高红梅
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省教育厅资助项目哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 筛选糖尿病候选药物FGF-21受体激动剂的新型细胞模型的建立被引量：3
- 2011年
- 建立以成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor-21,FGF-21)信号通路为靶点的药物筛选细胞模型,用于筛选FGF-21受体激动剂类的新型治疗糖尿病药物。FGF-21的生理功能主要是通过细胞表面的FGFR及辅助受体βklotho传递信号,从而激活细胞内相关调控的一系列信号通路以及基因转录来实现的。本实验将βklotho基因构建到逆转录病毒表达载体pBMN-IRES-EGFP。将该载体导入包装细胞,收集病毒上清液并感染3T3-L1细胞,筛选到稳定表达βklotho细胞系。该细胞模型在FGF-21作用下可以促进细胞葡萄糖转运蛋白-1表达及转运水平升高,从而提高细胞糖吸收能力。构建该细胞系可以方便对FGF-21及类似药物进行高通量筛选,为糖尿病药物的研究提供了一种新方法。
- 高红梅王文飞张巧韩阳王琪任桂萍付云威李德山
- 关键词：FGF-21药物筛选糖尿病药物
- FGF21-L-Fc融合蛋白表达及其降糖作用初步评价被引量：4
- 2011年
- 成纤维细胞生长因子-21(FGF21)是FGF家族成员之一,最近发现具有独立调节血糖的作用。为了提高FGF21稳定性来达到更好的药效,通过柔性接头连接,制备重组融合蛋白FGF21-L-Fc,并对其生物学活性和体内药效学进行初步研究。纯化后的FGF21-L-Fc融合蛋白经鉴定,其分子量和特异性均与理论值相符。经微量化的GOD-POD法检测表明,FGF21-L-Fc融合蛋白能刺激体外培养的已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖吸收,其葡萄糖消耗率与野生型相比有很大提高;在STZ造模糖尿病小鼠体内,其药效比野生型持续时间长。结果表明,改造的蛋白比野生型药效更持久,为以后FGF21的临床应用奠定了基础。
- 姚文兵任桂萍韩阳曹宏伟高红梅阚方明王琪李德山
- 关键词：葡萄糖吸收稳定性
- 小鼠白细胞介素17A的克隆、表达及活性鉴定
- 2010年
- 目的:克隆小鼠白细胞介素17A(mIL-17A)基因,构建mIL-17A原核表达质粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS表达,得到有活性的mIL-17A蛋白。方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-17A序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-17A的编码序列并构建到pMD18-T载体中,再亚克隆至原核表达载体pHisSUMO Express中,经DNA测序鉴定后转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定。纯化后的蛋白处理3T3-L1前体脂肪细胞,real time PCR鉴定白细胞介素6(IL-6)的表达变化。结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致。成功构建了pHisSUMO Express-mIL-17A原核表达质粒以包涵体形式表达了重组mIL-17A蛋白,且Western blot证实为目的蛋白。所得蛋白上调3T3-L1细胞表达IL-6。结论:获得具有生物活性的mIL-17A蛋白,为进一步研究其蛋白特性及其生物活性奠定基础。
- 张薇高红梅叶贤龙于艺雪刘铭瑶王文飞任桂萍李德山
- 关键词：克隆包涵体活性鉴定
