孔清
- 作品数：22 被引量：46H指数：4
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白细胞介素-17通过促进巨噬细胞分泌白细胞介素-27参与小鼠病毒性心肌炎的发生被引量：9
- 2014年
- 目的 探讨白细胞介素（interleukin,IL）-17在病毒性心肌炎（VMC）小鼠发病中的作用.方法 IL-17A基因敲除（IL-17A-deficient,IL-17A-/-）小鼠和野生型（wild-type,WT） BALB/c小鼠分别腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）建立小鼠VMC模型,于注射病毒后第7天,苏木素伊红染色（HE）观察心肌组织形态,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测心肌组织中IL-27 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验检测心肌组织IL-27蛋白的表达水平.此外,WT小鼠感染病毒1周后分离提取脾脏淋巴细胞及腹腔巨噬细胞,用0和25 ng/ml重组IL-17（rIL-17）培养淋巴细胞24 h,用0和10 ng/ml rIL-17培养巨噬细胞48 h,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应测定培养的淋巴细胞及巨噬细胞中IL-27 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验检测淋巴细胞、巨噬细胞培养上清液中IL-27的蛋白表达水平.结果 IL-17A-/-小鼠感染病毒后心肌炎症程度轻于WT小鼠（病理积分为0.9±0.3比1.9±0.5,P＜0.05）,且IL-27蛋白的表达水平及IL-27亚基p28 mRNA相对表达量均低于WT小鼠[（72±18） pg/ml比（95±25） pg/ml和1.11 ±0.24比3.10±0.80,P均＜0.05].25 ng/ml rIL-17培养的淋巴细胞中IL-27 p28 mRNA相对表达量及蛋白含量与0 ng/ml rIL-17培养的淋巴细胞比较差异均无统计学意义[分别为1.32±0.21比1.02±0.13和（52±11） pg/ml比（49±9）pg/ml,P均＞0.05].10 ng/ml rIL-17培养的巨噬细胞中IL-27 p28 mRNA相对表达量及蛋白表达水平均明显高于0 ng/ml rIL-17培养的巨噬细胞[分别为8.5±3.1比2.2±0.7和（368±95） pg/ml比（150±38）pg/ml,P均＜0.05].结论 在VMC小鼠中,IL-17促进了IL-27的表达,巨噬细胞可能是IL-17调节IL-27产量的重要靶细胞之一,而淋巴细胞可能与此无关.促炎因子IL-17与抑炎因子IL-27可能参与了VMC的发病机制.
- 孔清高梦莎薛贻敏潘晓芬赖文盈伍伟锋
- 关键词：心肌炎白细胞介素-17白细胞介素-27
- 白细胞介素17A对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心肌纤维化的影响被引量：8
- 2013年
- 目的探讨白细胞介素17A(interleukin-17A,IL-17A)对小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)心肌纤维化的影响。方法将100μL柯萨奇病毒B3(coxsackie-virus B3,CVB3)分别感染BALb/c小鼠野生型(wild-type,WT)和IL-17A基因敲除型(IL-17A-deficient,IL-17A-/-)建立小鼠心肌炎模型,造模后0 d、14 d、28 d、42 d分别取心肌组织作石蜡切片,行苏木素伊红及Masson染色观察病理改变,免疫组化(SP法)检测心肌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达。结果与WT小鼠比较,IL-17A-/-小鼠在感染CVB3后心肌炎症及纤维化程度明显减轻,生存率提高。并且MMP-2和MMP-9在IL-17A-/-小鼠心肌中的表达在14 d和28 d明显低于其在WT小鼠心肌中的表达,差异有统计学意义[14 d亚组:0.21±0.02 vs.0.32±0.04,0.22±0.02 vs.0.38±0.05,P均<0.05;28 d亚组:0.14±0.02 vs.0.22±0.02,0.15±0.01 vs.0.26±0.03,P均<0.05];而TIMP-1在IL-17A-/-小鼠心肌中的表达则在14 d显著高于其在WT小鼠心肌中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。WT组小鼠心肌MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1的值先升高后降低,峰值出现在14 d左右。而IL-17A-/-组小鼠感染CVB3后14 d、28 d和42 d三个亚组心肌MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1的值较0 d亚组有所降低,差异有统计学意义(P<0.05),但以上各亚组之间比较则差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-17A基因敲除有助于维持MMP-2/TIMP-1和MMP-9/TIMP-1的动态平衡。IL-17A可能通过介导胶原合成/降解系统的失衡参与小鼠VMC心肌纤维化过程,提示阻断IL-17A的作用有助于减轻VMC心肌损伤后心肌纤维化的程度。
- 薛贻敏伍伟锋高梦莎刘艳丽孔清
- 关键词：病毒性心肌炎心肌纤维化基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制剂
- 病毒性心肌炎小鼠白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞的变化被引量：1
- 2011年
- 目的观察病毒性心肌炎（VMC）小鼠不同时间点白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞（IL-17＋／IFN-γ＋细胞）的变化，探讨其在VMC发病中的作用。方法雄性Balb／c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）建立VMC小鼠模型（VMC组），对照组注射等量磷酸盐缓冲液，在注射的第0、1、2、3、4和6周苏木精-伊红染色观察心肌病理改变并计算心肌病理积分，流式细胞仪检测小鼠IL-17＋／IFN-γ＋细胞占CD4＋T细胞的比例。结果VMC组小鼠心肌组织病理积分于第1周升高（1．8±0．5），第2周达到最高（2．8±0．5），第3周开始逐渐降低，VMC组各时点与对照组相应时点比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。VCM组小鼠各时点脾IL-17＋／IFN-γ＋细胞维持在低水平，与对照组相应时点比较差异均无统计学意义（P均〉0．05），Spearman相关性分析显示IL-17＋／IFN-γ＋细胞与心肌病理积分无显著相关（P〈0．05）。结论VMC小鼠中存在少量IL-17＋／IFN-γ＋细胞，但可能与VMC的炎性过程无关。
- 杨帆伍伟锋颜玉鸾庞羽孔清
- 关键词：心肌炎白细胞介素类淋巴细胞
- 白细胞介素-17A调节转化生长因子β1对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的影响被引量：2
- 2014年
- 目的在小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)心肌纤维化的发展过程中,观察白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)是否通过调节转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)参与心肌纤维化。方法 IL-17A基因敲除(IL-17A-deficient,IL-17A-/-)Balb/c小鼠和野生型(wild-type,WT)Balb/c小鼠分别按电脑随机数字表法分为4组,腹腔注射TCID50为10-5的柯萨奇病毒B3(coxsackie virus B3,CVB3)0.1 mL培养液建立小鼠VMC模型,于注射病毒后第0、14、28和42天处死小鼠,然后无菌取心脏组织,苏木素-伊红和Masson染色观察心肌组织形态学,并分别计算心肌病理积分和胶原容积积分(CVF)。实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织TGF-β1mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法检测心肌组织TGF-β1蛋白的表达水平。结果 WT小鼠的心肌纤维化随着VMC的病程发展不断加重,TGF-β1于14 d表达显著升高,28 d和42 d后逐渐下降,但仍高于正常水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与同时点WT小鼠相比,IL-17A-/-小鼠心肌组织的心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-17A参与VMC的心肌纤维化过程,并可能通过调节TGF-β1的表达而参与这一过程。
- 潘晓芬伍伟锋赖文盈薛贻敏孔清
- 关键词：病毒性心肌炎TRANSFORMING
- 肠道巨噬细胞在病毒性心肌炎小鼠中的变化及其意义
- 2022年
- 目的:探讨病毒性心肌炎(VMC)小鼠中肠道巨噬细胞的表达及可能意义。方法:4周龄balb/c小鼠随机分为正常对照组和VMC组。VMC组小鼠腹腔注射一次CVB3病毒悬液建立VMC小鼠模型,对照组腹腔注射同等剂量PBS,第14天处死小鼠,观察两组小鼠的心肌组织和肠道组织的病理变化;计算心肌组织病理评分和胶原容积分数;采用流式细胞术检测肠道巨噬细胞表型的变化。结果:正常对照组小鼠心肌细胞排列整齐,心肌组织无坏死,无大量炎性细胞浸润,期间可见散在少量蓝色胶原纤维;肠道微绒毛排列整齐,细胞间的连接结构清晰。在VMC小鼠中,心肌组织坏死、大量炎细胞浸润、心肌病理评分显著升高(P<0.05),心肌纤维比例显著升高(P<0.05)。肠道组织肠道微绒毛缩短或消失、参差不齐;M1型和M2型巨噬细胞与正常对照组比较均显著减少(P<0.05)。结论:肠道M1和M2型巨噬细胞在VMC中明显降低,但M1/M2比值显著增加,可能参与了VMC的发生与发展。
- 陈利利孔清卢飞玉伍伟锋
- 关键词：病毒性心肌炎极化
- 转录因子EB在病毒性心肌炎B细胞中的表达及机制研究
- 2022年
- 目的:初步探究转录因子EB(TFEB)在病毒性心肌炎(VMC)B细胞中的表达和机制。方法:将小鼠随机分为VMC组和对照组,VMC组小鼠腹腔注射CVB3建立急性VMC小鼠模型,对照组小鼠同一天腹腔注射相同剂量的PBS,观察两组小鼠的心肌损伤变化;采用免疫印迹分析方法(Western blotting)检测两组B细胞中TFEB的表达和自噬标记物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量;体外培养从VMC小鼠中分离的脾脏B细胞,分为VMC+Tre组和VMC组,VMC+Tre组加入自噬诱导剂,VMC组加PBS作为对照,Western blotting检测两组B细胞中的TFEB蛋白的表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量。结果:与对照组对比,VMC组小鼠心肌炎症细胞浸润,心肌病理积分、B细胞中的TFEB表达水平及自噬标志物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量增高(均P<0.05);与VMC组B细胞相比较,VMC+Tre组小鼠B细胞中的TFEB蛋白相对表达量、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量增高,同时,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量与TFEB蛋白相对表达量呈正相关关系(均P<0.05)。结论:病毒性心肌炎B细胞中TFEB表达增加,其可能与病毒性心肌炎B细胞的自噬增强相关。
- 卢飞玉韦斌孔清黄凯伍伟锋
- 关键词：病毒性心肌炎自噬B细胞
- 外源性白细胞介素-17对病毒性心肌炎小鼠脾淋巴细胞分泌的细胞因子的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:观察外源性白细胞介素(IL)-7对病毒性心肌炎小鼠脾淋巴细胞分泌的干扰素(IFN)-γ、IL-6及转化生长因子(TGF)-β的影响。方法:雄性BALB/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒,1周后分离提取脾脏淋巴细胞,分别用0、25、50ng/ml重组IL-17(rIL-17)培养24、48、72h,流式细胞术测定培养后T辅助细胞(Th)1比例,RT-PCR测定培养细胞IFN-γ、IL-6及TGF-β的mRNA表达,ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-6及TGF-β的水平。结果:与0ng/ml组比较,25ng/ml组rIL-17作用后Th1细胞的比例、IFN-γmRNA表达水平及IFN-γ浓度均下降(均P<0.05)。但是不同浓度组和时间组内,IL-6和TGF-β的mRNA及蛋白表达量均差异无统计学意义。结论:外源性IL-17对病毒性心肌炎小鼠脾淋巴细胞中Th1细胞分化及IFN-γ的分泌起抑制作用,但是对TGF-β及IL-6没有显著影响。
- 高梦莎伍伟锋薛贻敏刘艳丽孔清黄炎兰
- 关键词：柯萨奇病毒白细胞介素-17干扰素-Γ转化生长因子-Β
- 白细胞介素-17A对病毒性心肌炎小鼠抗心肌抗体水平的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察IL-17A对病毒性心肌炎(VMC)小鼠血清抗心肌抗体水平的影响。方法雄性野生型(WT)和IL-17A基因敲除型(IL-17A-/-)BALB/c小鼠,腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立病毒性心肌炎模型(VMC-WT组和VMC-IL-17A-/-组),同时选取野生型BALB/c小鼠腹腔注射PBS作为正常对照组(WT组)。14 d后取心肌组织作石蜡切片,行HE染色观察病理改变,ELISA测定血清中抗心肌线粒体内膜ADP/ATP载体(ANT)抗体、抗β-肌球蛋白重链(β-MHC)抗体、抗心肌L型钙通道(CACH2)抗体水平。结果与WT组比较,VMC-WT组小鼠抗ANT抗体、抗β-MHC抗体水平升高明显,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),抗CACH2抗体水平差异无统计学意义(P>0.05);与VMC-WT组比较,VMC-IL-17A-/-组小鼠抗ANT抗体水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),抗β-MHC抗体、抗CACH2抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-17A参与VMC小鼠血清抗ANT抗体的产生,对抗β-MHC抗体、抗CACH2抗体水平无显著影响。
- 赖文盈伍伟锋潘晓芬孔清
- 关键词：心肌炎柯萨奇病毒白细胞介素-17A抗心肌抗体
- 白细胞介素-27在小鼠病毒性心肌炎中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的：研究小鼠病毒性心肌炎（VMC）模型中白细胞介素（IL）-27基因和蛋白的表达,探究其在VMC发病中的作用及意义。方法：VMC组用柯萨奇病毒B3（CVB3）感染Balb/c小鼠建立VMC模型,注射100TCID 50病毒液0.1ml;对照组注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）。在注射后的第0、1、2、3、4和6周应用逆转录-聚合酶链反应检测两组小鼠心肌组织中IL-27亚基p28及EBI3的mRNA表达,酶联免疫双夹心抗体法检测血清中IL-27蛋白的表达。结果：与对照组比较,VMC组小鼠心肌组织中IL-27p28mRNA水平自第1周开始升高,第2周时达峰值,并至少维持至第6周（均P〈0.05）;VMC组第1~6周各时点血清IL-27蛋白均明显高于对照组（均P〈0.05）;与对照组同时点比较,VMC组各时点小鼠心肌组织中IL-27EBI3mRNA差异均无统计学意义。结论：IL-27在VMC小鼠中高表达,提示IL-27可能参与VMC的发病机制。
- 黄凯孔清潘晓芬赖文盈石昌荆伍伟锋
- 关键词：病毒性心肌炎白细胞介素-27
- 外源性IL-23对病毒性心肌炎小鼠Th17细胞增殖的影响被引量：7
- 2011年
- 目的:观察小鼠重组IL-23(rIL-23)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠Th17细胞增殖的影响。方法:BALB/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC小鼠模型,1周后磁珠分离脾CD4+T淋巴细胞后进行体外培养,分别加入植物血凝素(PHA)与重组小鼠IL-23(rIL-23)或PHA单独刺激进行体外培养5天。流式细胞术测定培养后Th17细胞占CD4细胞的百分比、RT-PCR测定培养细胞IL-17 mRNA的表达、ELISA法测定培养物上清液中IL-17的水平。结果:与单纯PHA刺激比较,rIL-23刺激后Th17细胞明显增加(1.82%±0.17%比4.70%±1.29%),且培养细胞IL-17 mRNA及上清液中IL-17浓度也增加,两组比较有统计学差异(P均<0.05)。结论:外源性rIL-23可以增加并维持Th17细胞的增殖。
- 杨帆伍伟锋颜玉鸾庞羽孔清
- 关键词：心肌炎IL-23TH17细胞
