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朴善花: 作品数：63 被引量：118H指数：6; 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家科技重大专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>

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转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1: 2011年; 【目的】通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊奠定基础。【方法】将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用BglⅡ和Hin dⅢ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES2-EGFP质粒连接后构建真核表达载体pIRES2-EGFP-4S;将此载体线性化后,采用脂质体法转染绵羊皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因阳性细胞。【结果】筛选得到转pIRES2-EGFP-4S的阳性细胞。对阳性细胞经体外培养后的检测显示:(1)细胞形态(长梭形)、细胞生长曲线(呈S形)、群体倍增时间(随培养时间增加逐渐缩短)和细胞接种率(细胞贴壁率及存活率在24 h内逐渐升高,并达到最高值125%)等均具有正常绵羊成纤维细胞的生物学特征;(2)阳性细胞经冷冻复苏后具有与新鲜阳性细胞相似的生物学特征;(3)PCR检测结果显示,pIRES2-EGFP-4S在阳性细胞的基因组中整合。【结论】获得具有在绵羊皮肤特异表达,且便于检测的转蜘蛛拖丝蛋白4S的绵羊成纤维细胞株。; 王春生原璐宁方勇吴治昊朴善花安铁洙; 关键词：真核表达载体构建转基因

绵羊Oct4基因启动子的表达活性分析: 2016年; Oct4(POU5f1)是诱导重编程的关键性因子,为检测克隆获得的绵羊Oct4基因启动子的表达活性,本研究将前期工作中克隆获得的绵羊Oct4基因启动子与携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的p Ac GFP1-N1载体相连接,构建由Oct4启动子驱动的真核表达载体(SPOct4-p Ac GFP1-N1),并采用脂质体转染法,分别转染小鼠和绵羊成纤维细胞、小鼠胚胎干细胞和小鼠胚胎,以检测其表达活性。结果表明:Oct4启动子序列含有Sp1结合位点和CAAT框等功能区;转染后,小鼠胚胎干细胞和小鼠胚胎中检测到绿色荧光,并且在转染72 h后达到最大荧光强度,而在小鼠成纤维细胞和绵羊成纤维细胞中未能观察到GFP的表达。说明由克隆获得的Oct4基因启动子驱动的真核表达载体具有在多能干细胞中特异的表达活性。; 李昊张杰安铁洙朴善花王春生; 关键词：OCT4 绵羊启动子

绵羊成纤维细胞及精子Sox2基因启动子甲基化状态检测被引量：1: 2020年; 为了探明绵羊成纤维细胞及精子中Sox2基因启动子甲基化状态的差异,试验对绵羊Sox2基因启动子进行序列查询和甲基化岛分析,提取绵羊成纤维细胞和精子基因组,用重亚硫酸盐处理,进行甲基化特异性PCR、连接和酶切鉴定,最终分别随机选取10个测序结果进行甲基化状态分析,比较二者的甲基化状态。结果表明:在精子的350个甲基化位点中,有194个位点处于非甲基化状态,156个位点处于甲基化状态,甲基化率为44.6%;在成纤维细胞的350个甲基化位点中,93个位点处于非甲基化状态,257个位点处于甲基化状态,甲基化率为73.4%;χ~2检验表明二者的甲基化状态差异极显著(P<0.01)。说明绵羊精子和成纤维细胞的Sox2基因启动子区域甲基化状态存在较大差异。; 陈胜男宋红卫李松美朴善花王春生; 关键词：绵羊精子启动子 DNA甲基化

去掉卵丘细胞或切开卵透明带对小鼠体外受精的影响被引量：7: 2001年; 探讨了去掉小鼠卵子的卵丘细胞和人工切开透明带对小鼠体外受精的影响。结果表明 ,与卵丘卵母细胞复合体相比 ,用透明质酸酶去掉卵子的卵丘细胞后的体外受精率显著降低 (分别为 5 6%和 12 %— 2 3 % ) ;当人工切开部分透明带后 ,卵子的体外受精率增至 5 6%— 87% (P <0 .0 1) ;与细胞质均质的卵子相比 ,细胞质不均卵子即使切开透明带也仅有19%— 2 2 %的卵子受精。结果表明 ,用透明质酸酶去掉小鼠卵子的卵丘细胞后 ,选择细胞均质的卵子并人工切开透明带 ,可提高小鼠的体外受精率。; 安铁洙谭建华高丰朴善花岳占碰柳巨雄解月芬葛西孙三郎; 关键词：小鼠卵丘细胞透明带体外受精

孕马血清促性腺激素对幼龄鼠卵巢和子宫发育的影响被引量：4: 2008年; 目的探明孕马血清促性腺激素（PMSG）调控哺乳动物生殖生理机制。方法用4 IU PMSG分别处理出生第5天、第10天、第15天和第21天幼鼠,观察其对卵巢和子宫发育的影响。结果（1）PMSG处理后,出生第15天幼鼠的卵巢指数（33.08%）与对照组（27.16%）间差异显著（P〈0.05）;（2）PMSG处理后,第5天、10天和第15天幼鼠的初级卵泡和有腔卵泡相对数量与对照相比无差异,而21 d处理组次级卵泡相对数量显著增加;（3）虽然出生后10 d前的幼鼠子宫对PMSG的反应较弱,但是,PMSG对出生后15-21 d幼鼠子宫重量指数、子宫肌层和子宫内膜层厚度发育具有明显的促进作用,而对子宫腺体数量增加无影响。结论PMSG对幼鼠卵巢的发育无明显影响;PMSG对出生后第15天前后的子宫发挥作用,而且其作用随着出生日龄的增加而增强。; 原璐王博朴善花谭建华安铁洙; 关键词：PMSG 雌性幼鼠卵巢子宫

转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选和鉴定: 2014年; 为了获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株,研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem-GFP-pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞,并经G418筛选获得转基因阳性细胞。其结果,获得特异表达GFP和抗菌肽基因的转基因阳性细胞;转基因阳性细胞和冷冻复苏的转基因阳性细胞经培养,其细胞形态和生长曲线均正常;经PCR检测Tem-GFP-pBC1已整合入山羊乳腺上皮细胞的基因组中,且与对照组相比,转基因细胞可以检测到Tem-GFP的表达。结果表明,获得了能够在山羊乳腺中特异表达Tem-GFP融合蛋白的转基因阳性细胞。; 王春生张志崇张秋婷朴善花仇雨歌安铁洙; 关键词：中国林蛙山羊乳腺上皮细胞

转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测: 目的：为了建立通过动物被毛获取蜘蛛拖丝蛋白的方法，本研究利用pIRES2-EGF和PMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)，构建逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP.方法：采用磷酸钙法将PMX-2S-I...; NING Fang-Yong宁方勇LIANG Yang梁洋WANG Chun-sheng王春生PIAO Shan-Hua朴善花AN Tie-zhu安铁洙; 关键词：动物病毒学逆转录病毒转基因动物

MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1: 2014年; 为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。; 李昊薛超张秋婷王春生朴善花宋红卫安铁洙; 关键词：绵羊成纤维细胞 MSTN基因 RNA干涉转基因细胞

室温条件下保存的小鼠桑椹胚的生存性: 2000年; 为了开发哺乳动物胚胎的室温保存液 ,在室温 ( 2 0℃ )条件下 ,用磷酸缓冲型 PB1、HEPES缓冲型 M2及重碳酸缓冲型 m KRB等 3种溶液及其修正液 ,保存小鼠桑椹胚 4 8h或 72 h,然后经体外培养 ,观察其发育至扩大囊胚的能力。结果 ,用 M2液保存的小鼠桑椹胚获得比较高的囊胚率 ;从 M2液中除去 Na H2 PO4、Na HCO3及葡萄糖 3种成分保存的小鼠桑椹胚 ,发育至扩大囊胚的能力显著提高 ;从溶液中除去丙酮酸钠和乳酸钠 ,或者添加 EDTA和谷氨酰胺 ,对保存后的桑椹胚发育至扩大囊胚能力无显著影响 ;而在保存液中添加犊牛血清后 ,小鼠胚胎的发育能力反而下降。结果表明 ,在室温条件下 ,不含 Na H2 PO4、Na HCO3及葡萄糖 3种成分的 M2液。; 安铁洙朴善花李青龙枝重圭佑葛西孙三郎; 关键词：小鼠桑椹胚生存性囊胚率

孕马血清促性腺激素提取与纯化的研究被引量：1: 2015年; 为了获取可用于制备抗体的高纯度孕马血清促性腺激素(PMSG)蛋白,试验采用偏磷酸-乙醇沉淀法从孕马血清中提取PMSG粗品,并在此基础上进一步探讨通过阴、阳离子柱层析提取高纯度PMSG的方法。结果表明:从1 000 mL孕马血清中平均可获得约为12.25 g的PMSG粗品,其平均PMSG比活为153.63 IU/mg;将1 000 mg PMSG粗品经阴离子柱层析后,纯化的PMSG的回收率为54.8%,但其PMSG比活仅能提高至173.08 IU/mg;再将阴离子柱层析纯化的PMSG经阳离子柱层析纯化可获得3个洗脱峰,从第3峰中可回收获得1.26 mg蛋白,其PMSG比活可达926.41 IU/mg。; 仇雨歌王博安铁洙王春生谭建华朴善花; 关键词：孕马血清纯化活性

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