杜晓丹
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 超滤离心法降低重组人脱细胞真皮基质牛血清白蛋白残留量检测中基质效应的实验研究
- 2008年
- 目的探讨采用超滤离心法减少重组人脱细胞真皮基质(recombination humana cellular dermal matrix,rhADM)样品浸提液对ELISA方法检测牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)残留量的基质效应。方法清洗rhADM后,制备rhADM生理盐水浸提液。取超滤离心管若干,分别加入1mg/mL BSA溶液(预饱和方式1,记作PR1)、10μg/mLBSA溶液(预饱和方式2,记作PR2)和rhADM浸提液2mL(记作rhADM1和rhADM2),1500×g离心20min,重复操作3次后取出离心管内管,放入未使用的15mL离心管中,在PR1和PR2管中加入10μg/mLBSA溶液4mL,rhADM管中加入rhADM浸提液4mL,同上法离心后,收集滤液。用ELISA法测定BSA含量。计算不同预饱和方式下10μg/mLBSA溶液的BSA回收率(以未经处理的10μg/mLBSA溶液作为基础样品,分别记作R10和R20);计算滤液稀释倍数的对数与测定吸光度(A)值的相关系数,并与未经超滤离心处理的浸提液检测结果进行比较。结果采用预饱和方式1处理后,PR1BSA浓度为(23.80±1.58)μg/mL,R10为(9.04±0.24)μg/mL,BSA回收率为263.4%±16.9%。采用预饱和方式2处理后,PR2BSA浓度为(8.64±0.24)μg/mL,R20为(8.12±1.01)μg/mL,BSA的回收率为106.5%±3.0%。预饱和方式2的回收率符合检测要求。不同预饱和方式下BSA回收率差异有统计学意义(P<0.01)。经超滤离心处理后,滤液稀释倍数的对数与A值之间的相关性明显提高,相关系数由—0.727提高至—0.960。超滤处理后的相关系数符合检测要求。结论超滤离心处理可以有效减少rhADM样品浸提液的基质效应对BSA残留量检测的影响;样品浸提液自身对超滤离心管的预饱和处理,可得到较为理想的BSA回收率。
- 方玉杜晓丹奚廷斐冯晓明
- 关键词：基质效应
- BSA作为动物源性医疗器械细胞免疫检测阳性对照物的研究被引量：2
- 2010年
- 目的：目前国内外尚无针对动物源性医疗器械的免疫原性评价的统一标准。本研究参照ISO10993—20《医疗器械免疫毒性实验原则和方法》以及ASTM相关标准,如ASTMF1905-98《材料致免疫毒性测试方法选择标准规范》等,通过淋巴细胞增殖试验对BSA作为细胞免疫检测阳性物的相关技术问题进行了初步的研究,包括免疫剂量、免疫方式、取材时间等。为动物源性医疗器械的免疫原性评价实现标准化积累数据。方法：①实验动物：雌性BALB/c小鼠,8周。②免疫方式及免疫剂量：皮下注射高、中、低3个剂量的BSA（1000,500,100μg·mL^-1）或BSA与佐剂等量混合物,免疫2-3次,每次间隔2周。③淋巴细胞增殖试验：于不同时间点无菌取脾,分离脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验。结果：①以BSA单独免疫小鼠,各剂量组OD值与阴性对照组比较差异均无统计学意义。②以BSA混合佐剂免疫小鼠,中、高剂量组OD值明显高于阴性对照组（p〈0.05）,且呈一定的剂量相关。③2次免疫后2周、3次免疫后2周BSA混合佐剂组OD值均明显高于阴性对照组（p〈0.05）。结论：将BSA与弗氏佐剂等量混合,以剂量为50-100μg·只^-1的BSA注射至小鼠皮下,每次间隔2周,2次或3次免疫后2周取材行淋巴细胞增殖试验可获得明显的阳性结果。
- 杜晓丹方玉奚廷斐王春仁
- 关键词：牛血清白蛋白细胞免疫
- 胶原类医疗器械产品的免疫原性研究
- 胶原材料经常应用于瓣膜、支架、组织修复等与人体重要部位接触的体内、体外用途,因此使用过程中是否会对人体的免疫系统产生影响是这类产品应用于临床的一项重要安全性指标。虽然国家对此类产品提出了免疫原性检测的要求,可是到目前为止...
- 杜晓丹
- 关键词：胶原免疫原性细胞免疫体液免疫
- 文献传递
- 硅凝胶植入小鼠淋巴细胞表型的变化被引量：1
- 2008年
- 背景:硅凝胶乳房植入体在长期的使用中一直存在着与自身免疫性疾病之间是否存在因果联系的争议,尚需对其进行免疫学上的评价。目的:通过分析硅凝胶植入后小鼠淋巴细胞表型的变化,探讨其对免疫系统的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/09中国药品生物制品检定所医疗器械检测中心实验室完成。材料:6～8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠50只,随机分成5组:阴性对照组、阳性对照组、硅凝胶低、中、高剂量组,10只/组。硅凝胶填充人工乳房植入体成品为深圳维恩杰科技有限公司产品。方法:阴性对照组皮下注射磷酸盐缓冲液;阳性对照组皮下注射与福氏完全佐剂1∶1混合的BSA溶液;硅凝胶低、中、高剂量组先将人工乳房植入体成品中充填的硅凝胶在无菌条件下分装入注射器中,在小鼠背部皮肤穿刺后接注射器分别注入硅凝胶0.6,1.2,1.8mL。材料植入28d后,分离小鼠脾脏制备脾淋巴细胞悬液,调整细胞浓度至1×109L-1。主要观察指标:流式细胞仪检测淋巴细胞表型及表型频数。结果:与阴性对照组比较,硅凝胶低、中、高剂量组各淋巴细胞表型参数均值差异均无显著性意义(P>0.05)。代表T淋巴细胞的CD3+,CD4+,CD8+频数分析结果显示,硅凝胶低、中、高剂量组分别有4,3,6例样本超出阴性对照组均值±2SD范围,并分别有2,3,4例样本超出阴性对照组均值±3SD范围。结论:硅凝胶植入28d后,BALB/c小鼠脾淋巴细胞表型统计学分析无显著差异,但对频数分析结果有一定影响,提示硅凝胶对免疫系统可能产生影响。
- 郭婷婷奚廷斐方玉杜晓丹万子义
- 关键词：硅凝胶淋巴细胞表型人工乳房植入体
- BSA作为动物源性医疗器械细胞免疫检测阳性对照物的研究
- 目的：本研究参照ISO10993-20《医疗器械免疫毒性实验原则和方法》以及ASTM相关标准，如ASTMF1905-98《材料致免疫毒性测试方法选择标准规范》等，通过淋巴细胞增殖试验对BSA作为细胞免疫检测阳性物的相关技...
- 杜晓丹方玉奚廷斐王春仁
- 关键词：牛血清白蛋白细胞免疫
- 文献传递
- ELISA法检测组织工程产品中残留牛血清蛋白含量被引量：4
- 2008年
- 目的探讨定量检测牛血清白蛋白(Bull serum albumin,BSA)酶联免疫试剂盒用于组织工程医疗产品(Medical products of tissue engineering,TEMPs)残留BSA检测的适用性,以及清洗程序对产品BSA残留量的影响。材料和方法检测了三种组织工程医疗产品(组织工程骨、组织工程肌腱以及组织工程角膜贴片)中BSA的残留量,并比较了经不同清洗程序清洗后角膜贴片中残留BSA含量。结果(1)组织工程骨、组织工程肌腱以及组织工程角膜贴片中BSA残留量分别为31.8ng/ml,4.9ng/ml和低于2.5ng/ml,且测定值与其稀释倍数呈正相关;(2)生理盐水及无血清的MEM培养基平均OD值与试剂盒中零浓度标准品接近,表明生理盐水或无血清MEM作为样品浸提介质对最终的实验结果无明显影响;(3)样品复孔比均小于1.24,符合试剂盒有效性要求。经清洗程序2处理后,角膜贴片中残留BSA较清洗程序1明显减少。结论(1)该试剂盒适用于组织工程医疗产品中BSA残留量的检测。(2)对于组织工程医疗产品而言,不同的清洗程序对BSA的残留量有非常明显的影响。生产商应根据其预期用途制定有效的清洗程序,并在说明书中给予足够的阐述。
- 方玉冯晓明奚廷斐陈震杜晓丹
- 关键词：牛血清白蛋白酶联免疫法
- 动物源性胶原的生产、应用及其免疫原性被引量：9
- 2008年
- 胶原材料具有生物力学性能好,免疫原性低等特点,被制造成为各种生物医学材料,在医疗器械产品制造领域有着不可替代的优势和相当广泛的应用。不同加工方法可以生产不同种类的胶原,虽纯胶原免疫原性较低,但要通过对实际生产过程的严格控制才能达到动物源性胶原的人用标准。胶原材料应用范围极其广泛,优势明显,但也存在许多不足之处。介绍动物源性胶原的结构、来源、特点、生产、应用及免疫原性,最后对现今胶原研究中存在的问题亦即发展方向予以指出。
- 杜晓丹方玉奚廷斐郭婷婷
- 关键词：胶原免疫原性生物材料
