田占成
- 作品数：163 被引量：246H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一种嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明的嵌合型病毒样颗粒为基于基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的重组猪瘟病毒中和表位嵌合抗原蛋白，编码该病毒样颗粒的DNA片段的...
- 田占成周亚红于瑞明高闪电独军政殷宏罗建勋刘光远关贵全刘志杰
- 一种诊断马泰勒虫的检测试剂盒及制备与使用方法
- 刘光远谢俊仁田占成
- 该发明公开一种快速鉴别诊断被检马属动物是否感染马泰勒虫病的检测试剂盒，以及这种试剂盒的制备方法和使用方法。该发明的诊断马泰勒虫的检测试剂盒内至少有四条马泰勒虫特异性引物TeF3、TeB3、TeFIP和TeBIP，为方便鉴...
- 关键词：
- 关键词：检测试剂盒
- 表达鸡γ-干扰素和传染性支气管病毒S1基因的重组鸡痘病毒疫苗对鸡外周血T淋巴细胞动态分布影响的研究被引量：14
- 2006年
- 机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程,它以体液和细胞免疫为主,二者相互影响,相互作用,而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4+、CD8+和TCRδγ+三种亚类T淋巴细胞的数量的变化,初步探讨了干扰素对鸡外周血中T淋巴细胞亚类动态分布的影响。结果表明,含有干扰素基因的重组鸡痘病毒能显著增高机体特异性的CD8+和TCRδγ+T淋巴细胞水平,CD4+T淋巴细胞比例则要低于其他的疫苗免疫组。
- 孙永科田占成王云峰刘胜旺童光志智海东王玫
- 关键词：T淋巴细胞重组鸡痘病毒
- 牛病毒性腹泻病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2020年
- 试验旨在通过原核表达获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)衣壳蛋白(C),以制备抗C蛋白多克隆抗体。根据BVDV C蛋白的编码序列设计一对特异性引物,利用PCR扩增编码BVDV C蛋白片段,定向插pPET-42a载体中,转化大肠杆菌BL21 Rosetta (DE3) pLysS感受态细胞,筛选重组阳性菌株,IPTG诱导表达,金属离子层析法纯化得到分子质量为45 kDa的重组C蛋白。利用纯化的重组C蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶25 600。经间接免疫荧光证实制备的多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的反应性。本研究成功制备了BVDV重组C蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV衣壳蛋白功能的研究奠定了基础。
- 张忠辉高闪电独军政田占成王建东殷宏
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒衣壳蛋白多克隆抗体
- 蓝舌病毒VP5蛋白抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2018年
- 本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型（BTV-16）标准株RSAvvvv的序列,首先人工合成编码BTV-16 VP5蛋白的S6全长基因,并克隆于pUC-57载体。设计表达引物,利用PCR方法扩增N末端缺少编码第1~41位氨基酸的截短基因VP5Δ41aa,将其亚克隆到表达载体pET-32a（＋）中,构建重组表达质粒pET-VP5Δ41aa。将表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）后,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白VP5Δ41aa在大肠杆菌中大量表达。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP5Δ41aa蛋白,用其3次免疫新西兰大白兔制备相应的抗血清,Western-blot检测显示,抗血清不仅可与重组表达的VP5Δ41aa蛋白反应,而且可与BTV感染细胞中的VP5蛋白反应。免疫荧光试验表明,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中具有天然构象的VP5蛋白反应。上述结果表明,本试验制备的VP5抗体将为深入研究VP5蛋白的生物学功能奠定基础。
- 康棣独军政高闪电田占成Darien Kheder ALI MOHAMED郭艳妮刘光远罗建勋殷宏
- 关键词：蓝舌病毒VP5基因原核表达多克隆抗体
- 邓肯巴贝斯虫血清学检测抗原ExoAg-1200和ExoAg-2451的应用
- 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及邓肯巴贝斯虫血清学检测抗原ExoAg‑1200和ExoAg‑2451的应用。本发明通过对邓肯巴贝斯虫感染后的黄金地鼠血清进行Label‑free蛋白质组学分析，同源性分析发现两种分泌...
- 王锦明年月丽关贵全田占成殷宏罗建勋
- 一种与非洲马瘟病毒VP7蛋白具有良好亲和反应能力的单克隆抗体及用途
- 本发明属于免疫学和体外诊断技术领域，具体涉及一种与非洲马瘟病毒VP7蛋白具有良好亲和反应能力的单克隆抗体及用途。本发明通过将重组表达的非洲马瘟病毒VP7蛋白3次免疫小鼠后，取小鼠脾脏和骨髓杂交瘤细胞SP2/0进行融合，最...
- 独军政户鑫兵徐婧张雨田占成关贵全罗建勋殷宏
- miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化被引量：1
- 2014年
- 根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。
- 王芳芳罗金袁小松谢俊仁田占成王素艳郭锦霞刘光远
- 关键词：长角血蜱MICRORNA荧光定量PCR
- 蓝舌病病毒NS1蛋白的截短表达、纯化及其多克隆抗体制备被引量：2
- 2021年
- 本研究通过对蓝舌病病毒1型(BTV1)的NS1基因进行抗原性分析,选取其中抗原指数较高的片段(1~960 bp),利用RT-PCR扩增获得NS1截短基因序列,插入原核表达载体pET-30a中构建重组表达质粒pET-NS1-320aa,将该重组质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达并进行可溶性分析,利用SDS-PAGE对截短NS1蛋白的表达进行检测,发现重组NS1蛋白主要以包涵体的形式存在于菌体中。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的NS1蛋白;将其免疫新西兰大白兔制备的抗NS1多克隆抗体不仅可与重组表达的截短NS1蛋白反应,而且可与BTV1感染细胞中的天然NS1蛋白发生特异性反应;免疫荧光实验发现在BTV1感染的BHK-21细胞中检测到了NS1蛋白的特异表达,且分布于细胞质中。本研究成功表达了BTV重组NS1截短蛋白并制备了相应的特异性抗体,为研究NS1蛋白的特性和功能奠定了基础。
- 张璐康棣高闪电田占成关贵全刘光远罗建勋殷宏独军政
- 关键词：蓝舌病病毒多克隆抗体
- 蓝舌病病毒VP7蛋白的可溶性纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2021年
- 首先参照GenBank中已发表的基因序列人工合成蓝舌病病毒VP7基因,将其克隆到表达载体pSMK上。选取含有正确开放阅读框的重组质粒pSMK-VP7,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于16℃利用IPTG诱导剂进行诱导表达,优化表达条件,纯化重组VP7蛋白,免疫新西兰白兔制备VP7多克隆抗体,利用免疫印迹试验对制备的多克隆抗体进行特异性分析。结果显示,重组VP7蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,且16 h表达量最大,利用镍离子树脂纯化获得了高纯度的VP7蛋白;原核表达的重组VP7以及天然的VP7蛋白均能够与VP7多克隆抗体发生特异性反应。本研究成功实现了重组BTV VP7蛋白的可溶性表达和纯化,并制备了特异性良好的多克隆抗体,为进一步开展BTV的VP7功能研究和建立BTV诊断方法奠定了基础。
- 丁晓攀车永军郭艳妮高闪电田占成ALI MOHAMED Darien Kheder关贵全孙世琪殷宏独军政
- 关键词：蓝舌病病毒VP7基因可溶性表达纯化多克隆抗体
