王春生
- 作品数：72 被引量：130H指数：7
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>
- 变态后期中国林蛙性腺的形态与组织学观察
- 中国林蛙为无尾两栖类,其成体具有重要经济价值。迄今为止,虽然在成蛙的人工繁殖及养殖技术等方法的研究获得了大量的成果,但是,与其相比,有关幼蛙的形态学研究报道甚少, 尚未见到有关林蛙变态期性腺发育的研究报道。为了探明幼蛙性...
- 王春生白秀娟
- 关键词：中国林蛙性腺组织学
- 文献传递
- 哺乳动物黑色素生物合成及其调控机制研究进展被引量：7
- 2022年
- 黑色素对于调节哺乳动物皮肤颜色、抵御紫外线损伤以及新陈代谢等有重要作用。黑色素是一种由黑色素细胞以酪氨酸为底物合成的生物色素,其合成过程涉及一系列错综复杂的酶促反应,主要与酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1和酪氨酸酶相关蛋白-2的催化作用密不可分。包括基于阿黑皮素原介导的,PI3K/AKT、Wnt、MAPK等在内的许多信号通路可通过调节小眼球相关转录因子的转录,进而影响黑色素合成过程中关键酶的表达,最终调节黑色素的合成。除此之外,紫外线和可见光也可通过特定的信号通路影响黑色素的合成。表观遗传因素如DNA甲基化、组蛋白乙酰化、染色质重塑复合物(SWI/SNF)、microRNA、lncRNA等也影响黑色素的合成。该文总结了哺乳动物黑色素合成及代谢的上游信号分子通路并揭示其调控规律,同时对黑色素合成过程中的分子机制和表观遗传调控机制进行综述,为黑色素相关领域的研究提供参考。
- 董懿康馨月王春生
- 关键词：信号通路表观遗传
- 山羊c-Myc基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2014年
- 为了克隆出山羊c-Myc基因的CDS区序列,本研究利用RT-PCR技术,参照GenBank报道的绵羊、牛、猪、马等的c-Myc基因CDS区序列设计出特异性引物,从山羊胚胎皮肤组织中扩增出山羊c-Myc CDS区序列并进行序列分析。结果表明,山羊c-Myc基因CDS区全长1320bp(包括终止密码子),与绵羊c-Myc基因核苷酸序列(GenBank登录号:Z68501.1)比对仅有10处存在差异,其核苷酸序列同源性为99.17%,推导的氨基酸序列同源性为99.09%;与其他物种进行同源性分析结果显示,山羊c-Myc基因CDS区与猪、狼、人、大鼠、小鼠的核苷酸序列同源性分别为91.2%、92.0%、90.2%、86.9%、86.0%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、96.1%、92.3%、91.1%、89.6%;生物信息学软件分析结果表明,山羊c-Myc蛋白产物定位于细胞核并含有HLH结构域。本研究为进一步了解c-Myc基因的功能及探讨其在山羊体细胞重编程过程中的作用奠定了基础。
- 安辰瑞安铁洙张秋婷李昊朴善花王春生
- 关键词：C-MYC基因基因克隆
- microRNAs在多能干细胞向心肌细胞分化中的作用被引量：8
- 2015年
- microRNAs(miRNAs)是长约22 nt的非编码RNAs,广泛参与细胞的增殖、分化、病变、修复和凋亡等多种生命活动.多能干细胞(pluripotent stem cells)是指体外具有自我更新和多向分化潜能的细胞,在一定条件下可被定向诱导分化为多种细胞类型.miRNAs在多能干细胞中表达丰富,并通过调控基因表达影响其自我更新及分化.由多能干细胞向心肌细胞分化的方法主要有3种,即拟胚体形成法、与内胚层细胞共培养法和特定诱导物添加法.虽然这3种方法均可成功诱导多能干细胞向心肌细胞分化,但重复率很低.所以,人们把研究的视野逐渐转向miRNAs——这个广泛参与细胞生命活动的小分子物质.大量研究表明,在多能干细胞中,不同的miRNAs可通过打靶不同基因影响其向心肌细胞分化.在间充质干细胞中,miR-1、miR-133和miR-499可分别打靶Hes-1、SRF和Pdcd4;而在胚胎干细胞中,miR-1和miR-499分别打靶Hand2和Pacs2促进其向心肌细胞分化.miRNAs在多能干细胞向心肌分化作用机制的研究必将促进再生医学在心脏疾病治疗上的应用.
- 宋维文安铁洙王春生
- 关键词：MIRNA多能干细胞心肌细胞
- 肌肉特异性表达Cas9示踪同源打靶载体的构建及其在C2C12细胞中的整合被引量：1
- 2022年
- 目的本研究拟构建肌肉特异表达Cas9示踪同源打靶载体,为成肌细胞分化研究及肌肉特异表达Cas9小鼠模型制作奠定基础。方法人工合成肌肉特异启动子SP,替换PX459载体中的CMV启动子,构建肌肉特异表达Cas9载体;载体在C2C12细胞中的编辑效率由XbaI和T7E1酶切检测;在此基础上通过同源重组引入DsRed红色荧光蛋白构建Cas9示踪载体;将示踪载体的SP-Cas9-DsRed部分连接至Rosa26位点左右同源臂之间,构建肌肉特异表达Cas9示踪重组载体;将该载体与PX459-Rosa26共转染至C2C12细胞并进行嘌呤霉素筛选,观察荧光的表达,同时,提取细胞DNA进行PCR鉴定和测序,检测载体在C2C12细胞中的整合情况。结果酶切鉴定以及对目的片段的测序结果表明,成功构建了肌肉特异表达Cas9载体PX459-Rosa26-SP和肌肉特异同源打靶示踪载体Donor-Cas9-SP-DsRed;XbaI和T7E1酶切实验表明,PX459-Rosa26-SP在C2C12细胞中具有较高的编辑效率;转染后的C2C12细胞出现红色荧光,表明Donor-Cas9-SP-DsRed具有表达活性且在肌肉细胞中特异表达;PCR鉴定和测序结果表明,Donor-Cas9-SP-DsRed在C2C12细胞Rosa26位点成功整合。结论成功构建了肌肉特异表达Cas9示踪同源打靶载体Donor-Cas9-SP-DsRed,在为肌肉特异表达Cas9小鼠模型制备提供载体基础的同时,也为肌肉相关基因疾病的研究与基因治疗提供了新的思路。
- 王晓萌周慧敏董奕彤陈胜男安铁洙殷萍王春生
- 关键词：C2C12
- 拟蜘蛛拖丝蛋白基因重组蛋白的纯化及其抗血清制备
- 2011年
- 为了制备可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,利用前期工作中获得的蜘蛛拖丝蛋白基因重组原核表达载体2S-pET-52b(+),采用原核表达方法获得大量重组蜘蛛拖丝蛋白2S-His,对此重组蛋白进行His标签特异性的亲和纯化,再依次经SDS-PAGE、切胶和与佐剂混合后作为抗原;皮下多点注射法将抗原注入新西兰大白兔皮下进行免疫;采集已免疫的兔血清,采用ELISA检测方法对其效价进行检测。结果显示,重组质粒2S-pET-52b(+)转化BL21-pLysS后获得最佳的表达菌株;在筛选得到的最佳IPTG、温度和时间(分别为1.0 mmol/L、30℃和2 h)条件下诱导获得2S-His重组蛋白;经免疫的4只兔血清中,2只兔的血清效价达1∶25 600和1∶12 800。表明利用2S-pET-52b(+)重组质粒成功获得可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清。本研究为加快建立在被毛中特异表达大量蜘蛛拖丝蛋白的新方法提供依据。
- 王春生罗芳张志人赵健灵朴善花安铁洙
- 关键词：原核表达蛋白纯化抗血清制备
- 乳腺特异的甜味蛋白Brazzein基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2014年
- 为了建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法,研究在人工合成甜味蛋白Brazzein基因的基础上,利用乳腺特异表达的pBC-1载体,构建Brazzein基因的真核表达载体。结果表明:所合成的Brazzein基因与GenBank中Brazzein序列的同源性为100%,构建的克隆载体STP-pMD18-Simple正确;将甜味蛋白Brazzein基因与pBC-1载体连接后,成功构建甜味蛋白Brazzein基因的乳腺特异性表达载体STP-pBC-1。
- 安辰瑞李咏乐詹俐楠王春生朴善花安铁洙
- 关键词：乳腺甜味蛋白BRAZZEIN基因真核表达载体
- 动物发育生物学实验教学改革探索被引量：2
- 2013年
- 发育生物学是研究生物有机体发育过程与机理的一门学科,现已成为国内外各科研院所和高校生物类专业的一门重要专业课。东北林业大学生命科学院为"国家生物科学与基础研究人才培养基地"和"国家生命科学与技术人才培养基地"班学生开设动物发育生物学理论及实验教学课程,通过近7年的教学实践,在动物发育生物学实验课程教学理念、实验方法和教学内容方面进行了一系列改革,构建并实施了动物发育生物学实验教学体系,加强了对学生创新能力的培养。
- 朴善花王春生梁洋安铁洙滕春波
- 关键词：实验教学教学体系改革
- 绵羊Lin28cDNA的克隆与序列分析
- 参照GenBank上牛、猪、小鼠和人的Lin28 cDNA序列设计简并引物,利用RT-PCR技术从60d胎羊小肠总RNA中扩增得到绵羊Lin28基因编码区序列,其为包括终止密码子在内的630bp,编码有209个氨基酸.同...
- WANG Chun-sheng王春生ZHANG Zhi-Ren张志人WANG Zi-Zhu王子竹ZHANG Zhi-Chong张志崇AN Tie-zhu朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊基因克隆
- 哺乳动物DNA甲基化及其在体细胞诱导重编程中的作用被引量：3
- 2014年
- 诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cell,iPS)技术提供了将终末分化的细胞逆转为多潜能干细胞的可能,在干细胞基础理论研究和再生医学中具有重要意义。然而,目前体细胞诱导重编程方法效率极低,常发生不完全的重编程。研究表明,在不完全重编程的细胞中存在体细胞的表观遗传记忆,而DNA甲基化作为相对长期和稳定的表观遗传修饰,是影响重编程效率和iPS细胞分化能力的重要因素之一。哺乳动物DNA甲基化是指胞嘧啶第五位碳原子上的甲基化修饰,常发生于CpG位点。DNA甲基化能够调节体细胞特异基因和多能性基因的表达,因此其在哺乳动物基因调控、胚胎发育和细胞重编程过程中发挥着重要作用。此外,异常DNA甲基化可能导致iPS细胞基因印记的异常和X染色体的失活。文章重点围绕DNA甲基化的机制、分布特点、及其在体细胞诱导重编程中的作用进行了综述。
- 宋红卫安铁洙朴善花王春生
- 关键词：DNA甲基化诱导多能干细胞体细胞重编程
