周全伟
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：江西师范大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：自然科学总论轻工技术与工程化学工程更多>>
- 腈水合酶在大肠杆菌中的表达与纯化
- 微生物产生的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂。它的反应条件温和、产率高、副产物少、产物的自聚率低、具有区域和立体选择性,可广泛地应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成。
本文通过PCR扩增得到诺...
- 周全伟
- 关键词：诺卡氏菌腈水合酶重组质粒
- 文献传递
- 腈水合酶在大肠杆菌中的表达纯化
- 2010年
- 微生物的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂,广泛应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成。通过PCR扩增得到诺卡氏菌的腈水合酶基因。实验先构建得到BL21-pGEX-4T-1/NHase重组菌,表达GST-NHase融合蛋白。由于GST的相对分子质量较大,阻碍了腈水合酶的β亚基与α亚基的正确结合,从而使腈水合酶表现不出酶活。于是又构建了BL21-pET-30c/NHase重组菌,IPTG诱导表达结果显示,腈水合酶α亚基基本没有得到表达,影响了腈水合酶的活性。经生物信息学分析发现,腈水合酶α亚基的起始密码子为gtg,可能不易被大肠杆菌的RNA聚合酶识别,于是通过点突变将gtg替换成atg,阳性重组子经IPTG诱导表达,结果显示腈水合酶β亚基和α亚基的表达量都有所提高。诱导表达的菌液经超声破碎,离心得到粗酶液,用EPI-30-ARG-IDA-Co2+亲和载体纯化带6×His tag的腈水合酶,气相色谱法检测腈水合酶的酶活达到200 U/mL。
- 周全伟黄伟波黎常宏王筱兰
- 关键词：诺卡氏菌腈水合酶重组质粒
