安晓静
- 作品数：10 被引量：5H指数：1
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 电穿孔法介导质粒DNA转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′菌株的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨电穿孔法介导质粒DNA转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′的最佳条件,提高其转化效率。方法将pCMV-Scrip质粒转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′菌株,观察不同的电转化条件对转化效率的影响。结果电场强度、脉冲时间、电击缓冲液的离子强度、细菌生长状态、感受态细胞保存时间、质粒DNA浓度对转化效率均有不同程度的影响;在电压2.0kV,电阻200Ω,电容25μF,脉冲时间4.3ms和低离子强度电击缓冲液的条件下转化,能获得较高的转化率。结论优化电穿孔条件能提高转化效率。
- 王宋平钱桂生李玉英谭红梅黄桂君安晓静
- 关键词：电穿孔法质粒DNA
- 1，25-二羟维生素D3处理的树突细胞在变应性气道炎症中的免疫调节作用
- 2009年
- 目的探讨1，25-二羟维生素D，[1，25（OH）2D3]处理的树突细胞（DC）在变应性气道炎症中的免疫调节作用及其机制。方法小鼠骨髓来源DC分2组，分别用1，25（OH）2D3和磷酸盐缓冲液（PBS）处理，RT—PCR和蛋白质印迹法检测2组DC Notch配体mRNA和蛋白表达。将2组DC和Notch配体中和抗体封闭的1，25（OH）2D3处理DC分别与小鼠脾脏来源CD4＋T细胞共培养，流式细胞仪检测CD4＋T细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞百分比。将卵清蛋白（OVA）致敏小鼠分2组，每组5只，分别过继转移1，25（OH）2D3组DC[1，25（OH）2D3-DC组]和PBS组DC（PBS—DC组），以OVA激发气道炎症后行肺脏病理、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素4（IL-4）、IL-5、IL-13和干扰素γ（IFN-γ）水平以及脾脏CD4＋T细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞百分比检查。结果1，25（OH）2D3组DCNotch配体Jagged1和Jagged2 mRNA表达（0．3764±0．029、0．5644±0．018）和蛋白表达（0．786±0．034、0．632±0．026）均明显高于PBS组（分别为0．146±0．032、0．267±0．012和0．124±0．025、0．098±0．012，均P〈0．01）。与CD4＋T细胞共培养后，1，25（OH）2D3组CD4＋T细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞百分比（22．49％±0．56％）明显高于PBS组（6．67％±0．60％，P〈0．01）；经Jagged2中和抗体封闭组CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞百分比（6．56％±1．89％）明显低于未封闭组（20．37％±1．64％，P〈0．01）。1，25（OH）2D3-DC组小鼠气道炎症明显轻于PBS-DC组；BALF中IL-4、IL-5、IL．13和IFN-γ水平（pg／ml）分别为33±5、134±23、91±11和未检测到（〈12．5），均明显低于PBS—DC组（分别为55±7、332±49、152±19、23±6，均P〈0．01）；脾脏CD4＋T细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞百分比（14．69％±1．14％）明显高于PBS—DC组（2．38％±0．14％，P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3处理DC对变应性气道炎症有抑制
- 夏俊波王长征马建新安晓静
- 关键词：骨化三醇树突细胞T淋巴细胞
- IDO基因修饰未成熟DC诱导哮喘免疫耐受的实验研究
- 支气管哮喘(哮喘)是一种由多种炎症细胞参与的慢性气道变应性炎症性疾病，其发病机制尚未完全阐明。“Th1/Th2偏移”假说被认为是哮喘发病的主要免疫学机制，该假说认为Th2细胞的过度活化导致了Th2反应为主的免疫反应，Th...
- 安晓静
- 关键词：免疫反应基因修饰
- 文献传递
- 小鼠IDO真核表达载体的构建及其在未成熟树突状细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建小鼠pEGFP-N1-IDO真核表达载体并观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法利用RT-PCR方法扩增小鼠IDO基因全长,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pEGFP-N1。经酶切和测序鉴定后,用DOTAP脂质体转染法转染未成熟树突状细胞。通过G418筛选,用倒置荧光显微镜观察转染的未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR、Westernblot检测IDO的表达。结果小鼠全长IDO基因序列正确插入pEGFP-N1载体,与GenBank中报道的序列一致,成功构建了pEGFP-N1-IDO真核表达载体,并转染未成熟树突状细胞,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和转染未成熟树突状细胞,并证明能有效表达于未成熟树突状细胞中。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：3-双加氧酶绿色荧光蛋白真核表达载体未成熟树突状细胞
- 脂质体介导的IDO基因转染未成熟树突状细胞对其成熟性及功能的影响
- 2010年
- 目的:探讨脂质体介导的IDO基因转染对未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,imDCs)的成熟性及功能的影响。方法:从BALB/c小鼠骨髓培养imDCs,形态学观察后用流式细胞术鉴定imDC后,将其分为IDO+-imDC组:重组pEGFP-N1-IDO质粒在脂质体介导下转染imDCs;IDO--imDC组:pEGFP-N1空质粒转染imDCs;imDCs组:imDCs不做特殊处理;mDC组:将培养的imDC用TNF-α诱导成熟。流式细胞术检测IDO基因转染imDC细胞后细胞表型是否发生变化。Western blot检测各组IDO蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测各组在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力。结果:BALB/c小鼠骨髓培养的细胞表面标志和细胞形态符合imDCs典型特征;Western blot结果显示IDO+-imDC组可见IDO蛋白表达;IDO+-imDC组细胞表面分子CD80、CD86、MHCⅡ表达率分别为(9.4±2.2)%、(8.7±1.1)%、(11.4±2.6)%,imDC组分别为(8.5±1.8)%、(7.5±1.6)%、(10.2±2.1)%,两组比较无显著差异(P均>0.05),IDO+-imDC组在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力明显低于imDC组(678±90.3vs1199±275.5,P<0.01)。结论:脂质体介导的IDO基因转染imDCs能维持细胞于未成熟状态,在MLR中,对T细胞增殖有明显的抑制作用。
- 廖伟安晓静钱桂生赵聪敏
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶树突细胞脂质体转染
- 人可溶性血管内皮生长因子受体-2基因的克隆与鉴定
- 2007年
- 目的获取人可溶性血管内皮生长因子受体-2(sKDR)基因,构建sKDR基因真核表达载体,为进一步研究sKDR抗肿瘤血管生成的基因治疗奠定基础。方法提取人胎盘组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得sKDR基因cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,测序证实后,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pMD18-T-sKDR重组载体,胶回收sKDR基因,再将其定向亚克隆到真核表达载体pCMV-Script中,提取质粒做双酶切和测序鉴定。结果构建的重组sKDR基因真核表达载体pCMV-Script-sKDR分别做双酶切和测序鉴定,证实其中含有sKDR基因,测序结果经BLAST分析,与预期设计的编码区cDNA序列一致。结论成功克隆了人sKDR基因的真核表达载体。
- 王宋平钱桂生李玉英黄桂君安晓静
- 关键词：基因克隆抗肿瘤血管生成基因治疗
- 吲哚胺2,3-双加氧酶基因转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型CD4~＋ T细胞的影响
- 2008年
- 目的以pEGFP-N1-IDO真核表达载体转染未成熟树突细胞,观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因对CD4+ T细胞的影响。方法体外扩增小鼠骨髓来源的未成熟树突细胞,采用光镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术鉴定后,采用DOTAP脂质体转染法进行转染,倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。同时建立卵蛋白致敏小鼠模型,分离并纯化脾脏CD4+ T细胞,用3H-TdR掺入法进行混合淋巴细胞反应实验,观察IDO转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型脾脏CD4+ T细胞增殖的影响,并用TUNEL法检测CD4+T细胞凋亡情况。结果IDO基因转染未成熟树突细胞能抑制卵蛋白致敏小鼠模型CD4+ T细胞增殖,pEG-FP-N1-IDO质粒转染组CD4+ T细胞减少,与pEGFP-N1空质粒转染组和对照组比较差异显著(P<0.05);IDO基因转染未成熟树突细胞可诱导CD4+ T细胞凋亡,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+ T细胞凋亡率为15.3%±2.6%,明显高于对照组和pEGFP-N1空质粒转染组和对照组(P<0.01)。结论IDO基因表达的上调可能是诱导哮喘免疫耐受的机制之一。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶
- 吲哚胺2,3-双加氧酶基因转染未成熟树突状细胞对卵蛋白致敏小鼠模型CD_4^+T细胞的影响被引量：1
- 2008年
- 目的以pEGFP-N1-IDO真核表达载体转染未成熟树突细胞,观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因对CD4+T细胞的影响。方法体外扩增小鼠骨髓来源的未成熟树突细胞,采用光镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术鉴定后,采用DOTAP脂质体转染法进行转染,倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。同时建立卵蛋白致敏小鼠模型,分离并纯化脾脏CD4+T细胞,用3H-TdR掺入法进行混合淋巴细胞反应试验,观察IDO转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型脾脏CD4+T细胞增殖的影响,并用TUNEL法检测CD4+T细胞凋亡情况。结果IDO基因转染未成熟树突细胞能抑制卵蛋白致敏小鼠模型CD4+T细胞增殖,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+T细胞减少,与和pEGFP-N1空质粒转染组和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);IDO基因转染未成熟树突细胞可诱导CD4+T细胞凋亡,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+T细胞凋亡率为(15.3±2.6)%,较对照组和pEGFP-N1空质粒转染组显著增加(P<0.01)。结论IDO基因表达的上调可能成为诱导哮喘免疫耐受的作用和机制之一。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶
- 小鼠IDO真核表达载体的构建及其在未成熟树突状细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建小鼠pEGFP-N1-IDO基因真核表达载体并观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法利用RT-PCR方法扩增小鼠IDO基因全长,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,用DOTAP脂质体转染法转染未成熟树突状细胞,通过G418筛选,转染的未成熟树突状细胞,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR、Western-blot检测IDO的表达。结果小鼠全长IDO基因序列正确插入pEGFP-N1载体,与GenBank中报道的序列一致,成功构建了pEGFP-N1-IDO真核表达载体,并转染未成熟树突状细胞,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和转染未成熟树突状细胞,并证明能有效表达于未成熟树突状细胞中。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体未成熟树突状细胞
- 人可溶性血管内皮生长因子受体-1基因的克隆与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的获取人可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)基因,构建sFlt-1基因真核表达载体,为进一步研究sFlt-1抗肿瘤血管生成的基因治疗奠定基础。方法提取人胎盘组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得sFlt-1基因cDNA,将其克隆到pUCm-T载体中,测序证实后,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pUCm-T-sFlt-1重组载体,胶回收sFlt-1基因,再将其定向亚克隆到真核表达载体pCMV-Script中,提取质粒作双酶切和测序鉴定。结果构建的重组sFlt-1基因真核表达载体pCMV-Script-sFlt-1分别作双酶切和测序鉴定,证实其中含有sFlt-1基因,测序结果经BLAST分析与预期设计的编码区cDNA序列完全一致。结论成功克隆了人sFlt-1基因的真核表达载体。
- 王宋平钱桂生李玉英黄桂君安晓静
- 关键词：可溶性血管内皮生长因子受体-1基因克隆抗肿瘤血管生成基因治疗
