刘孟良
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
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- 一起雅南猪猪肺疫病原菌的分离鉴定
- 2011年
- 四川某猪场发生严重的猪呼吸道疾病,根据其临床症状无法确诊是否为猪肺疫,因此采集病猪肺脏进行实验室检测。经病料涂片镜检、细菌分离培养、生化鉴定、动物试验鉴定,结果显示,从病猪肺脏中分离得到1株致病性多杀性巴氏杆菌。药敏试验结果显示,该分离菌株对丁胺卡那霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、头孢唑啉、磺胺异唑、红霉素、复方新诺明等药物有不同程度的敏感性,对指导临床用药具有积极的意义。
- 刘孟良代洪波唐兴明安志伟唐兴云朱玲
- 关键词：猪肺疫多杀性巴氏杆菌
- 猪嵴病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 为建立一步法检测猪嵴病毒的实时荧光定量PCR检测方法,通过对猪嵴病毒3D区的PCR扩增后,连入pMD19-T载体,制备阳性标准品,进行实时荧光定量PCR。结果显示,该方法能检测出的最低拷贝数为100拷贝,扩增效率为91.8%,相关系数r2=0.992。通过对扩增曲线、熔解曲线等试验数据的分析,得出该检测方法具有良好的稳定性和较高的精确度。本研究建立的实时荧光定量PCR为一种可靠的猪嵴病毒检测方法。
- 刘孟良王潇娣徐薇薇周远成陈雷朱玲徐志文
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 猪巨细胞病毒四川株gB基因的克隆表达及抗原性分析
- 2012年
- 为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,分别用琼脂扩散试验和Western-blot对多克隆抗体和复性的gB蛋白进行检测。结果显示,扩增的PCMV gB基因全长2 580bp,编码860个氨基酸。与国内外参考株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为97.8%～99.5%和96.6%～99.0%;与其他9株β疱疹病毒核苷酸和氨基酸序列相似性分别为33.3%～41.4%和13.3%～49.4%;系统进化分析显示,PCMV与人疱疹病毒6型和7型属于一个分支。gB肽链N端1～23位氨基酸为信号肽,729～751位氨基酸间含有跨膜区。构建的表达载体pET30a-gB-B在Rosetta(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导后以包涵体形式表达出大小约80ku的蛋白。所制备的血清琼扩抗体效价为1∶16,Western-blot显示重组gB蛋白可与PCMV阳性猪血清反应。结果表明,PCMV gB基因较为保守,与国内外不同地区的PCMV毒株具有较高的相似性,所表达的重组蛋白具有很好的抗原性。
- 朱玲史小红王潇娣梅淼周远成刘孟良吴云飞徐志文郭万柱
- 关键词：GB基因原核表达抗原性
- 猪繁殖与呼吸综合征的实验室鉴别诊断
- 2012年
- 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种疾病,主要表现为厌食、发热,母猪怀孕后期流产、产死胎和木乃伊胎;幼龄仔猪发生呼吸系统疾病,大量死亡。其危害大,给养猪业造成巨大的损失[1]。
- 刘孟良朱玲
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒实验室呼吸系统疾病怀孕后期木乃伊
- 猪溶血性链球菌的分离鉴定及溶血素基因的PCR检测被引量：1
- 2012年
- 为了建立简便、快捷、准确的猪溶血性链球菌实验室诊断方法,试验采用无菌操作技术将疑似猪链球菌病的猪组织接种于血平板上培养,对染色、镜检为链球菌的菌落进行分离纯化,然后进行生化鉴定、动物致病性试验、药敏试验。根据GenBank发布的猪链球菌溶血素基因(sly)全序列,设计1对特异性引物,然后抽提分离菌DNA扩增出大小为568 bp的目的片段。结果表明:使用此鉴定方法可简便、快捷、准确地检测出猪溶血性链球菌溶血素基因。
- 徐珊珊黄仆刘涛代洪波吴云飞刘孟良朱玲
- 关键词：溶血性链球菌溶血素基因PCR检测
- 猪肺疫多杀性巴氏杆菌的分离鉴定被引量：10
- 2012年
- 为了研究四川乐山某猪场爆发的保育猪严重呼吸道疾病的主要病原,试验采用病理剖检、病毒检测、细菌分离鉴定、生化鉴定、动物回归试验以及多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测对病原进行鉴定。结果表明:发病猪有严重肺炎症状,支气管内部有少量泡沫,腹股沟淋巴结出血、水肿,其他实质器官未见明显病理变化;病毒检测结果显示为蓝耳病病毒阳性,猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒2型阴性;从病猪肺脏中分离获得大肠杆菌和1株蓝耳病病毒继发的高致病性多杀性巴氏杆菌;该分离菌株对多种药物均高度敏感。
- 黄仆代洪波刘孟良唐蕊涵朱玲
- 关键词：猪肺疫多杀性巴氏杆菌
- 一株猪源化脓隐秘杆菌的分离与鉴定被引量：3
- 2011年
- 四川内江某猪场发生疾病,病猪的肝、肺出现化脓性结节,脾出血性肿大,无菌采集病猪的病变组织进行细菌分离,得到1株革兰氏阳性菌,形态多样,呈球状、杆状或棒状,单在或成丛排列,该菌在TSA平板上生长缓慢。经细菌分离培养、16S rDNA鉴定、动物致病性试验等,结果显示该株分离菌为致病性化脓隐秘杆菌。药敏试验显示,该分离菌对头孢呋肟、氨苄西林、卡那霉素、四环素、氟苯尼考等药物有不同程度的敏感性,对于指导临床用药具有积极的意义。
- 陈蕾朱玲徐凯刘孟良代洪波
- 关键词：化脓隐秘杆菌药敏试验RDNA
- 猪上呼吸道3种主要细菌病原及其疫苗研究被引量：1
- 2011年
- 猪的呼吸道疾病是当今大型养殖场主要疾病之一，尤其以细菌性感染为主，危害着我国乃至世界养猪业的发展。在规模化养猪场，转群应激、免疫注射应激、冷热应激以及饲养管理粗放等因素将导致突发性呼吸道疾病暴发。猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道的3种主要病原菌，分别引起猪链球菌病、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病。
- 代洪波李淞刘孟良林艳高平赵玲朱玲
- 关键词：细菌性感染上呼吸道副猪嗜血杆菌病猪胸膜肺炎放线杆菌
- 副猪嗜血杆菌四川株的分离鉴定与耐药性分析
- 2011年
- 副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）引起的猪的多发性浆膜炎和关节炎，主要临床症状为呼吸困难、咳嗽、发烧、被毛粗乱，发病后期可见关节肿大、跛行等症状；部分血清型可导致脑膜炎，引起共济失调。病理剖检可见胸膜炎、渗出性心包炎、纤维素性肺炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎，同时伴有胸腔积液、腹腔积液、关节积液等。该病于1910年由Glasser首次发现，因此又被称为猪革拉瑟病（G1asser’s disease）。
- 代洪波刘孟良李淞林艳高平赵玲朱玲
- 关键词：副猪嗜血杆菌病耐药性分析多发性浆膜炎胸腔积液关节炎
- 大熊猫源肺炎双球菌的分离鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了分析、丰富表现呼吸道症状的患病大熊猫的病原病因学,选用有效药物预防控制该类疾病,试验对从中国大熊猫保护中心采集的患病大熊猫鼻腔拭子进行了细菌培养、菌落形态学观察、生化试验、溶血试验和动物致病性试验。结果表明:分离到致病性肺炎双球菌;分离菌对万古霉素、青霉素、氨苄西林、红霉素、羧苄青霉素和阿莫西林等高度敏感,对丙氟哌酸、卡那霉素、四环素等中度敏感,对链霉素、强力霉素等药物有耐药性。
- 王春花李德生王承东刘孟良汤纯香吴虹林朱玲
- 关键词：大熊猫肺炎双球菌药敏试验
