丁苗苗 作品数:8 被引量:21 H指数:3 供职机构: 宁夏大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
干旱胁迫下发菜蔗糖合成酶基因Sus2克隆与差异表达 被引量:9 2018年 蔗糖合成酶(Sus2)是调控蔗糖代谢的关键酶。为了解发菜Sus2分子信息及其对干旱胁迫的响应,设计特异性引物克隆发菜Sus2全长并进行序列分析和原核表达,分析干旱胁迫下发菜Sus2在转录水平上表达变化和蔗糖含量变化。结果表明,发菜Sus2基因全长312 bp (GeenBank登录号为MG598619),与点形念珠藻的Sus2基因及其推译氨基酸的序列相似性分别为94%和93%。推译氨基酸在第81位的Ile疏水性最强,在第27位的Gln亲水性最强。Thr有3个磷酸化位点,Ser有12个磷酸化位点,Tyr有3个磷酸化位点。Sus2蛋白二级结构及三级结构由α螺旋、β折叠、随机卷曲和β转角共同构成。将Sus2基因进行原核表达,得到一个12.29 kD的外源蛋白,LC-MS/MS分析证明该外源蛋白为蔗糖合成酶。干旱胁迫下发菜Sus2在转录水平的表达量和蔗糖含量均逐渐增加。研究结果为进一步认识发菜Sus2的分子信息以及干旱胁迫下发菜蔗糖代谢的分子机理提供了科学依据。 李晓旭 丁苗苗 刘阳 王猛 严奉坤 梁文裕 徐婷婷 王俊 王玲霞关键词:发菜 蔗糖合成酶 克隆 干旱胁迫 发菜固氮酶nifH基因克隆及其干旱胁迫下的差异表达 被引量:3 2017年 通过对发菜固氮酶H亚基基因(nifH)全长进行克隆、原核表达和生物信息学分析,采用qRT-PCR技术,分析不同干旱胁迫下发菜固氮酶基因nifH在转录水平的表达变化。结果表明,根据特异性引物克隆获得长度为894bp的nifH,GenBank登陆号为BankIt1901364(KU886163)。将nifH在大肠杆菌中表达,获得约36ku的外源蛋白。生物信息学分析表明,发菜nifH与已报道的多种蓝藻的nifH及推导的氨基酸序列具有较高的相似性,nifH二级结构和三级结构主要由α螺旋、β-折叠、随机卷曲和β-转角构成。随藻体含水量的逐渐降低,发菜nifH在转录水平上的表达量逐渐增加,固氮酶活性呈现先增加后下降的趋势。研究结果为进一步研究发菜固氮酶基因的分子结构和发菜响应干旱胁迫的固氮机制及氮代谢过程奠定基础。 吴诗杰 王玲霞 刘阳 严奉坤 丁苗苗 李晓旭 梁文裕关键词:发菜 固氮酶 基因克隆 生物信息学 发菜GPR基因(proA)克隆及其干旱胁迫下的差异表达 被引量:1 2019年 proA编码的γ-谷氨酰磷酸还原酶(GPR)是脯氨酸合成途径的关键酶。该研究通过设计特异性引物克隆获得全长1 308 bp的发菜proA基因(GenBank登录号为KX553954)。与点形念珠藻的proA基因及其推译的氨基酸序列相似性分别为91%和93%;氨基酸序列中第123位的Leu疏水性最强,第80位的Lys亲水性最强;Thr、Ser和Tyr分别有19、12、4个磷酸化位点;proA编码的蛋白为膜外蛋白,其二级结构由α螺旋、β折叠、无规卷曲和β转角构成。将proA基因在大肠杆菌表达,获得一个47.22 kD的外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS分析证明该外源蛋白为γ-谷氨酰磷酸还原酶。随着干旱胁迫程度的增加,发菜proA在转录水平的差异表达及脯氨酸含量均呈现增加的趋势。研究结果对深入研究发菜proA的分子功能及阐明其在干旱胁迫下的调控机制具有重要意义。 丁苗苗 刘阳 李晓旭 王猛 田姣 王玲霞 徐婷婷 纳小凡 梁文裕关键词:干旱胁迫 发菜 发菜磷酸葡糖胺变位酶(glmM)对干旱胁迫的响应及其基因克隆 2020年 glmM编码的磷酸葡糖胺变位酶是肽聚糖合成前体的关键酶。为探究发菜glmM响应干旱胁迫的表达调控机制及明确其分子信息,本研究对干旱胁迫条件下发菜glmM在转录水平的差异表达进行了分析,并对glmM的表达水平、磷酸化修饰、乙酰化修饰和琥珀酰化修饰水平进行了检测,克隆了发菜glmM,进行了序列分析和原核表达。结果表明,干旱胁迫条件下,发菜glmM在转录水平上的表达量先增加后减少,glmM上调表达,glmM的磷酸化修饰水平逐渐增加,乙酰化修饰水平相对稳定,琥珀酰化修饰水平有明显变化。设计特异性引物克隆glmM基因,获得全长1416 bp发菜glmM基因,与肺衣(5183)glmM的核苷酸序列同源性为95%,氨基酸同源性为97%。将glmM在大肠杆菌中表达,获得一个51.45 kD的外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS分析证明该蛋白为磷酸葡糖胺变位酶。研究结果为深入研究发菜glmM的分子信息、生物学功能及其响应干旱胁迫的分子机制提供帮助。 王猛 严奉坤 李晓旭 丁苗苗 张筝 石晶 王玲霞 梁文裕关键词:发菜 干旱胁迫 基因克隆 发菜固氮基因nifD和nifK克隆及其失水条件下的差异表达 2019年 nifD和nifK编码钼铁固氮酶中的钼铁蛋白。为了解发菜nifD和nifK分子信息及对水分胁迫的响应机制,该研究设计了简并性引物克隆发菜nifD和nifK全长,进行原核表达和生物信息学分析,并对不同失水状态下发菜nifD和nifK在转录水平的差异表达和固氮酶活性的变化进行分析。结果表明,发菜nifD和nifK全长分别为1 443 bp和1 536 bp (登陆号为分别为KU886164和KU886165);将nifD和nifK在大肠杆菌中表达,分别获得一个约57 kD和58 kD的外源蛋白;生物信息学分析表明,nifD和nifK核苷酸序列和推译的氨基酸序列均与点形念珠藻(Nostoc punctiforme PCC 73102)高度一致性;nifD和nifK的二级结构主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角和随机卷曲。此外,随着藻体含水量的逐渐降低,发菜nifD和nifK在转录水平上的表达量逐渐增加,但固氮酶活性呈现先增加后下降的趋势。研究结果为深入全面研究发菜固氮酶基因结构及其响应水分胁迫的固氮机理及氮代谢途径提供了基础。 吴诗杰 严奉坤 丁苗苗 李晓旭 刘阳 王玲霞 梁文裕关键词:发菜 发菜G6PDH基因(GND)克隆及其干旱胁迫下的差异表达分析 被引量:7 2017年 由GND编码的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)是戊糖磷酸途径的关键酶。为了解发菜GND分子信息以及对干旱胁迫的响应机制,该研究设计了特异性引物克隆发菜GND全长,进行序列分析、原核表达和MALDITOF-TOF/MS鉴定,并对干旱胁迫下发菜GND的差异表达水平和G6PDH活性进行分析。结果表明:(1)发菜GND全长1 431bp(GenBank登录号为KX553955),与点形念珠藻(73102)的GND核苷酸序列相似性为96%,G6PDH氨基酸相似性为98%;氨基酸序列中第26和27位的Ile疏水性最强,在第302位的Arg亲水性最强,Thr有19个磷酸化位点,Ser有18个磷酸化位点,Tys有5个磷酸化位点,二级结构和三级结构主要由α螺旋、β折叠、β转角和随机卷曲构成。(2)将GND基因进行原核表达,获得47.23kD的外源表达蛋白G6PDH。(3)随干旱胁迫程度加剧,GND在转录水平的表达量和G6PDH活性均逐渐增加。研究结果为进一步探讨干旱胁迫条件下发菜GND表达调控奠定了基础。 刘阳 严奉坤 丁苗苗 李晓旭 王玲霞 岳思君 梁文裕关键词:发菜 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 克隆 荇菜组织培养及植株再生体系的建立 被引量:2 2019年 荇菜(Nymphoides peltatum)是一种具有观赏、药用及水质净化作用的水生植物。为建立荇菜组织培养和离体再生体系,以野生荇菜为材料,研究了不同外植体(根,茎和叶)和不同植物生长调节剂配比对其愈伤组织、不定芽和再生根诱导分化的影响。结果表明,培养基为MS+NAA(0.3 mg/L)+6-BA(1.0 mg/L)时,叶的愈伤组织诱导率为73.3%;MS+NAA(0.2 mg/L)+6-BA(1.5 mg/L)培养基中丛生芽的诱导率达到76.7%,形成的丛生芽长势较好;培养基为MS+NAA(0.3 mg/L)+6-BA(1.0 mg/L)时,带节茎段不定芽诱导率达66.7%;采用MS+NAA(0.3 mg/L)培养基诱导不定根,生根率为100%。再生苗移栽后存活率可达90%。研究结果为快速恢复和保护荇菜资源,并利用遗传转化实现新种质培育提供了实验依据。 杨涓 王猛 华剑锋 常皓然 李晓旭 丁苗苗 王玲霞 梁文裕关键词:植株再生 植物生长调节剂 发菜1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)的基因克隆及其对干旱胁迫的响应 被引量:1 2019年 由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS质谱分析表明外源蛋白为GBE。发菜glgB与点形念珠藻的glgB序列相似性为94%,氨基酸序列相似性为97%;GBE在第747位的甘氨酸疏水性最强,第168位的组氨酸亲水性最强;Thr有15个磷酸化位点,Tyr有12个磷酸化位点、Ser有27个磷酸化位点;GBE二级结构及三级结构由α螺旋、β折叠、随机卷曲和β转角构成。发菜glgB在干旱胁迫下转录水平的表达量逐渐增加,GBE含量增加,糖原合成酶活性和糖原含量均先增加后降低。研究结果为认识glgB基因信息和发菜响应干旱胁迫的糖原代谢和调控机制提供了依据。 李晓旭 丁苗苗 王猛 严奉坤 张筝 梁文裕 徐婷婷 王俊 王玲霞关键词:克隆 干旱胁迫