黄坚
- 作品数：52 被引量：128H指数：7
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金王宝恩肝纤维化研究基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GTF2H2的核苷酸切除修复功能对肝癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨通用转录因子ⅡH亚基2(GTF2H2)在肝癌细胞中的核苷酸切除修复(NER)功能及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法使用siRNA构建GTF2H2敲低的肝癌细胞模型,采用细胞计数试剂盒(CCK8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;流式细胞术检测肝癌细胞株的凋亡情况。定量实时聚合酶链式反应(q-RT-PCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)的表达情况。进一步构建肝癌细胞的紫外线(UV)照射模型,分析GTF2H2敲低后UV照射引起的NER的标志物环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和嘧啶(6-4)嘧啶酮光产物(6-4PP)的变化。结果GTF2H2敲低的肝癌细胞增殖能力相对明显增强增殖蛋白PCNA的表达相对增多。相反,凋亡能力相对减弱凋亡蛋白Caspase-3的表达相对降低。而GTF2H2敲低后,UV照射所致的NER标志物CPD和6-4PP含量相对增加。结论GTF2H2在肝癌细胞中发挥了NER功能,抑制了肝癌细胞的增殖,促进其凋亡,是肝癌发生的一个潜在抑制因子。
- 周冬虎李艳萌贾思雨王何静齐赛平黄坚
- 关键词：核苷酸切除修复肝癌细胞增殖凋亡
- 21例肝豆状核变性临床及病理形态特点分析被引量：4
- 2018年
- 目的总结肝豆状核变性患者肝脏临床及病理形态学特征,提高对该病的诊断水平。方法回顾性分析我院2013年1月至2018年8月期间明确诊断肝豆状核变性并行肝脏活组织检查的病例21例,分析患者的肝脏病理形态学特点及临床特征。采用Fisher精确检验法分析肝穿刺及肝移植活组织检查中病理形态学的差异,分析病理模式与活组织检查类型及临床指标之间的关系。结果21例肝豆状核变性患者中有10例行肝脏穿刺活组织检查,11例行肝移植切除病肝活组织检查;表现为单纯性脂肪肝模式4例(19.0%,4/21)、脂肪性肝炎样模式8例(38.1%,8/21)、炎症坏死不伴肝硬化模式4例(19.0%,4/21)、炎症坏死伴肝硬化模式5例(23.9%,5/21)。肝脏内出现铜沉积12例(57.1%,12/21),且铜在肝脏内分布不均。结论肝豆状核变性肝脏形态学主要表现为4种模式,但缺乏特征性改变,应该结合患者的临床病史、实验室检查、基因检测结果及肝脏形态学改变进行综合判断。
- 王琳孙丽莹黄坚陈光勇赵新颜
- 关键词：肝豆状核变性
- 肝豆状核变性ATP7B多位点突变检测试剂盒
- 本发明公开了一种肝豆状核变性ATP7B多位点突变检测试剂盒，该试剂盒包括分别针对ATP7B的三个突变位点p.R778L,p.P992L和p.V1106I进行非标记探针HRM检测用的引物对及探针，以及标准品。本发明所述试剂...
- 黄坚徐安健吕婷霞
- 文献传递
- 肝纤维化逆转过程中的肝星状细胞清除
- 2013年
- 在各种慢性肝脏疾病进展过程中，由于肝内纤维生成与降解失衡，致使过多的细胞外基质在肝内沉积，导致肝纤维化形成，常伴有炎症反应并可发展为肝硬化。肝星状细胞（HSC）的活化与增殖是肝纤维化发生的中心环节；活化的HSC数量的减少是肝纤维化逆转的重要标志。
- 张宁黄坚
- 关键词：肝纤维化逆转细胞清除肝纤维化形成细胞外基质肝星状细胞疾病进展
- GTF2H2通过介导AKT信号通路影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移
- 2021年
- 目的:探讨通用转录因子II H亚基2(GTF2H2)是否影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移及其潜在的分子机制。方法:通过转染GTF2H2-siRNA构建GTF2H2敲低的Hep3B肝癌细胞模型;实时定量聚合酶链反应(q-RT-PCR)和蛋白质印迹实验检测肝癌细胞Hep3B的GTF2H2敲低效果;细胞计数实验(MTS)检测GTF2H2敲低的肝癌细胞Hep3B的增殖能力;Transwell细胞迁移实验检测GTF2H2敲低的肝癌细胞Hep3B的迁移能力;蛋白质印迹分析实验检测GTF2H2敲低后是否影响肿瘤相关分子信号通路。结果:GTF2H2敲低组的Hep3B细胞的增殖能力较对照组的Hep3B细胞增强,迁移能力亦有增强;蛋白质印迹实验显示GTF2H2敲低后,p-AKT通路蛋白的表达明显升高。结论:GTF2H2可能通过介导AKT分子信号通路,影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力。
- 欧阳琴李艳萌徐安健周冬虎李振坤黄坚
- 关键词：HEP3BP-AKT增殖迁移
- 中国华北人群中原发性肝癌P14ARF基因启动子甲基化及其临床相关性分析
- 目的原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,起病隐匿,发病机制不详。TP53路径的分子遗传学改变有可能与原发性肝癌发生发展相关。通过对中国华北人群原发性肝癌TP53路径的分子遗传学改变的分析,我们发现MDM2基因扩增、TP5...
- 张俊霞王岩张蓓黄坚
- 文献传递
- 遗传性胆红素代谢障碍与胆汁淤积NGS方法的建立及应用被引量：1
- 2022年
- 为快速准确、低成本、高通量地检测我国人群常见的遗传性胆红素代谢障碍及胆汁淤积综合征,选择了10个易感基因的全部外显子及内含子剪切区的SNP/CNV,建立了基于二代测序技术(next generation sequencing,NGS)的靶向捕获测序方法。通过6例已知突变位点的样本对该方法的准确性进行验证,准确率为100%。收集首都医科大学附属北京友谊医院遗传性胆红素代谢障碍及胆汁淤积综合征患者39例进行检测,共检测到58种突变。检测结果与HGMD、ClinVar、OMIM突变数据库比较,未报道的突变通过千人基因组数据集对比并按照哈温平衡检验(HWE_P>0.05)和χ^(2)检验确定新突变19种。检测到的不同突变类型有效地揭示了该类疾病的遗传多样性。NGS方法的建立及应用为临床诊断提供了新的技术手段。
- 宋燚贾思雨武丽娜张伟欧晓娟黄坚
- 关键词：胆汁淤积
- NBS1基因SNPs与中国汉族人群原发性肝癌的遗传易感性被引量：3
- 2012年
- 为分析DNA损伤修复相关基因NBS1单核苷酸多态性(SNPs)与原发性肝癌遗传易感性的关系,并对高分辨率单链构象多态性(SSCP)检测技术在SNPs分型中的适用性进行评估,本研究对来自中国汉族人群的327例原发性肝癌以及295例阴性对照中NBS1基因常见SNPs的稀有等位基因频率进行检测和分析.此外,对NBS1基因6个常见SNPs分别选择部分样本同时进行直接序列测定,以比较2种方法的检测效果.119例原发性肝癌以及95例肝硬化/慢性肝炎组织标本的SSCP分析结果表明,6个常见NBS1基因SNPs位点(102G>A,320+208G/A,553G>C,1197T>C,2016A>G和2071-30A>T)中,SNP1197T>C的稀有等位基因频率为68.1%,显著高于肝硬化/慢性肝炎对照的57.9%(P=0.0298).对该SNP位点另外采用208份肝细胞癌和200份健康人群血液标本进一步分析,肝细胞癌SNP 1197T>C的稀有等位基因频率为66.8%,显著高于健康人群对照的58.8%(P=0.0170).其他5个SNPs的稀有等位基因频率在原发性肝癌与肝硬化/慢性肝炎之间均无显著性差异.高分辨率SSCP分析法与直接序列测定法对所选样本的SNPs基因分型结果完全一致,而且直接测序法对PCR扩增产物质量的要求相对高分辨率SSCP分析更高.研究表明,中国汉族人群NBS1基因SNP 1197T>C可能与原发性肝癌的发生相关,高分辨率SSCP技术准确度与直接测序法相当,且操作更加简便易行,非常适用于大量样本多个已知SNPs的基因分型.
- 黄坚赵艳平李倩张俊霞王岩张蓓
- 关键词：单核苷酸多态性原发性肝癌遗传易感性
- ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法
- 本发明公开了一种ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法。利用CRISPR‑Cas9基因敲除技术，敲除ATP7B基因第2外显子。ATP7B基因敲除后的小鼠均表现为明显的肝脏铜离子淤积等人WD患者临床表现。本发明构建的模拟人W...
- 黄坚范昌发李潇瑾刘甦苏周冬虎曹愿
- 45例原发性与继发性血色病临床病理特点对比研究被引量：7
- 2019年
- 目的 通过比较原发性血色病与继发性血色病的临床、肝脏病理特点及基因检测结果,阐述两者的关键鉴别点,提高临床医师对本病的认识。方法回顾分析2009年1月—2018年12月在首都医科大学附属北京友谊医院住院的铁过载患者,收集患者临床、生化、病理、腹部MRI及基因检测结果并进行分析。结果符合铁过载诊断标准血色病患者45例,原发性血色病19例(42.2%),继发性血色病26例(58.8%),总体平均年龄53.0(38.5~60.3)岁,男性占75%。与继发性血色病患者比较,原发性血色病患者ALT显著升高(P<0.05),白细胞、血小板显著减少(P均<0.05),血清铁、铁蛋白及转铁蛋白饱和度均显著性升高(P均<0.05)。且原发性血色病患者腹部MRI显示其更易发生铁沉积(P<0.05)。从肝脏病理角度分析,原发性血色病患者更容易出现胆管上皮内铁沉积(P<0.05),围绕毛细胆管周围也更容易出现铁沉积,但差异无统计学意义。本组患者以非经典型(非HFE)基因突变为主。结论本研究通过对比诊断明确的原发性血色病及继发性血色病病例,发现前者肝脏受损的程度、白细胞、血小板降低程度更为显著,且铁过载程度显著高于后者。本组血色病患者以非经典型(非HFE)基因突变为主,值得进一步系统研究。
- 赵新颜何志颖刘立伟黄坚黄坚孙丽莹欧晓娟
- 关键词：原发性血色病继发性血色病肝脏病理
