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筛选的差异表达microRNAs对猪卵母细胞Npm2基因的表达调控及作用研究: 2024年; 旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;双荧光素酶报告试验验证预测的miRNA是否与靶基因Npm2存在结合位点;在体外成熟培养液中添加miRNAs模拟物/抑制物,验证miRNA对卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎体外发育能力的影响。添加最适浓度的miRNAs模拟物/抑制物后,使用花生凝集素染色试验检测皮质颗粒分布和qPCR检测Npm2 mRNA表达水平。结果表明,MⅡ期卵母细胞中miR-150、miR-7138-5p表达显著高于GV期卵母细胞(P<0.05),miR-296-3p、miR-423-3p表达水平极显著低于GV期卵母细胞(P<0.01),表达趋势与测序结果一致。miR-32表达水平无显著差异(P>0.05)。双荧光素酶报告试验结果表明,miR-32、miR-7138-5p、miR-296-3p与Npm2存在结合位点,荧光强度极显著下调(P<0.01);miR-150与Npm2存在结合位点,荧光强度显著下调(P<0.05);miR-296-5p、miR-423-3p与Npm2不存在结合位点,荧光强度无显著变化(P>0.05)。通过在体外成熟培养液中添加不同浓度miRNAs模拟物/抑制物以确定最适浓度,添加miR-32抑制物、miR-296-5p模拟物、miR-296-5p抑制物、miR-423-3p模拟物、miR-423-3p抑制物、miR-7138抑制物、miR-150模拟物、miR-150抑制物后皮质颗粒荧光强度极显著下调(P<0.01);添加miR-296-3p抑制物、miR-7138-5p模拟物后皮质颗粒荧光强度显著下调(P<0.05)。MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量极显著高于GV期卵母细胞,添加最适浓度miR-150、miR-296-3p、miR-296-5p、miR-7138-5p模拟物和/或抑制物Npm2 mRNA表达量与对照组有显著差异(P<0.05),添加miR-32、miR-423-3p模拟物/抑制物后MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05)。筛选的差异miRNA(如miR-296-3p、miR-7138-5p)可能通过调控Npm2表达�; 李河林蒋玉芬程娜韩宇辰霍晓颖苏宏鼎常悦方玉珠王配贾宝瑜魏红江成文敏; 关键词：卵母细胞 MICRORNA

版纳微型猪近交系CATSPER3基因克隆、序列及发育进化分析: 2016年; 获得版纳微型猪近交系(BMI)CATSPER3基因部分编码区序列,通过生物信息学分析其氨基酸序列和进行不同物种间的同源性比较。以版纳微型猪近交系的公猪睾丸为材料提取RNA,RT-PCR方法扩增CATSPER3基因部分编码区序列,利用在线分析软件进行生物信息学分析。结果显示,扩增出CATSPER3基因部分编码区序列。生物信息学分析表明,推导氨基酸序列,编码蛋白分子量为19.397 3 k D,理论等电点为5.05;在氨基酸组成上,酸性氨基酸(Asp+Glu)有24个、碱性氨基酸(Lys+Arg)有16个,其中以亮氨酸(Leu)占13.3%、缬氨酸(Val)占9.6%、苏氨酸(Thr)占9.0%、苯丙氨酸(Phe)占8.4%、谷氨酸(Glu)占7.2%,天冬氨酸(Asp)占7.2%等含量较高。在核苷酸相似度上与普通猪相似度最高,与山羊核苷酸的相似度较低;分子系统进化树表明与非近交系猪同处于一个分支中,亲缘关系较近,与山羊和绵羊亲缘关系较远。; 肖晶查星琴成文敏霍金龙潘伟荣王淑燕王配刘海京张秀琼曾养志; 关键词：系统进化分析

版纳微型猪近交系细胞色素P450家族基因CYP1A1克隆及生物信息学分析: 2017年; 【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,构建系统进化树。【结果】获得的BMI CYP1A1 CDS长度为1551 bp,编码516个氨基酸,蛋白质分子量为58.39 ku,等电点为7.83,位于内质网的概率是94.1%。CYP1A1蛋白质含有1个细胞色素P450半胱氨酸血红素配体位点,1个N-豆蔻酰化位点,1个酰胺化作用位点,2个N-糖基化位点、6个蛋白酶C磷酸化位点和5个蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。11个物种构建的系统进化分析表明,BMI(猪)CYP1A1与牛和山羊的关系最近。【结论】以上结果将为进一步研究版纳微型猪近交系CYP1A1基因功能奠定基础。; 王淑燕王配霍金龙查星琴潘伟荣张霞王雪飞; 关键词：生物信息学药物代谢

猪新基因PFN3电子克隆、RT-PCR验证和组织表达分析被引量：1: 2014年; 通过NCBI下载猪近缘物种的PFN3基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列,利用Lasergene软件电子克隆猪PFN3基因编码区序列及部分侧翼序列。针对编码区设计特异引物并以滇南小耳猪为研究材料进行实验验证,同时应用半定量RT-PCR技术对30个组织进行了表达分析。研究获得了猪PFN3 414 bp的编码区序列(GenBank登录号:JX457348,对应的氨基酸登录号:AFU74013)。生物信息学分析表明,该基因编码137个氨基酸,预测的蛋白质分子量(Mw)为14.73 ku,等电点(pI)为9.30。蛋白质结构分析显示,PFN3存在1个保守域,无信号肽;疏水性分析表明其N端和C端均具有亲水性;亚细胞定位显示,该蛋白位于细胞质的概率是94.1%。系统进化分析表明,猪与牛亲缘关系最近。组织表达分析表明,PFN3基因在30个被检组织中均有表达,在睾丸、肝、肾、结肠、盲肠、直肠及食管中高表达,在胸腺、甲状腺、附睾、淋巴结、十二指肠、空肠、回肠、胃、皮肤、大脑、小脑、垂体及下丘脑中中度表达,在颌下腺、肺、心、脾、肾上腺、肌肉、胰脏、脑干、舌下腺及脊髓中低表达。研究结果将为该基因在猪中的进一步功能研究奠定基础。; 张永云赵跃王锐秦彩艳王配王淑燕李福泉刘丽仙霍海龙李卫真卢健霍金龙; 关键词：电子克隆

绿色荧光蛋白基因原核表达质粒pET32a-AcGFP1的构建及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：2: 2012年; 为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a-AcGFP1,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达,本研究以pIRES-AcGFP1质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白AcGFP1基因,通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a(+)构成重组子,经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达绿色荧光蛋白,经15%SDS-PAGE鉴定,结果显示:重组质粒pET32a-AcGFP1中的AcGFP1序列与Clontech公司的pIRES-AcGFP1质粒的AcGFP1序列完全一致,表明本实验已成功构建了含有绿色荧光蛋白基因AcGFP1的原核表达质粒。此外,pET32a-AcGFP1转化Rosetta(DE3),经不同浓度的IPTG诱导,SDS-PAGE检测均获得高效表达,为今后构建pET32a(+)-TAT-AcGFP1融合表达载体以及深入研究TAT的细胞膜穿透作用的机制奠定基础。; 霍海龙赵跃王锐侯慧芳李卫真张永云刘丽仙王配霍金龙; 关键词：绿色荧光蛋白基因克隆报告基因原核表达

一种仔猪喂奶器: 本实用新型涉及一种仔猪喂奶器，属于仔猪养殖技术领域。所述的仔猪喂奶器包括母猪形体外壳、奶水配制箱、进料口、恒温加热板、温度传感器、显示屏、高压空气泵、空气压缩管路、加奶管、加奶管控制阀、压力泵、盛奶箱、奶液位测量仪、压力...; 王配霍金龙王淑燕; 文献传递

动物遗传学课程教学改革探索被引量：13: 2020年; 动物遗传学是动物科学专业本科生的一门重要专业基础课。由于近年高校改革和本学科的飞速发展,该课程教学的改革已成为必然趋势。为了能够更好地改进该课程教学,适应学科发展,使授课质量得到进一步提高,从教学内容的优化与重组,选择合适教材,改革完善课程的理论和实验教学方法和教学手段及完善考核评价制度等方面提出了改革设想。; 苗永旺王配滕晓红张永云; 关键词：动物遗传学理论教学实验教学教学改革

一种实验用小型猪猪笼: 本实用新型涉及一种实验用小型猪猪笼，属于畜牧养殖设备领域，所述的实验用小型猪猪笼主要包括笼子本体调节杆、调节板、锁紧螺栓、漏缝地板、接粪盒、滚轮、食槽、饮食窗、水箱、自动饮水管；本实用新型通过设置可以移动的调节板调整笼子...; 霍金龙王淑燕王配苗永旺; 文献传递

版纳微型猪近交系CRISP2基因序列的生物信息学分析: 2015年; 为了获得版纳微型猪近交系(BMI)半胱氨酸分泌蛋白2(CRISP2)序列,通过生物信息学分析探讨弱精症猪分子机制,试验以BMI的精子为材料提取RNA,采用RT-PCR方法扩增CRISP2基因部分序列,利用在线分析软件进行生物信息学分析。结果表明:试验扩增出CRISP2基因序列。生物信息学分析结果表明,与其他猪(登录号为NM_001128437)相比,BMI的CRISP2基因序列在3'非编码区有4个核苷酸的缺失。; 肖晶查星琴潘伟荣成文敏霍金龙信吉阁王淑燕王配刘海京张秀琼曾养志; 关键词：生物信息学分析基因序列基因测序

带有自动加料装置的版纳微型猪近交系仔猪猪舍: 本实用新型涉及带有自动加料装置的版纳微型猪近交系仔猪猪舍，属于畜牧养殖技术领域，所述的带有自动加料装置的版纳微型猪近交系仔猪猪舍主要包括墙体、第一房顶、第二房顶、通风窗、采光窗、卷帘、猪圈、漏缝地板、集粪腔、支架、丝杆、...; 霍金龙王配曾养志; 文献传递

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王配

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