黄鹏
- 作品数：9 被引量：23H指数：4
- 供职机构：上海健康医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学政治法律更多>>
- 人g2型溶菌酶的多克隆抗体制备及其在睾丸中的表达分析被引量：3
- 2016年
- 目的以真核表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,LysG2)为免疫原制备抗LysG2的兔多克隆抗体,检测LysG2在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供线索。方法对LysG2毕赤酵母GS115转化菌株进行高密度培养,甲醇诱导目的蛋白表达并通过甲壳素亲和色谱纯化,以重组蛋白为免疫原制备兔抗LysG2多克隆抗体。通过ELISA检测抗体效价后,对人体各组织、精子及精液标本进行Western印迹分析,并对人睾丸组织进行免疫组化检测。结果以毕赤酵母表达LysG2为免疫原制备的抗体具有高效价,表达谱分析表明LysG2在睾丸中有表达,在精子蛋白提取物中没有检测到其存在,在精浆中检测到了LysG2。免疫组化检测结果显示LysG2在睾丸中主要定位于间质组织的Sertoli细胞。结论本研究成功以真核表达的LysG2制备了该蛋白多克隆抗体,LysG2在睾丸Sertoli细胞有表达,并分泌到精浆中,提示LysG2可能在男性生殖系统先天性免疫中发挥作用。
- 黄鹏杨智昉谢君徐一新鲍建瑛曹晓娥张宁余龙
- 关键词：毕赤酵母多克隆抗体睾丸先天性免疫
- 人精浆中人鹅型溶菌酶2(HLysG2)的纯化及其酶学活性分析被引量：1
- 2017年
- 目的从人精浆中分离纯化天然人鹅型溶菌酶2(HLysG2)并对其酶活性进行分析。方法通过Western blot法检测HLysG2在精液中的分布;分别使用阳离子交换层析、甲壳素亲和层析和分子筛层析技术从精浆中分离目的蛋白并利用Western blot法及质谱分析对其进行鉴定;使用高效液相色谱(HPLC)法分析纯化产物的纯度;使用比浊法测定HLysG2的最适pH值、最适离子浓度、最适温度和标准酶活性;使用克隆形成单位法测定HLysG2的杀菌活性。结果利用Western blot法在精浆中检测到HLysG2的存在;从人精浆中分离到相对分子质量(Mr)约21 500的目的蛋白并通过Western blot法及质谱分析鉴定其为HLysG2。纯化产物纯度达到99.0%以上。在pH6.4,30℃,Na+浓度为0.09 mol/L的条件下,HLysG2最高酶活性达到13 800 U/mg。体外检测显示HLysG2对溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有杀菌作用,但对铜绿假单胞杆菌和大肠埃希菌的杀菌作用不显著。结论使用层析方法可以从人精浆中成功分离纯化到天然HLysG,其在体外具有对Gram阳性菌的杀菌活性,提示其可能在男性生殖系统的先天免疫中发挥作用。
- 黄鹏杨智昉鲍建瑛张宁李文姝
- 关键词：精浆纯化先天性免疫
- “基因编辑婴儿”事件中侵权行为的法律性质分析被引量：6
- 2020年
- "基因编辑婴儿"事件(以下简称"事件")的发生引发了学界对基因编辑技术法律规制问题的广泛关注。在我国相关民法规范体系滞后于基因编辑技术发展的情况下,为了保护事件中被侵权人的民事权益,明确被侵权人提出损害赔偿的请求权基础显得尤为重要。由于我国现行卫生立法并未明确界定"医疗行为"等原因,目前学界对事件中侵权行为的法律性质存在争议,这首先反映在对人类胚胎基因编辑这一行为的法律性质认识模糊。由此将导致司法实践中法院适用法律依据错误,影响侵权损害的认定和评价,使被侵权人不能获得有效的法律救济。以人类胚胎基因编辑为切入点,对事件中侵权行为的法律性质进行了深入辨析。从行为目的角度来看,人类胚胎基因编辑属于临床试验,而不属于医疗行为;同时,人类胚胎基因编辑对于基因编辑婴儿是非治疗性临床试验,对于受试者又是治疗性临床试验。事件中侵权人实施的整体行为是由辅助生殖的医疗行为和人类胚胎基因编辑的临床试验构成,因此事件中的侵权行为包含非法行医和临床试验两种侵权行为。由于事件中的侵权人构成违约责任和侵权责任的竞合,被侵权人可以根据《合同法》或《侵权责任法》的规定择一主张损害赔偿。
- 黄鹏
- 关键词：侵权行为法律性质
- 甲壳素亲和层析在人g2型溶菌酶制备中的应用被引量：6
- 2015年
- 目的制备甲壳素亲和纯化介质,设计有效的纯化技术路线,对毕赤酵母表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,HLys G2)重组蛋白进行纯化。方法研究碱化、稀酸处理、碱化时间、碱浓度等各种因素对甲壳素介质性能的影响;对重组毕赤酵母进行甲醇诱导表达,依次采用亲和层析、阴离子交换层析、透析等方法从发酵液上清中纯化HLys G2,对最终纯化产物的纯度使用HPLC进行测定,杀菌活性使用双层琼脂平板扩散法进行测定。结果经处理后,在常压下甲壳素亲和介质洗脱速度可达4.5 ml/(min·cm2),对HLys G2吸附容量为1.8 mg/ml,总活性的收率为76.5%,得到的HLys G2纯度>99.0%,对溶壁微球菌具有杀灭活性。结论制备的甲壳素亲和介质具有良好性能,以甲壳素亲和层析为中心的纯化方法可有效纯化HLys G2,为规模化制备HLys G2奠定了基础。
- 黄鹏李文姝谢君鲍建瑛曹晓娥徐一新
- 关键词：甲壳素毕赤酵母纯化
- 人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析被引量：7
- 2015年
- 利用毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein6,h Lyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成h Lyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的p PIC9K质粒构建重组表达载体p PIC9K-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,经G418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72 h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经SDSPAGE检测在14.8 k Da处有重组h Lyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定h Lyzl6酶学活性,结果表明h Lyzl6对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适p H为5.5,其酶活力为54 700U/mg,Cu2+对其活性有明显抑制,EC50为30.2799 mg/L。采用基因工程方法首次在毕赤酵母GS115成功表达了重组h Lyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示h Lyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究h Lyzl6的功能和应用开发奠定了基础。
- 黄鹏李文姝谢君鲍建瑛曹晓娥余龙徐一新
- 关键词：毕赤酵母杀菌活性
- “基因编辑婴儿”事件中侵权责任的法律规制被引量：2
- 2022年
- "基因编辑婴儿"事件中有非法临床试验和非法行医均可产生侵权责任。对于受试者知情同意权受损的非法临床试验侵权,可以《民法典》第一千一百六十五条第一款为基础结合第一百零九条要求侵权人承担侵权责任。对于受试者健康权受损的非法行医侵权,可以《民法典》第一千一百七十九条要求侵权人承担侵权责任;在受试者存在严重精神损害的情况下,可以《民法典》第一千一百八十三条第一款要求侵权人承担侵权责任。在非法临床试验侵权责任下,对于基因编辑婴儿人格尊严的损害,可以《民法典》第一百零九条和第一千一百六十五条第一款为基础结合第十六条要求侵权人承担侵权责任;对于基因编辑婴儿健康权的损害,可以《民法典》第一百一十条和第一千一百六十五条第一款为基础结合第十六条要求侵权人承担侵权责任。事件中侵权责任的承担方式为赔偿损失和赔礼道歉,损害赔偿的范围包括财产性损失和非财产性损失。受试者的财产性损害可依据损益相抵规则确定,基因编辑婴儿的健康损害风险产生的财产性损害目前在评价上存在困难。如果受试者和基因编辑婴儿的精神损害造成严重后果或达到严重程度,可要求侵权人承担精神损害赔偿责任。
- 黄鹏于莹
- 关键词：侵权责任非法行医
- 人源类溶菌酶蛋白6在男性生殖系统中的表达被引量：3
- 2016年
- 目的:检测人源类溶菌酶蛋白6(LYZL6)在男性生殖系统中的表达情况,以揭示其可能的生理功能。方法:将整合LYZL6编码基因的毕赤酵母菌株进行高密度培养,甲醇诱导表达后甲壳素亲和色谱纯化。采用双层琼脂平板扩散法观察重组LYZL6的杀菌活性。以纯化的重组蛋白为免疫原制备兔抗LYZL6多克隆抗体,ELISA检测抗体效价。通过Western印迹检测LYZL6蛋白在人各组织及精液中的分布,并采用免疫组化法确认LYZL6在人睾丸中的表达情况。结果:在低p H条件下重组LYZL6对溶壁微球菌杀菌活性较高。以重组LYZL6为免疫原制备的抗体具有高效价,Western印迹检测表明LYZL6仅在睾丸和附睾中表达,且睾丸表达水平较高。在人精子蛋白提取物中检测到了LYZL6,精浆中并未检测到明显蛋白条带。免疫组化检测显示在睾丸组织中,LYZL6定位于晚期精母细胞及圆形精子细胞。结论:在低p H条件下,重组LYZL6具有较强的溶解细菌细胞壁的能力;LYZL6被睾丸上皮分泌后结合于精子上,提示LYZL6有可能在精卵融合过程的某个环节发挥作用。
- 黄鹏李文姝杨智昉徐一新鲍建瑛曹晓娥周培华李堃余龙
- 关键词：毕赤酵母真核表达杀菌活性多克隆抗体
- 人源类溶菌酶蛋白4的多克隆抗体制备及其表达分析被引量：4
- 2017年
- 目的:以原核表达的人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)为免疫原制备多克隆抗体,检测LYZL4在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供依据。方法:将LYZL4编码基因克隆于原核表达载体pET32a,IPTG诱导重组LYZL4(r LYZL4)表达。分别使用Ni-NTA树脂和甲壳素亲和层析纯化rLYZL4,采用双层琼脂平板扩散法检测杀菌活性。以Ni-NTA树脂纯化产物为免疫原制备兔抗rLYZL4多克隆抗体,通过ELISA测定抗体效价,Western印迹检测抗体特异性后,检测LYZL4蛋白在人体各组织的分布及其在精子和精浆中存在情况,免疫组化确认LYZL4在人睾丸组织中的定位。结果:原核表达系统可有效表达rLYZL4,其对溶壁微球菌及大肠杆菌无杀灭活性。制备的兔抗rLYZL4多克隆抗体具有很高的效价和特异性,在睾丸、附睾及人精子蛋白提取物中可检测到LYZL4存在,在生精小管中,LYZL4定位于圆形精子细胞及长形精子细胞的顶体上。结论:本研究成功以原核表达的rLYZL4制备了该蛋白的多克隆抗体,确认LYZL4在睾丸和附睾有表达,并定位于精子顶体上,提示其可能与顶体结构或功能相关。
- 黄鹏杨智昉徐一新鲍建瑛张宁曹晓娥李文姝
- 关键词：原核表达系统多克隆抗体睾丸精子
- 生殖性人兽混合体培育的刑事规制研究被引量：2
- 2022年
- 目前国际上普遍采用刑事规制模式禁止开展生殖性人兽混合体培育,我国现行刑法制度存在一定滞后,有必要明确其刑事规制路径。生殖性人兽混合体培育行为可侵害多种社会法益和个人法益,前者包括人的尊严、生物安全和公共卫生管理秩序,后者包括子代和代孕者的生命健康安全。各种具体生殖性人兽混合体培育行为的社会危害性不同,应分别处理:将兽人胞质杂交体胚胎植入人体或动物体内的行为应以非法植入基因编辑、克隆胚胎罪定罪处罚,将嵌合体胚胎植入人体内的行为应以非法行医罪定罪处罚,将嵌合体胚胎植入动物体内的行为不具有刑事可罚性。
- 黄鹏
- 关键词：刑事规制
