李艳萌
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市优秀人才培养资助北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- GTF2H2的核苷酸切除修复功能对肝癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨通用转录因子ⅡH亚基2(GTF2H2)在肝癌细胞中的核苷酸切除修复(NER)功能及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法使用siRNA构建GTF2H2敲低的肝癌细胞模型,采用细胞计数试剂盒(CCK8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;流式细胞术检测肝癌细胞株的凋亡情况。定量实时聚合酶链式反应(q-RT-PCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)的表达情况。进一步构建肝癌细胞的紫外线(UV)照射模型,分析GTF2H2敲低后UV照射引起的NER的标志物环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和嘧啶(6-4)嘧啶酮光产物(6-4PP)的变化。结果GTF2H2敲低的肝癌细胞增殖能力相对明显增强增殖蛋白PCNA的表达相对增多。相反,凋亡能力相对减弱凋亡蛋白Caspase-3的表达相对降低。而GTF2H2敲低后,UV照射所致的NER标志物CPD和6-4PP含量相对增加。结论GTF2H2在肝癌细胞中发挥了NER功能,抑制了肝癌细胞的增殖,促进其凋亡,是肝癌发生的一个潜在抑制因子。
- 周冬虎李艳萌贾思雨王何静齐赛平黄坚
- 关键词：核苷酸切除修复肝癌细胞增殖凋亡
- GTF2H2通过介导AKT信号通路影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移
- 2021年
- 目的:探讨通用转录因子II H亚基2(GTF2H2)是否影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移及其潜在的分子机制。方法:通过转染GTF2H2-siRNA构建GTF2H2敲低的Hep3B肝癌细胞模型;实时定量聚合酶链反应(q-RT-PCR)和蛋白质印迹实验检测肝癌细胞Hep3B的GTF2H2敲低效果;细胞计数实验(MTS)检测GTF2H2敲低的肝癌细胞Hep3B的增殖能力;Transwell细胞迁移实验检测GTF2H2敲低的肝癌细胞Hep3B的迁移能力;蛋白质印迹分析实验检测GTF2H2敲低后是否影响肿瘤相关分子信号通路。结果:GTF2H2敲低组的Hep3B细胞的增殖能力较对照组的Hep3B细胞增强,迁移能力亦有增强;蛋白质印迹实验显示GTF2H2敲低后,p-AKT通路蛋白的表达明显升高。结论:GTF2H2可能通过介导AKT分子信号通路,影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力。
- 欧阳琴李艳萌徐安健周冬虎李振坤黄坚
- 关键词：HEP3BP-AKT增殖迁移
- 基于转录组测序探究ATP7B基因缺陷小鼠铜累积诱导肝细胞自噬的相关机制被引量：5
- 2021年
- 目的:分析ATP7B基因缺陷(Wilson’s disease,WD)小鼠肝脏组织中自噬相关基因的表达和自噬相关蛋白的相互作用方式,探讨铜累积诱导肝内自噬活化的可能机制。方法:对4周龄和12周龄WD小鼠肝组织进行铜含量检测和转录组测序,对差异基因进行GO和KEGG富集分析,筛选自噬相关差异基因做qRT-PCR和Western blot验证,采用GeneMANIA数据库构建自噬相关差异蛋白的互作网络(PPI)并进行功能注释分析,抑制自噬相关蛋白的表达分析其对自噬的影响。结果:与野生型小鼠相比,WD小鼠肝铜含量显著升高,铜累积导致基因表达模式改变;基于GO数据库统计自噬相关差异基因数目,4周龄和12周龄分别有8个、51个,基于KEGG数据库统计,4周龄和12周龄分别有5个、19个;筛选Ulk1、Ddit4、Plk3等9个基因进行qRT-PCR,定量结果与测序结果表达趋势基本一致;其编码的蛋白质通过共表达、共定位等方式互相作用;Western blot结果显示铜累积导致Ulk1、Plk3、Park2蛋白表达显著增加和细胞自噬发生,抑制Ulk1、Plk3、Park2的蛋白质表达可显著下调细胞自噬水平。结论:WD不同阶段的铜累积可调节肝脏多个自噬相关基因的表达,通过其编码的自噬相关蛋白的互相作用共同诱导肝脏自噬活化以缓解肝损伤。
- 李潇瑾李艳萌李振坤徐安健杨晓曦黄坚
- 关键词：ATP7B肝豆状核变性自噬
- 雌激素通过NF-κB信号通路影响肝癌细胞的肿瘤学行为研究被引量：4
- 2019年
- 目的探讨雌激素对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖及迁移能力的抑制和诱导凋亡的作用及其相应机制。方法利用MTS试验检测不同浓度的雌激素在不同时间点对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖能力的影响。Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度的雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞凋亡的情况。Transwell迁移实验检测雌激素对HepG2和BEL7402细胞迁移能力的影响。采用Western blotting法检测不同浓度下雌激素对肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性及其下游相关基因c-Myc、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2表达的影响。结果 MTS试验结果显示,在不同时间点雌激素有效抑制了HepG2和BEL7402细胞的增殖,并随着雌激素浓度的升高其抑制肝癌细胞增殖的效果逐渐增强,与此同时,雌激素也降低了c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因的表达。Annexin V/PI流式细胞术数据显示雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞的凋亡并呈明显剂量依赖性,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达出现下降。Transwell迁移实验证明雌激素明显抑制了HepG2和BEL7402细胞的迁移能力并且降低了MMP-9和VEGF的表达。验证了雌激素可有效抑制HepG2和BEL7402肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性。结论雌激素通过下调NF-κB信号通路的活性及下游相关分子的表达,而抑制肝癌细胞的增殖与迁移并诱导其凋亡。
- 李艳萌贾思雨徐安健黄坚
- 关键词：肝癌细胞雌激素NF-ΚB信号通路
- 3个携带HJV E3D变异的遗传性血色病家系临床表型分析被引量：1
- 2017年
- 目的了解3个携带HJV E3D变异的遗传性血色病家系基因变异及临床表型特点。方法 3个遗传性血色病家系中的先证者均完成了病史采集、铁指标、肝功能、腹部核磁检查、肝活检,排除铁过载的继发性原因,临床考虑为遗传性血色病。先证者及其一级亲属分别检测目前已知的遗传性血色病相关的5个基因(HFE、HAMP、HJV、TFR2和SLC40A1)。结果 3个携带HJV E3D变异的遗传性血色病先证者均具有明确的铁过载表现,家系1和家系2中各有1个成员具有铁过载。2例携带HJV E3D变异的先证者还同时携带其他类型血色病基因变异。结论 HJV基因E3D变异可能为我国遗传性血色病的热点变异,可能需要同时伴随其他位点变异才会出现表型,且男性、年龄增加更容易出现血色病表型。
- 张伟吕婷霞李艳萌王晓明赵新颜王宇徐安健李潇瑾黄坚欧晓娟
- 关键词：血色病表型家系分析
- 人组氨酸磷酸酶蛋白PHPT1的细胞定位及其对细胞层状伪足形成的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:获取人组氨酸磷酸酶蛋白PHPT1基因,并构建其C端GFP融合的真核表达载体,通过瞬时转染观察融合蛋白在细胞内的表达和定位,并研究其定位与细胞层状伪足形成的关系。方法:以人宫颈癌细胞株HeLa cDNA为模板,PCR扩增PHPT1的全长编码基因,克隆到pEGFPN2载体中,构建pEGFP-N2-PHPT1真核表达载体,利用脂质体将构建的载体转染到HeLa细胞中,用激光共聚焦扫描显微镜观察C端GFP连接的PHPT1的细胞定位,并进一步探讨其定位与细胞层状伪足形成的关系。结果:成功构建了PHPT1的GFP融合表达载体pEGFP-N2-PHPT1,并在He La细胞中检测到了融合蛋白的表达,发现其定位与细胞层状伪足的形成密切相关,并可直接影响细胞的运动能力。结论:GFP融合形式表达的PHPT1蛋白在细胞质和细胞核中均有表达,并且定位于细胞层状伪足的前沿,影响细胞层状伪足的形成,从而影响细胞运动。
- 徐安健李艳萌李斯文乌姗娜张蓓黄坚
- PHP14沉默对肺癌细胞凋亡的影响及其机制被引量：1
- 2017年
- 目的:在肺癌细胞中沉默PHP14,并研究其对肺癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:利用shRNA稳定沉默肺癌细胞株A549中PHP14的表达,并利用Annexin V、PI双染和流式细胞仪检测细胞在正常培养条件下和凋亡诱导条件下的凋亡情况;通过皮下接种裸鼠,探讨PHP14沉默对肺癌细胞体内成瘤的影响,并利用Realtime-PCR和Western blotting检测PHP14沉默后凋亡相关基因的表达情况。结果:成功获得了PHP14稳定沉默的肺癌细胞株,发现PHP14沉默可促进肺癌细胞诱导性凋亡,并抑制肺癌细胞的体内成瘤能力,并且发现PHP14沉默对肺癌细胞凋亡的影响可能是通过抑制Bcl-2表达实现的。结论:PHP14沉默可促进肺癌细胞诱导性凋亡,并可能通过抑制Bcl-2影响肺癌细胞凋亡。
- 徐安健李艳萌李斯文乌姗娜张蓓黄坚
- 关键词：细胞凋亡体内成瘤BCL-2
- PHP14通过与Vimentin相互作用影响TGF-β诱导的肝细胞AML-12上皮-间质转化被引量：3
- 2021年
- 目的:探讨PHP14在上皮-间质转化中的作用及其可能作用机制。方法:建立了研究上皮-间质转化的细胞模型小鼠肝细胞AML-12。在AML-12中过表达PHP14,通过光学显微镜进行形态学观察,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测AML-12上皮-间质转化中相关标志物的表达情况。通过免疫共沉淀检测PHP14与Vimentin的相互作用情况。结果:小鼠肝细胞AML-12可作为研究上皮-间质转化的较好细胞模型。在AML-12中过表达PHP14可促进AML-12细胞的上皮-间质转化,并增强其运动能力。过表达PHP14可上调Vimentin的蛋白质水平,而对其他上皮-间质转化相关标志物表达没有影响。进一步的研究发现,PHP14可与Vimentin相互作用。结论:PHP14通过与Vimentin相互作用,稳定Vimentin的蛋白质水平,从而参与并调节上皮-间质转化。
- 徐安健李艳萌乌姗娜张蓓姚静怡
- 关键词：上皮-间质转化细胞运动
- 神经酰胺在Wilson病铜累积诱导肝损伤和肝细胞凋亡中的作用和机制被引量：3
- 2022年
- 目的探讨神经酰胺在威尔逊病(WD)铜累积诱导肝细胞损伤凋亡中的调控作用及其机制。方法对WD小鼠肝组织进行转录组测序并对神经酰胺相关差异基因进行富集分析和反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)验证。采用Gene MANIA数据库构建神经酰胺相关差异蛋白和凋亡效应蛋白互作网络(PPI)。利用不同浓度高铜溶液处理肝癌细胞,分析胞内铜累积、细胞凋亡率与胞内神经酰胺含量的相关性。利用多球壳菌素抑制神经酰胺合成并检测细胞凋亡率和凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化,明确神经酰胺作用机制。结果与野生型小鼠相比,WD小鼠肝内神经酰胺相关基因Smpd3和Cerk表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝癌细胞内铜累积诱导细胞凋亡率显著升高,神经酰胺合成量也显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制神经酰胺的合成可通过调控凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达显著减少细胞凋亡率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论WD中肝脏内累积的高铜可通过促进神经酰胺的合成调控下游凋亡效应分子Bax、Bcl-2的表达而引起肝细胞凋亡和肝脏损伤。
- 李潇瑾李艳萌李振坤徐安健杨晓曦黄坚
- 关键词：神经酰胺肝豆状核变性
