郭锦霞
- 作品数：5 被引量：11H指数：1
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 微小扇头蜱不同发育阶段miRNA的动态分析
- 尽管一些microRNA表达谱的研究已经在长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)唾液腺以及微小扇头蜱(Rhipisephalus(Boophilus) microplus)美国株中得到了一定的研究...
- 罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳
- 关键词：MICRORNA高通量测序发育阶段
- miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化被引量：1
- 2014年
- 根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。
- 王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远
- 关键词：长角血蜱MICRORNA荧光定量PCR
- 环形泰勒虫裂殖体表面蛋白基因PCR诊断方法的建立被引量：10
- 2014年
- 为寻求一种快速灵敏的环形泰勒虫病PCR检测方法,基于环形泰勒虫裂殖体表面蛋白(Theirelia annulata surface protein,TaSP)基因序列保守区设计特异性引物,通过PCR技术扩增出该基因长为393bp的高免疫原性区片段。用该引物对环形泰勒虫、中华泰勒虫、瑟式泰勒虫、尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、马泰勒虫、驽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫基因组模板进行特异性试验,对环形泰勒虫基因组模板进行梯度稀释后扩增,以确定试验的敏感性,同时用本试验建立的方法与常规显微镜镜检方法对150份血清样品进行检测。特异性试验结果显示,在被检测的9个样本中,只有环形泰勒虫基因组模板中扩增出了符合大小的特异核苷酸片段;敏感性试验结果表明,PCR对环形泰勒虫的扩增效率可达到10-10;通过对150份血清样品的检测,并与血涂片方法进行比较,结果显示PCR方法具有特异性强、敏感度高等特点,适用于牛环形泰勒虫病的检测。
- 郑进峰罗金谢俊仁田美媛袁小松王芳芳郭锦霞李奎刘光远
- 关键词：环形泰勒虫PCR诊断方法
- 血红扇头蜱卵黄原蛋白基因的克隆及生物学特性分析
- 2014年
- 为研究卵黄原蛋白(Vg)基因对蜱虫卵的生理机制作用,参考GenBank中微小扇头蜱(登录号:EU086096)卵黄原蛋白基因的核苷酸序列,设计特异性引物,PCR扩增血红扇头蜱相关基因,将其克隆至pGEM-T Easy载体,并测序。对获得的阳性克隆进行序列分析,选取Vg基因的VWFD功能区设计表达引物,构建重组表达载体pGEX-4T-1-Vg,并进行表达纯化。用Western-blot鉴定表达产物的免疫原性。结果显示,获得的1 218bp的核苷酸序列片段与预期结果一致。系统发生树显示,血红扇头蜱与微小扇头蜱具有较高的同源性,两者之间的同源性高达93%,其次与变异革蜱、希伯来花蜱、肩突硬蜱的同源性分别为85%、78%、62%。序列分析显示,该基因含有1个由221个氨基酸组成的VWFD功能区。该功能区重组融合蛋白的分子质量约为51ku。Western-blot分析表明,该重组蛋白与家兔抗血红扇头蜱全蜱阳性血清、家兔抗长角血蜱全蜱阳性血清、家兔抗残缘璃眼蜱全蜱阳性血清以及家兔抗草原革蜱全蜱阳性血清均出现不同程度的反应活性。结果表明,经表达Vg基因VWFD区域而制备的重组抗原对于不同蜱种血清具有广谱性。
- 郭锦霞罗金殷宏罗建勋谢俊仁田占成王素艳王芳芳李奎刘光远
- 关键词：血红扇头蜱卵黄原蛋白基因克隆生物学特性
- 感染与非感染利士曼原虫的长角血蜱microRNA差异表达分析
- 本研究利用高通量测序技术分别对实验室条件下培养的清洁长角血蜱(LHL01)及感染硕大利氏曼原虫(Leishmania maj or)的长角血蜱(FHL02)进行microRNA序列检测。生物信息学统计两者之间差异表达的m...
- 罗金刘光远谢俊仁田占成袁晓松王芳芳郭锦霞王素艳
- 关键词：长角血蜱MICRORNA
