田志华
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 双功能试剂与螯合金属元素标记多肽新技术的建立
- 2016年
- 建立了双功能试剂2-[(4-异硫氰基苯基)甲基]-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(p-SCN-Bn-DOTA)与标准肽段反应的新方法,测定了反应产物与镧系金属Eu(Ⅲ)的螯合效率,探索了其作为靶向探针和蛋白定量标记试剂性能。考察了不同缓冲体系的浓度及pH值、p-SCN-Bn-DOTA量与肽段相对量、反应体系中有机相与水相比例,反应温度与反应时间对偶联效率的影响。实验结果显示:p-SCN-Bn-DOTA量为肽段的32倍,缓冲体系为0.2 mol/L TEAB(pH 8.5),60℃反应60 min,有机相与水相之比为4.4∶1(V/V)时标记效率高;在HCl/Na Ac缓冲体系(pH 4.0)中60℃反应60 min,金属离子鳌合反应效率高达94%。本研究建立了一种新的基于双功能试剂p-SCN-Bn-DOTA的标记方法,并成功用于RGD肽等的标记。
- 田慧芳徐庆春丁慧荣田志华张宏朱华王昕沈靖
- 关键词：多肽蛋白定量质谱
- GFP/DNA双标记法流式细胞仪分析荧光补偿调节方法的建立
- 2012年
- 用PI或Hoechst 33342标记表达GFP基因的BGH 823细胞DNA,流式检测分析时,需要做荧光补偿。以此为例,建立了线性(DNA含量)和对数(GFP表达量)放大信号之间的荧光补偿调节方法。结果表明,建立的补偿调节方法对于GFP/DNA双标记实验,完全适用和有效;它既实现了在同一散点图上同时呈现线性与对数放大,也提供了对数和线性2种不同荧光信号参数发生荧光重叠时进行补偿调节的方法。
- 丁慧荣刘锡娟田志华张宏
- 关键词：流式细胞术
- FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群被引量：7
- 2014年
- BGC823细胞瞬时转染绿色荧光蛋白(GFP)质粒2 d后,用FACSAria流式细胞仪分选GFP阳性和阴性BGC823细胞亚群,检测其分选纯度并培养分选后细胞,观察其无菌生长状态;商品化FITC直标抗体孵育SMMC7721细胞后,FACSAria流式细胞仪分选FITC阳性和阴性细胞亚群。将所有分选的细胞进行培养检测无菌状态,并观察细胞生长情况。FACSAria流式细胞仪分选得到的GFP阳性细胞群的分选纯度达99.6%,GFP阴性细胞群的分选纯度达98.8%,同时激光共聚焦荧光显微镜显示分选后的GFP阳性细胞明显富集;分选后的BGC823细胞和SMMC7721细胞常规培养,细胞均无污染且生长状态良好。
- 刘锡娟丁慧荣田志华韩海勃张宏
- 关键词：流式细胞仪
