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子宫颈上皮内瘤变及鳞状细胞癌组织cyclin D1表达特征及其与HPV16 E7表达的相关性分析被引量：6: 2015年; 目的探讨cyclinD1在宫颈上皮内瘤变及鳞状细胞癌中的表达及其与HPV16E7基因表达的相关性。方法SiHa、Hcc94细胞均为宫颈上皮来源的鳞癌细胞，其中Hcc94细胞的E6／E7基因缺失。采用即时荧光定量PCR、免疫组织化学法检测cyclinD1在子宫颈上皮内瘤变（CIN）及鳞状细胞癌组织中基因及蛋白的表达情况；采用逆转录PCR（RT—PCR）、Westernblot、免疫组织化学方法检测cyclinD1在不同E7表达状态的鳞状细胞癌细胞系的表达情况；设计靶向HPV16E7基因启动子区的siRNA序列，构建质粒转染SiHa细胞，筛选稳定沉默E7基因的细胞系命名为cm-16细胞株；将空质粒转染SiHa细胞，获得空质粒细胞系命名为B3细胞株。用RT—PCR和Westernblot检测E7沉默cm-16细胞cyclinD1基因及蛋白表达情况。结果cyclinD1仅在正常宫颈鳞状上皮副基底细胞中表达，在CIN1、CIN2、CIN3表达降低，在HPV阳性的宫颈鳞状细胞癌中阴性或少量点灶状表达；cyclinD1在E7阳性SiHa细胞中的表达水平较cm-16及Hcc94细胞减低（均P〈0．05）。结论E7高表达的子宫颈癌组织及细胞中cyclinDI低表达，HPVE7基因抑制子宫颈癌cyclinD1表达。; 王平刘珊程波吴西钊丁姗姗武迪许琳石建玲段恋孙锁柱; 关键词：人乳头瘤病毒16 细胞周期蛋白D

siRNA介导的HPV16E6/E7基因沉默对宫颈癌SiHa增殖及凋亡的影响被引量：4: 2015年; 目的探讨小干扰RNA(siRNA)介导的人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因沉默对宫颈癌Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。方法设计靶向HPV16 E6/E7基因启动子区的siRNA序列,构建质粒转染Si Ha细胞,筛选稳定沉默E6/E7基因的细胞系。用QT-PCR和RT-PCR检测细胞E6/E7基因mRNA的变化、Western blot检测细胞E6/E7蛋白变化;利用MTT、RT-PCR、免疫组化法检测细胞增殖情况,Tunel检测细胞的凋亡情况。结果成功构建E6/E7基因稳定沉默的细胞株,其mRNA与蛋白沉降效率明显。MTT及Ki-67表达显示细胞增殖活性降低;Tunel显示沉默细胞凋亡增加。结论 siRNA技术可以成功诱导HPV16型E6/E7基因沉默,从而影响癌细胞的生长、增殖和凋亡。; 王平刘珊程波吴西钊武迪许琳石建玲段恋孙锁柱; 关键词：SIRNA 细胞增殖与凋亡 SIHA细胞

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王平

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