张志崇
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 带有绿色荧光蛋白外源DNA转染绵羊成纤维细胞的研究被引量：2
- 2009年
- 为了优化建立转染绵羊成纤维细胞系的外源基因转染体系,本研究利用带有绿色荧光蛋白（GFP）的外源基因,采用阳离子脂质体法,探讨了DNA用量、脂质体用量和转染时间等因素对转染绵羊成纤维细胞的影响。结果表明,在500μL转染培养基中成纤维细胞达到85%汇合时,添加由50μL DMEM中含有0.2μg DNA和50μL DMEM中含有2.0μL Lipo-fectamineTM2000的两种溶液混合构成的转染液并转染12 h,可获得最高的转染效率。当转染12 h后,用基础培养液培养至第24小时,细胞核周区出现强绿色荧光,而当转染后48～64 h观察时,细胞核周区的荧光强度明显弱,而远离核周区的胞质中的荧光强度增加。
- 安星兰王子竹张志崇曲丽威王春生朴善花安铁洙
- 关键词：质粒DNA转染脂质体法
- 转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选和鉴定
- 2014年
- 为了获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株,研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem-GFP-pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞,并经G418筛选获得转基因阳性细胞。其结果,获得特异表达GFP和抗菌肽基因的转基因阳性细胞;转基因阳性细胞和冷冻复苏的转基因阳性细胞经培养,其细胞形态和生长曲线均正常;经PCR检测Tem-GFP-pBC1已整合入山羊乳腺上皮细胞的基因组中,且与对照组相比,转基因细胞可以检测到Tem-GFP的表达。结果表明,获得了能够在山羊乳腺中特异表达Tem-GFP融合蛋白的转基因阳性细胞。
- 王春生张志崇张秋婷朴善花仇雨歌安铁洙
- 关键词：中国林蛙山羊乳腺上皮细胞
- 转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选
- 获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株,本研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem-GFP-pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞,并经G418筛选获得转基因阳性细胞.其结果,获得特异表达GFP和抗菌...
- 王春生张志崇张秋婷朴善花安铁洙
- 关键词：山羊抗菌肽
- 转Temporin-GFP融合基因的山羊乳腺上皮细胞株的筛选
- 抗菌肽(antimicrobial peptides,ABP)作为一种广泛存在于生物界仅需20-60个氨基酸组成的小分子活性肽，在抗细菌和真菌以及病原虫、病毒或肿瘤细胞方面都有明显的作用。为了建立大量获取抗菌肽(anti...
- 张志崇
- 关键词：山羊乳腺上皮细胞抗菌肽
- 中国林蛙抗菌肽Temporin-1 CEa基因的真核表达载体构建被引量：3
- 2012年
- 为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列(EU624139)设计一对特异性引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEASY-T3克隆载体连接获得Tem-T3;利用酶切、连接等分子生物学手段,将GFP基因连入Tem-T3克隆载体,再经酶切获得Tem-GFP片段,并插入真核表达载体pcDNA3.1,最终得到Tem-GFP-pcD-NA3.1重组质粒;利用脂质体转染法将该质粒转入绵羊成纤维细胞,48 h后可在荧光倒置显微镜下观察到GFP的绿色荧光表达;qPCR数据分析显示,与对照组相比,转染Tem-GFP-pcDNA3.1的绵羊成纤维细胞中融合蛋白Tem-GFP的表达量可提高约300倍。本研究为构建Temporin-1CEa基因山羊乳腺特异表达载体提供依据。
- 张志崇王春生张秋婷朴善花苗向阳安铁洙
- 关键词：中国林蛙抗菌肽
- 不同温度保存的山羊皮肤成纤维细胞的培养
- 2013年
- 为了丰富获取山羊成纤维细胞的途径．本研究将采集到的幼山羊耳廓皮肤组织在4℃和20℃下保存一段时间后，进行原代和传代培养其成纤维细胞，并将传代培养的成纤维细胞经冷冻一复苏后进行继代培养。其结果显示。与对照组（新鲜皮肤1成纤维细胞在原代培养时的贴壁需要2d和达到80％汇合需要8d相比，皮肤在20℃下保存12h和24h后，其成纤维细胞的原代培养贴壁时间（3-6d）和80％汇合时间（12～14d）有所延迟；而皮肤在4℃下保存24h和48h后，其成纤维细胞的贴壁所需要时间为3d，达到80％汇合所需要时间为10d；与对照组传代培养达到80％；12合所需要的时间f3d）相比，源于在20℃和4℃下保存的皮肤原代成纤维细胞．经传代培养后，其继1代和继2代成纤维细胞可在第3d或4d达到约80％汇合；与对照组传代培养的成纤维细胞经冷冻一复苏后进行继代培养时，达到80％i12合所需要的时间（4d）相比，源于在20℃和4℃下保存的皮肤传代培养成纤维细胞，无论保存时间长短，均可在开始培养后第4或第5d达到约80％；12合。上述结果表明，山羊死亡后在4—20℃下即使保存1-2d，仍能利用其皮肤获得与源于新鲜皮肤的成纤维细胞相似的正常的成纤维细胞。
- 詹俐楠张志崇张秋婷王春生朴善花安铁洙
- 关键词：山羊皮肤成纤维细胞细胞培养
