党涛
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
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- 吲哚胺2,3-双加氧酶基因转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型CD4~＋ T细胞的影响
- 2008年
- 目的以pEGFP-N1-IDO真核表达载体转染未成熟树突细胞,观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因对CD4+ T细胞的影响。方法体外扩增小鼠骨髓来源的未成熟树突细胞,采用光镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术鉴定后,采用DOTAP脂质体转染法进行转染,倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。同时建立卵蛋白致敏小鼠模型,分离并纯化脾脏CD4+ T细胞,用3H-TdR掺入法进行混合淋巴细胞反应实验,观察IDO转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型脾脏CD4+ T细胞增殖的影响,并用TUNEL法检测CD4+T细胞凋亡情况。结果IDO基因转染未成熟树突细胞能抑制卵蛋白致敏小鼠模型CD4+ T细胞增殖,pEG-FP-N1-IDO质粒转染组CD4+ T细胞减少,与pEGFP-N1空质粒转染组和对照组比较差异显著(P<0.05);IDO基因转染未成熟树突细胞可诱导CD4+ T细胞凋亡,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+ T细胞凋亡率为15.3%±2.6%,明显高于对照组和pEGFP-N1空质粒转染组和对照组(P<0.01)。结论IDO基因表达的上调可能是诱导哮喘免疫耐受的机制之一。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶
- 吲哚胺2,3-双加氧酶基因转染未成熟树突状细胞对卵蛋白致敏小鼠模型CD_4^+T细胞的影响被引量：1
- 2008年
- 目的以pEGFP-N1-IDO真核表达载体转染未成熟树突细胞,观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因对CD4+T细胞的影响。方法体外扩增小鼠骨髓来源的未成熟树突细胞,采用光镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术鉴定后,采用DOTAP脂质体转染法进行转染,倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。同时建立卵蛋白致敏小鼠模型,分离并纯化脾脏CD4+T细胞,用3H-TdR掺入法进行混合淋巴细胞反应试验,观察IDO转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型脾脏CD4+T细胞增殖的影响,并用TUNEL法检测CD4+T细胞凋亡情况。结果IDO基因转染未成熟树突细胞能抑制卵蛋白致敏小鼠模型CD4+T细胞增殖,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+T细胞减少,与和pEGFP-N1空质粒转染组和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);IDO基因转染未成熟树突细胞可诱导CD4+T细胞凋亡,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+T细胞凋亡率为(15.3±2.6)%,较对照组和pEGFP-N1空质粒转染组显著增加(P<0.01)。结论IDO基因表达的上调可能成为诱导哮喘免疫耐受的作用和机制之一。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶
- 小鼠IDO真核表达载体的构建及其在未成熟树突状细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建小鼠pEGFP-N1-IDO基因真核表达载体并观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法利用RT-PCR方法扩增小鼠IDO基因全长,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,用DOTAP脂质体转染法转染未成熟树突状细胞,通过G418筛选,转染的未成熟树突状细胞,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR、Western-blot检测IDO的表达。结果小鼠全长IDO基因序列正确插入pEGFP-N1载体,与GenBank中报道的序列一致,成功构建了pEGFP-N1-IDO真核表达载体,并转染未成熟树突状细胞,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和转染未成熟树突状细胞,并证明能有效表达于未成熟树突状细胞中。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体未成熟树突状细胞
