 XBP1在ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡中起保护性作用,并可能成为治疗动脉粥样硬化的新靶点。 张丹丹 张光亚 何茳萍 朱静 陈凤玲关键词:氧化低密度脂蛋白 凋亡 巨噬细胞 动脉粥样硬化 糖尿病与下丘脑-垂体-肾上腺轴功能关系的系统评价 被引量:5 2016年 目的系统评价糖尿病与下丘脑.垂体.肾上腺(HPA)轴功能的关系,为临床筛查糖尿病患者HPA轴功能提供一定的客观依据。方法检索PubMed、Ovid、Embase、Web of Science文献数据库,筛选糖尿病与HPA轴功能关系的观察性研究。以标准化均数差(SMD)作为合并效应量,采用Stata12.0软件进行met0分析。结果Meta分析结果显示:与对照组相比,糖尿病组、T1DM组、T2DM组、糖尿病伴或不伴慢性并发症组及糖尿病合并高血压组血基础皮质醇水平均较高;糖尿病组地塞米松抑制后血皮质醇显著高于对照组:糖尿病组24hUFC、血ACTH水平较对照组均无显著差异。定性评价发现,糖尿病组与对照组之间清晨唾液皮质醇及皮质醇觉醒反应(CAR)各研究结果存在不一致,多数研究显示糖尿病患者存在CAR水平降低。结论糖尿病患者存在HPA轴功能异常,且存在合并症可能加重HPA轴功能异常。 韩立 潘瑜 何茳萍 柳新燕 李园园 陈凤玲关键词:糖尿病 血皮质醇