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牛白细胞介素-4真核表达载体的构建及免疫佐剂效应研究: 2013年; 应用RT-PCR技术从植物血凝素(PHA)活化的牛外周血淋巴细胞中扩增出牛白细胞介素4(IL-4)特异性目的片段,将其克隆到真核表达载体pVAX1,双酶切及测序鉴定正确后,将构建好的重组质粒pVAX1-IL-4应用脂质体LipofectamineTM2000转染至293T细胞,经RT-PCR检测IL-4可进行转录表达,且MTT检测其具有生物学活性,表明IL-4在转染细胞中可以成功表达。然后将构建好的pVAX1-IL-4作为基因佐剂来研究其对牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVD)核酸疫苗pVAV1-E0的免疫增强作用。经ELISA和MTT检测结果表明,pVAX1-IL-4同pVAV1-E0联合免疫组小鼠的特异性抗体水平、淋巴细胞增殖水平与pVAV1-E0单疫苗免疫组相比差异显著(P<0.05)。证明重组质粒pVAX1-IL-4可作为佐剂与核酸疫苗共同作用来提高后者的免疫原性。; 宫玉玲王克栋孙建华熊浩石明冉多良; 关键词：克隆真核表达白细胞介素-4 293T细胞免疫佐剂

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒E0、E2基因免疫原性的比较: 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为黄病毒科，瘟病毒属成员，是一种在世界范围内对造成家畜健康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛...; 石明; 关键词：牛病毒性腹泻病毒免疫原性原核表达基因克隆特异性抗体; 文献传递

马链球菌马亚种FNEB蛋白的截短表达及其免疫保护性研究被引量：12: 2015年; 为研究马链球菌马亚种FNEB蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法从马链球菌马亚种新疆分离株中扩增FNEB基因部分片段,克隆于原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约60 ku,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以马链球菌马亚种新疆分离株进行攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为65%。本研究克隆了马链球菌马亚种的FNEB截短基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供较好的保护,为重组FNEB蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。; 徐全圆石明杨夷平李娜刘建华加尔肯冉多良; 关键词：原核表达

牛病毒性腹泻病毒两种目的基因核酸疫苗免疫效果的比较: 2015年; 为研究和比较牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜蛋白E0和E2基因作为核酸疫苗候选基因的免疫效果,本实验构建了真核重组表达质粒p VAX1-E0和p VAX1-E2,并转染至293T细胞中,通过RT-PCR和western blot方法检测目的基因在293T细胞中的转录和表达情况。同时将重组质粒联合基因佐剂p VAX1-IL-2免疫小鼠,ELISA检测其中和抗体,结果表明,p VAX1-E0免疫组能够有效的诱导特异性血清抗体的产生,而p VAX1-E2免疫组效果不明显。MTT检测显示两组均显著促进了特异性淋巴细胞的增殖,并且p VAX1-E2组效果优于p VAX1-E0组。由此表明,p VAX1-E0可以诱导较好的体液免疫,而p VAX1-E2在细胞免疫方面效果较好。; 石明宫玉玲徐全圆李娜刘建华加尔肯冉多良; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因真核表达核酸疫苗

马疱疹病毒1型gD基因主要中和抗原区原核表达载体的构建和表达被引量：5: 2013年; 根据GenBank上已发表的马疱疹病毒1型(EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4)gD基因序列,设计一对特异性引物。将扩增的EHV-1gD基因片段克隆至pET-30a表达载体,筛选获得重组质粒pET-30a-gD。经鉴定证明pET-30a-gD原核载体构建成功。将其转化入BL-21大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,并对培养时间、IPTG诱导浓度等培养条件进行优化,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示pET-30a-gD获得了高效融合表达,其表达的蛋白分子量约为29kD。Western blot分析结果表明,显示获得的融合蛋白与EHV-1/EHV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。; 孙建华何晶石明徐全圆杨夷平冉多良; 关键词：原核表达 GD基因

新疆部分地区马鼻肺炎的血清学调查被引量：15: 2014年; 为了解新疆马鼻肺炎(ER)的流行情况,利用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)对2012年—2013年采自新疆5个地区的3 195份马血清进行马鼻肺炎血清学流行病学调查。结果显示,3 195份马血清中共检出阳性血清1 237份,平均阳性率为38.71%,其中,马鼻肺炎在秋季的阳性率最高(45.85%),其次是夏季的阳性率(43.44%),冬季的阳性率最低(19.32%)。而且,XJ-C地2013年马鼻肺炎的阳性率显著低于2012年(P<0.01)。此次调查数据可为新疆马鼻肺炎的防控工作及马产业的健康发展提供参考。; 李娜孙建华石明徐全圆杨夷平刘建华加尔肯冉多良; 关键词：马鼻肺炎血清流行病学调查间接ELISA

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石明