周智敏
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学林学院更多>>
- 发文基金：国家林业公益性行业科研专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2015年
- 【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证和Western Bolt结果与ZP3基因的理论长度一致。【结论】首次构建了草兔ZP3基因真核表达载体并成功在真核细胞中表达重组ZP3蛋白。
- 吴景龙隋丹丹张冬辉周智敏李昊郑雪莉韩崇选
- 关键词：草兔免疫不育PEGFP-N1真核表达
- 草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达
- 2016年
- 哺乳动物卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗卵透明带蛋白抗体可以有效阻碍精卵结合。为了探究草兔卵透明带2(zona pellucida 2,ZP2)蛋白抗原性,以及定位抗原表位。根据GenBank上欧洲兔的卵透明带2基因序列,设计5′端磷酸化的反转录引物用于合成特异cDNA作为模板,通过普通PCR扩增草兔ZP2基因。测序获得的2 184bp序列比对成功后,预测其信号肽和跨膜区域分别位于ZP235-56和ZP2698-717。将克隆获得954bp的hZP2基因连入pET-28a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了重组原核表达载体pET-28a-hZP2后转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21。重组的E.coli BL21经诱导后表达41.17kD可溶性的hZP2融合蛋白,经优化诱导表达体系后,确定较好的诱导条件是37℃下0.7mmol·L-1 IPTG诱导15h。经Western blot鉴定,结果表明相对于表达ZP2大片段基因,hZP2融合蛋白表达量明显提高。
- 周智敏韩崇选
- 关键词：卵透明带草兔抗原表位
- 表达草兔卵透明带2和3基因的分析
- 草兔啃食破坏农作物及苗木,随着数量剧增,危害我国生态系统并损害人类的利益,因此被视为有害脊椎动物。合适的生殖相关抗原将有利于实现免疫不育控制草兔数量。哺乳动物的卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗体可以有效阻碍精卵结合。...
- 周智敏
- 关键词：卵透明带同源重组
- 花鼠乳酸脱氢酶C基因cDNA的克隆、分析及原核表达
- 2015年
- 为研究花鼠乳酸脱氢酶C(lactate dehydrogenase C,LDH-C)对花鼠免疫不育控制的影响,以花鼠睾丸c DNA为模板,通过RT-PCR技术得到花鼠LDH-C基因c DNA编码区,并进行序列分析,构建花鼠LDH-C的原核表达载体,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法对表达产物进行鉴定。结果显示:扩增出的c DNA片段为999 bp,编码332个氨基酸,含有完整的开放阅读框;负电荷残基与正电荷残基均为36个;预测蛋白质分子量为37k D,理论等电点为7.04,无信号肽和跨膜区,推测其是一种非分泌、疏水性蛋白。α螺旋、无规则卷曲以及延伸链是s LDH-C蛋白二级结构的主要成分。重组菌在IPTG诱导下获得了约37 k D带有His-Tag的目的蛋白。
- 李昊韩崇选张冬辉周智敏
- 关键词：花鼠克隆
