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超声联合微泡介导pEGFP-N1-wt-p53基因转染膀胱癌细胞对其生物学行为的影响: 目的：　　利用前期实验获得的最佳超声辐照参数介导pEGFP-N1-wt-p53基因转染体外膀胱癌T24细胞，进一步优化质粒与脂质体混合比例，获得较理想的转染率并检测细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭等生物学特性，为膀胱癌的基因治...; 王瑶; 关键词：膀胱癌超声微泡 T24细胞

真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP的构建及高效转染细胞的筛选: 2022年; 为了构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP,并筛选出Lipofectami{1}e 2000介导的高效转染细胞,本试验将柔嫩艾美尔球虫假定蛋白(Et HP)基因扩增后插入真核荧光表达载体pEGFP-N1,构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP;测序成功后,用Lipofectami{1}e 2000介导pEGFP-N1-Et HP转染4种细胞即Vero、DF-1、BHK、HD-11;用Wester{1} blot检测确定Et HP蛋白在4种细胞内的表达,并观察转染48 h后荧光表达情况,计算5个视野内带有绿色荧光的细胞数占细胞总数的比例,从而比较质粒与Lipofectami{1}e 2000比例不同时4种细胞的转染效率[转染效率/%=(带有绿色荧光的细胞数/细胞总数)×100%]。测序结果显示,pEGFP-N1-Et HP构建成功。Wester{1} blot检测显示,Et HP蛋白在4种细胞中均成功表达;荧光显微镜观察到4种细胞转染后48 h均出现绿色荧光,表明重组质粒pEGFP-N1-Et HP成功表达。通过转染效率的比较,发现DF-1细胞转染效率均显著高于其他细胞(P<0.05);当质粒与Lipofectami{1}e 2000比例为1∶2时,DF-1细胞转染效率最高。因此,重组质粒pEGFP-N1-Et HP可高效转染DF-1细胞。本试验结果为进一步探索Et HP蛋白在柔嫩艾美尔球虫入侵寄生过程中的生物学功能提供有效的试验工具。; 郭许情王黎霞张榕珍张健张天宇石梦云王诗琪赵小涵张建军安健; 关键词：转染效率

超声联合微泡介导pEGFP-N1-wt-p53基因转染膀胱癌T24细胞的实验性研究: 目的：　　（1）利用正交实验设计法对超声声强、微泡/细胞悬液体积比、占空比、辐照时间进行参数优化，确定不同超声参数对膀胱癌T24细胞膜通透性的影响，为超声联合微泡基因传染膀胱癌细胞奠定实验基础。　　（2）采用超声联合微泡...; 张慭; 关键词：膀胱癌细胞通透性超声微泡基因转染

pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用。本发明的pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体的序列具有SEQ ID NO:1所示的序列。该pEGF...; 黄志刚欧阳平杜进林潘海燕于海兵黄明元李华文林博德何荣威张诗茁; 文献传递

pEGFP-N1-IRF3a重组质粒通过调节STAT1的活化诱导非小细胞肺癌细胞的凋亡被引量：1: 2020年; 干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)在固有免疫激活的过程中发挥重要作用,其中IRF3a是由IRF3可变剪接形成的一个亚型,目前几乎没有研究报道该蛋白对肿瘤细胞凋亡的影响。在该研究中,首先通过qRT-PCR检测IRF3a基因在肺癌组织以及癌旁组织中的表达水平;然后通过PCR从人外周血细胞中获取IRF3a基因,与质粒pEGFP-N1成功构建重组质粒pEGFP-N1-IRF3a。重组质粒转染非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549、H1299后,细胞凋亡比例明显升高,cleaved caspase8、cleaved caspase3水平也显著升高。此外,过表达IRF3a能激活STAT1,以p-STAT1抑制剂Nifuroxazide抑制STAT1的活性能显著抑制IRF3a诱导的细胞凋亡。因此,该研究成功构建了pEGFP-N1-IRF3a重组质粒,并进一步证明了IRF3a通过激活STAT1诱导NSCLC细胞的凋亡。; 易亮吴艳萍韩倩杨云梅

pEGFP-N1介导BTI的表达抑制肝癌HepG2细胞迁移及细胞周期进程被引量：1: 2020年; 荞麦是一种药食同源的粮食作物,研究发现荞麦胰蛋白酶抑制剂(BTI)可以抑制肿瘤细胞的增殖。该文采用激光共聚焦显微镜、MTT法、划痕法、流式细胞术、qRT-PCR、Western blot等方法检测了pEGFP-{1}1介导的BTI在HepG2细胞内的表达对细胞的生长、黏附、迁移、凋亡及细胞周期的作用。结果显示,pEGFP-{1}1介导的BTI在HepG2细胞内的表达显著抑制了细胞生长、黏附和迁移,并使HepG2细胞凋亡率增加。同时E-钙黏蛋白的表达水平增高,MMP-2和MMP-9的表达下降。伴随着p53、p21、p63、p73的上调表达,周期蛋白CyclinD1、CyclinE1和周期依赖性激酶(CDK2、CDK4、CDK7)的表达下调,细胞周期阻滞在G1期。; 李玉英白崇智; 关键词：肝癌细胞周期迁移基质金属蛋白酶

pEGFP-N1-IL-17通过调控Fas/FasL信号通路影响喉癌Hep-2细胞的凋亡被引量：4: 2019年; 目的:研究重组质粒白介素17(pEGFP-N1-IL-17)对喉癌细胞(Hep-2细胞)凋亡的影响,阐述pEGFP-N1-IL-17通过Fas/FasL信号通路抑制Hep-2细胞凋亡的机制。方法:设置未转染的Hep-2细胞为空白对照组,pEGFP-N1-NC转染的喉癌Hep-2细胞为阴性对照组,pEGFP-N1-IL-17转染的喉癌Hep-2细胞为实验组。qRT-PCR、Western blot实验用来检测IL-17在Hep-2细胞的表达水平,成功构建了IL-17过表达载体。用Western blot检测空白对照组、阴性对照组、实验组中Fas、FasL、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8蛋白的表达情况。用流式细胞仪检测空白对照组、阴性对照组、实验组细胞的凋亡率。结果:IL-17过表达载体转染喉癌Hep-2细胞后,qRT-PCR检测IL-17表达水平上调数倍。与阴性对照组相比,空白对照组Fas、FasL、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8蛋白表达无明显差异。与阴性对照组相比,实验组喉癌Hep-2细胞内Fas、FasL、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。空白对照组、阴性对照组的细胞凋亡率没有明显变化。与空白对照组相比,实验组的喉癌Hep-2细胞的凋亡率有明显降低。结论:IL-17可能通过Fas/FasL信号通路来抑制喉癌Hep-2细胞凋亡。; 张红健宋杨杨明季加标杨见明; 关键词：喉癌细胞

pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达: 2019年; 目的构建pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,鉴定并检测其在HEK293细胞中的表达。方法根据去泛素化酶BRCC3(人的同源物称为BRCC36)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,利用RT-PCR从小鼠脑组织中提取BRCC3全长基因作为目的DNA片段,选择HindⅢ/SalⅠ内切酶将目的片段与pEGFP-N1真核表达载体进行双酶切,然后用T4连接酶连接,导入大肠杆菌经过转化、抗性筛选、质粒提取等过程获得融合的重组质粒,并再次双酶切电泳后初步筛选出可能正确的重组质粒,进而寄送公司进行DNA测序分析,通过DNAMAN软件比对,鉴定出目的基因BRCC3成功插入pEGFP-N1的重组质粒,以脂质体介导法转染HEK293细胞,通过Western blot检测BRCC3蛋白的表达。结果 DNA测序结果显示,pEGFP-N1-BRCC3重组质粒中目的DNA序列及方向完全正确,开放阅读框正确无误,表明重组pEGFP-N1-BRCC3质粒构建成功,将其转染HEK293细胞后,Western blot检测BRCC3蛋白表达明显增加。结论成功构建了pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,并能在HEK293真核细胞中有效表达,为深入研究BRCC3基因在神经生物学领域的功能提供了实验基础。; 程芯育钟海凤徐绍业张聪慧韦睿妮邵晓云; 关键词：绿色荧光蛋白基因重组真核表达质粒

pEGFP-N1-IL-17通过调控FAS/FASL信号通路影响喉癌Hep-2细胞的凋亡: 目的：　　研究pEGFP-N1-IL-17对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响，阐述pEGFP-N1-IL-17通过Fas/FasL信号通路然后抑制喉癌Hep-2细胞凋亡的机制。　　方法：　　设置正常的喉癌Hep-2细胞为空白...; 张红健; 关键词：喉癌 HEP-2细胞

一种pEGFP-N1-CXXC4真核表达质粒、构建方法及其应用: 本发明涉及一种pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒、构建方法及其应用，包括：pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒，在pEGFP‑N1质粒中，含有CXXC4核苷酸序列，序列如SEQ ID NO:1所示；构建该质粒需...; 施玲飞周佳厉民王峥; 文献传递

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