侯向前
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达HIV-1gag蛋白重组乳酸乳球菌株的建立及其在小鼠体内定植的研究被引量：3
- 2013年
- 目的构建表达HIV-1gag的重组乳酸乳球菌，并分析重组菌在小鼠体内的定植情况。方法将HIV-1gag克隆至原核表达质粒pMG36e，重组质粒pMG36e-gag电转乳酸乳球菌，SDS-PAGE和Western blot法检测其在乳酸乳球菌中的表达。以10^9个重组菌给小鼠口服，对照组口服PBS。口服后第1、3、5、7、9、11天分别取小鼠的胃、小肠和大肠，采用稀释滴种法测定小鼠胃、肠道内重组菌的数量。结果酶切和DNA测序表明gag已克隆人pMG36e。SDS—PAGE在预期位置检测到蛋白条带，Western blot分析证实其为gag蛋白。重组菌定植实验表明，第1、3天在胃肠均有一定量重组菌，且大肠中重组菌数量多于胃和小肠，随后胃肠中重组菌均迅速减少，仅在大肠中仍有一定量的重组菌，第11天时胃肠仅分离到极少量的重组菌。结论本研究获得胞内表达HIV-1gag前体蛋白Pr55的重组乳酸乳球菌，其可在胃肠中短期存活，可作为预防HIV-1感染的候选疫苗。
- 张彩荣吴玲玲侯向前马正海
- 关键词：乳酸乳球菌HIV-1GAG定植黏膜免疫
- HPV-16 URR突变对病毒早期启动子活性影响的研究
- 2017年
- 背景与目的:新疆是宫颈癌高发区,该地区宫颈癌高发与人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV-16)感染密切相关。该研究旨在分析新疆地区妇女宫颈病样组织中HPV-16上游调控区(upstream regulatory region,URR)的突变及其功能。方法:以新疆妇女子宫颈上皮非典型增生(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌病样组织标本DNA为模板,PCR扩增HPV-16 URR片段,PCR产物经测序比对,筛选代表性的URR突变体构建至p GL3-Basic载体,将其转染Vero细胞,48 h后检测荧光素酶活性,分析URR突变体启动子活性。结果:采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)获得了55个HPV-16 URR DNA片段,测序及序列分析发现44个突变位点,其中nt7192(G→T)、nt7433(-→T)、nt7435(C→G)和nt7863(A→-)4个位点的突变为所有序列共有,nt7520(G→A)位点的突变存在于54个样品中,剩余39个位点的突变存在于不同样品中。根据突变的位置、频率和程度,筛选出9个URR突变体分别克隆至p GL3-Basic中荧光素酶基因前并转染Vero细胞。荧光素酶活性分析表明,不同URR突变体的启动子活性差异较大,来源于宫颈癌的URR突变体启动子活性显著高于来源于CIN的URR突变体(P<0.01),部分宫颈癌URR突变体的启动子活性显著高于Si Ha和Caski细胞来源的URR参照序列的启动子活性。结论:新疆地区分离的HPV-16URR发生多位点突变,其中部分突变增强了URR内部启动子的活性,导致HPV-16致癌活性增强。
- 宋丹史茜侯向前玛依努尔.尼亚孜马正海
- 关键词：人乳头瘤病毒16型上游调控区突变启动子
- HPV-16 E1蛋白的表达、纯化及其抗体制备被引量：3
- 2011年
- 目的:在原核细胞中表达、纯化人乳头状瘤病毒16型(HPV-16)E1蛋白并制备HPV-16 E1特异性抗体。方法:PCR扩增HPV-16 E1基因,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度与IPTG浓度优化HPV-16 E1蛋白可溶性表达的条件,并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下及足垫免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性。结果:酶切和测序结果表明HPV-16 E1基因已克隆入pMAL-p2x。经优化筛选出HPV-16 E1融合蛋白诱导表达的最佳条件为28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L。经麦芽糖亲和层析法纯化获得了HPV-16 E1可溶蛋白,纯度达到95.7%。West-ern blot检测证明制备的抗血清能与HPV-16 E1蛋白特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1∶640 000以上。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得了HPV-16 E1蛋白,该蛋白免疫新西兰白兔制备了高效价的HPV-16 E1蛋白抗血清,为HPV-16 E1功能研究提供了抗原和检测用抗体。
- 史茜侯向前郭景霞朱慧马正海
- 关键词：HPV-16E1基因原核表达纯化抗体
- 新疆妇女宫颈癌组织中HPV-16 E1/dup突变体分布的研究被引量：1
- 2012年
- 目的检测HPV-16 1311～1773位63bp重复序列插入突变的E1基因(E1/dup)在宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌病变组织中的分布及病毒的整合状态,探讨该突变对病毒致癌活性的影响.方法收集维吾尔族和汉族宫颈炎、CIN和宫颈癌临床组织标本215例,提取组织DNA,PCR检测E1/dup突变体以及病毒E1/E2基因的完整性.结果新疆地区215例宫颈病变组织中HPV-16 E1检出率为60.00%(129/215),宫颈炎、CIN及宫颈癌病样中HPV-16 E1的检出率分别为31.15%(19/61)、49.21%(31/63)和86.81%(79/91).在HPV-16E1阳性病样中,HPV-16 E1/dup突变率为37.21%(48/129),宫颈炎、CIN和宫颈癌病样中E1/dup突变率分别为15.79%、22.58%和48.10%,E1/dup突变率在宫颈癌中显著高于宫颈炎(P<0.05)和CIN(P<0.05).E1/dup突变率在汉族和维吾尔族宫颈癌病样中分别为40.00%(6/15)和50.00%(32/64),两者无显著性差异(P>0.05).在HPV-16 E1阳性病样中病毒整合率为51.72%(60/116),E1/dup突变病样中HPV16整合率[69.05%(29/42)]明显高于未发生E1/dup突变的病样[41.89%(31/74)](P<0.05).结论新疆地区E1/dup突变率在宫颈癌中显著高于宫颈炎及CIN,E1/dup与病毒致癌活性及病毒整合相关.
- 侯向前史茜朱开春玛依努尔.尼亚孜马正海
- 关键词：HPV-16宫颈癌E1
