王立荣
- 作品数：30 被引量：138H指数：9
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人生长激素基因在小鼠体内的表达被引量：2
- 1998年
- 本文报道了含人生长激素ｈＧＨｃＤＮＡ的重组真核表达质粒的构建及其直接注射后在小鼠体内的表达水平。构建含ＣＭＶ晚期启动子的重组真核基因表达质粒Ｒｃ／ＣＭＶＧＨｃＤＮＡ，以阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ和Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ分别包裹后直接多点注射于小鼠后肢肌肉组织，并用ＲＴＰＣＲ及免疫放射检测分析法（ＩＲＭＡ）分别在转录水平及蛋白水平检测到了ｈＧＨｃＤＮＡ的表达。其中，单纯质粒直接注射后所检测到的最长表达期限为９０天。与之相比，以阳离子脂质体包裹质粒后再注射的表达效率更高，且Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ的作用强于Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ。结果表明，以高效重组真核表达质粒Ｒｃ／ＣＭＶＧＨｃＤＮＡ直接，或用阳离子脂质体包裹后多点肌注，是使外源目的基因ｈＧＨｃＤＮＡ在小鼠体内表达的简便。
- 郑润马龙刘亮刘敬忠王立荣
- 关键词：生长激素基因转移阳离子脂质体RT-PCR
- 从单个细胞扩增靶基因片段的技术被引量：2
- 2002年
- 目的 建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术。方法 利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞 ,各置于 0 2ml簿壁反应管的裂解液中 ,合成针对抑癌基因P53第5～ 9外显子 (e)的引物 ,运用 1 5mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增 ,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应 (PCR)扩增P53基因第e5～ 9的 1 90 0bp片段及含第 5 ,6外显子的 580bp片段。并用ABI 377测序仪测定其序列。结果 运用稀释至 0 0 1ng的基因组DNA扩增 1 90 0bp片段 ,优化PCR的条件。分别从 30个单个纤维母细胞扩增上述 1 90 0bp片段 ,1 0个获得 1 90 0bp片段 ,成功率为 33 %。扩增 580bp片段 ,则阳性率可达 60 %。序列分析证明确为人P53基因第 5 ,6外显子序列。结论 运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段 ,并测定其序列 。
- 刘敬忠王立荣
- 关键词：巢式聚合酶链反应基因扩增单细胞基因诊断
- 变性高效液相色谱法检测中国南方和东南亚人群常见缺失与突变型α-地中海贫血被引量：2
- 2011年
- 目的针对中国南方和东南亚人群α-地中海贫血常见缺失与点突变类型，建立一种简便、准确与快速的两管PCR结合变性高效液相色谱检测方法。方法双重聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）结合变性高效液相色谱（denaturinghighperformanceliquidchromatography，DHPLC）分析，联合改进型一管PCR结合DHPLC方法，对160份临床标本中α珠蛋白基因的3种常见点突变与3种缺失进行检测。结果用一管双重PCR—DHPLC和改进型一管PCR—DHPLC分析法分别检测了α珠蛋白基因常见的3种点突变与3种缺失，检测结果与临床现行方法相符。结论改进的检测方法可同时检测中国南方和东南亚人群α-地中海贫血的常见缺失与点突变，具有准确、快速、半自动化及经济等特点，适用于规模化的临床筛查与检测。
- 贾兴元卫小静唐宁王立荣韩瀚郑梅玲蔡稔肖白刘敬忠
- 关键词：Α-地中海贫血变性高效液相色谱聚合酶链反应分子诊断
- SYBR-GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析技术在α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR(SYBR-PCR)结合融解曲线分析(D.C)技术进行α-珠蛋白生成障碍性贫血(α-地贫)基因诊断的价值。方法对22个家系中的37份样品采用4管SYBR-PCR结合D.C进行--SEA、-α3.7,-α4.2及非缺失型(αα)4个等位基因型的检测,进而作出基因诊断。同时运用单管多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。结果22个家系中6个家系检出有--SEA或-α3.7携带者,其中东南亚型缺失携带者(--SEA/αα)7例,右侧缺失携带者(-α3.7/αα)3例,东南亚型缺失与右侧缺失双重杂合子(--SEA/-α3.7)1例。2例为胎儿产前诊断。其中1例为Bart′s水肿胎儿(--SEA/--SEA),另1例为东南亚型缺失携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。结论SYBR-PCR结合D.C技术在α-地贫的基因诊断、携带者检出及产前诊断方面具有实用价值。
- 闫梅梁燕王立荣王战勇肖白刘敬忠
- 关键词：实时荧光聚合酶链反应基因诊断产前诊断
- 唐氏综合征患者永生细胞系的建立
- 目的建立唐氏综合征患者永生细胞系,为唐氏综合征的基因诊断提供标准品。方法采集唐氏综合征患者的外周血样品,采用 EB 病毒转化技术,把患者外周血 B 淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系;用细胞遗传学方法、实时荧光定量 PCR ...
- 肖白雷箴袁海昕范新萍吴燕贾兴元高斌闫梅王战勇刘敬忠钮淑兰戚豫王立荣
- 关键词：唐氏综合征基因诊断永生细胞系
- 用SYBR-GreenⅠ实时荧光PER结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血被引量：7
- 2007年
- 目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Greenl进行两个实时荧光聚合酶链反应（real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1，SYBR-PCR），检测左缺（-α^4.2）、右缺（-α^3.7）等位基因，同时进行融解曲线（dissociation calve，DC）和Tm（melting temperature）值分析。PCR产物重组到pCR2．1，重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度，确定两种等位基因型（-α^4.2，-α^3.7）的检测下限，并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α^4.2和-α^3.7的PCR产物长度分别为1．65kb、1．9kb，Tm分别为（81．5±0．5）℃、（82．5±0．5）℃，检测下限分别为9×10^2个拷贝、4．3×10^2个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Greenl实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α^4.2、-α^3.7、αα（包括α^Tα）及--^SEA4种等位基因，从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高，不需荧光标记探针，成本低，易质控，防污染，高通量等优点，适于临床推广应用。
- 闫梅王立荣王战勇周艳梁燕肖白刘敬忠
- 关键词：实时聚合酶链反应Α-地中海贫血
- PCR产生异源双链DNA及其在检测基因缺失型β地中海贫血中的应用被引量：1
- 1991年
- 刘敬忠王生王立荣吴冠芸
- 关键词：异源双链地中海贫血聚合酶链反应
- 运用单管多重聚合酶链反应检测海南黎族人群中三种缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因被引量：11
- 2004年
- 目的 建立单管多重聚合酶链反应 (mPCR)技术并将其运用于筛查海南黎族人群中 3种最常见的缺失型α 珠蛋白生成障碍性贫血基因 (α 地中海贫血基因 ,简称α 地贫基因 )。方法 在研究成功检测 3种α 地贫基因 ,即 SEA、-α3 .7、-α4.2 的 3个PCR反应的基础上 ,建立并优化单管mPCR反应的条件 ,检测了 4 0例已知基因型的α 地贫患者基因 ,并筛查、诊断了 116份海南黎族人血标本。结果 运用新建立的单管mPCR检测 4 0例α 地贫患者DNA ,所得基因型与运用 3个分别的PCR技术及Southern印迹杂交技术所得到的结果一致。在 116份海南黎族人中 ,检出 -α3 .7和 -α4.2缺失型基因的携带频率高达 38.0 % ,且 -α4.2 稍高于 -α3 .7。但在该组标本中没测到 SEA。结论 单管mPCR技术准确率及灵敏度都很高 ,且简便易行。海南黎族人群 -α3 .7和 -α4.2 携带频率居国内最高。
- 刘敬忠欧采莹王立荣肖白黄莉嘉周艳陈历昌
- 关键词：聚合酶链反应黎族人群基因缺失常染色体隐性遗传病
- α地中海贫血的基因诊断及产前诊断研究被引量：7
- 2005年
- 目的建立同时检测中国人中最常见的3种α地中海贫血(地贫)基因缺失的单管多重PCR(mPCR)技术,并运用于河北省一个α地贫家系的基因诊断与产前诊断。方法mPCR包含7条引物,运用mPCR、凝胶电泳及DNA测序技术进行α地贫的基因诊断和胎儿羊水细胞DNA的产前基因诊断。结果运用mPCR技术检测了42份α地贫患者DNA标本,证明其能准确、灵敏、快速、简便地诊断出完整的α珠蛋白基因型。查明河北省1例α地贫患儿为--SEA和HbCS双重杂合子,该家系第2胎胎儿羊水细胞DNA检查证明为完全正常胎儿,产后检测与产前诊断结果相符。结论所建立的α地贫基因诊断mPCR技术可用于3种缺失型α地贫的快速诊断和产前诊断。我国北方也有少量散在α地贫患者及家系,应引起重视,以免贻误诊断和治疗。
- 刘敬忠王立荣黄莉嘉肖白周艳
- 关键词：产前诊断基因诊断Α地中海贫血羊水细胞凝胶电泳DNA测序技术
- 运用实时荧光PCR技术诊断Bart’s水肿胎儿及——SEA携带者
- 目的运用新近建立成功的高度自动化的实时荧光 PCR 技术结合融解曲线分析进行α-地中海贫血基因诊断,携带者检查。方法运用 SYBR Greenl 进行4个实时荧光 PCR(SYBR-PCR),同时进行融解曲线分析(D．C...
- 闫梅王战勇梁燕范新萍肖白刘敬忠孙念怙王立荣
- 关键词：Α-地中海贫血实时聚合酶链反应基因诊断
