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呼高伟: 作品数：19 被引量：25H指数：3; 供职机构：湖南农业大学更多>>; 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家科技重大专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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微小隐孢子虫两个miRNA表达检测及真核表达载体的构建: 隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是由原虫隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)引起的一种人兽共患寄生虫病,临床上以自限性水样腹泻为主要症状。截止目前,临床上尚无特效的治疗药物和疫苗。同时,国...; 呼高伟; 关键词：微小隐孢子虫 MICRORNA 真核表达质粒靶基因; 文献传递

新型猪圆环病毒疫苗的研究进展被引量：9: 2016年; 从20世纪90年代开始流行到现在,全球范围内暴发的猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)给世界各国的养猪业造成了巨大的经济损失。我国是世界的养猪大国和猪肉制品消费大国,PCVAD对我国的养猪业的发展产生了很大的影响。疫苗是预防PCVAD最直接有效的方法,文中对近年来国内外猪圆环病毒疫苗的研究进展进行综述。; 蔡杰呼高伟王乃东邓治邦王爱兵杨毅; 关键词：猪圆环病毒疫苗

隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达被引量：2: 2011年; 为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。; 苏庆美何生虎米荣升张国恩黄燕周鹏秦培兰呼高伟陈兆国; 关键词：真核表达质粒 HELA细胞

微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备: 2012年; 以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。; 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国; 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR

一种包含猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白GP5抗体中和表位的嵌合VLPs构建与分析: 引言猪繁殖与呼吸障碍综合征是由病毒性抗原PRRSV (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus)引起的,临床上以猪的呼吸和繁殖障碍为主要特征,该病的流行给养猪...; 呼高伟王乃东王占峰杨毅

隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立: 将隐孢子虫鼠基因型（Cryptosporidium mouse genotype）P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中，并用大肠杆菌BL21（DE3）为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原，建立隐孢子虫间接E...; 张国恩米荣升苏庆美黄燕周鹏胡义彬秦培兰呼高伟陈兆国; 关键词：隐孢子虫原核表达间接ELISA检测试剂盒

微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及其抗血清的制备: 以微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR（SOE PCR）将该三段基因片段串联在一起,各基因片...; 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国; 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR; 文献传递

PCV2 capsid表面展示PRRSV GP5抗原表位B的嵌合型病毒样颗粒构建与其免疫原性分析: 病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)可作为传递外源抗原或者外源抗原表位的载体,而被开发成嵌合型VLPs疫苗或多价疫苗.本研究,我们基于对PCV2 capsid晶体结构的分析和来自不同参考株PC...; 呼高伟杨毅王乃东

Construction and Preliminary Identification of Eukaryotic Expression Vector of Cryptosporidium parvum miR-2980: 2012年; [Objective] This study aimed to construct and preliminarily identify the eu- karyotic expression vector of Cryptosporidium parvum miR-2980. [Method] The cp-miR- 2980 precursor was amplified from C. parvum genomic DNA and cloned into pMD18- T vector. The amplified precursor was then subcloned into pVAX I vector and identi- fied with restriction endonuclease digestion and sequencing. The recombinant plasmid pVAX-miR2980 was transfected into HCT-8 cells. Total RNA was extracted and the expression of cp-miR-2980 was evaluated by RT-PCR detection. [Result] The results showed that the recombinant eukaryotic expression vector pVAX-miR2980 was suc- cessfully constructed, which can express cp-miR-2980 in HCT-8 cell. [Conclusion] This study laid the foundation for further exploring the biological function of cp-miR-2980.; 呼高伟程天印米荣升秦培兰黄燕周鹏曹薇陈兆国; 关键词：PRECURSOR RT-PCR

不同DNA提取方法对隐孢子虫卵囊PCR检测的影响被引量：5: 2011年; 为了提高隐孢子虫PCR检测的敏感性和效率,采用10种基因组DNA提取方法,对隐孢子虫卵囊DNA进行提取,对提取的DNA进行nested PCR扩增。经过3次重复试验,结果显示,Chelex 100法、FTA试纸法和Wizard DNAClean-Up System试剂盒法敏感性最高,能够稳定地扩增出1×102个卵囊提取的DNA,适合隐孢子虫病分子流行病学调查时大量样品DNA的提取。; 陈兆国米荣升周鹏黄燕张国恩苏庆美秦培兰呼高伟林矫矫; 关键词：隐孢子虫 DNA