杨鹏程
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 促血管生成素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建携带小鼠促血管生成素-1(Ang-1)基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法化学合成小鼠Ang-1基因经PCR扩增后亚克隆至穿梭质粒,重组质粒转化感受态细胞,所得转化子经PCR电泳分析并测序鉴定,携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK 293细胞,反复冻融获取重组腺病毒,终点稀释法测定重组腺病毒滴度,所得腺病毒转染293T细胞48 h收集培养上清,通过Western Blot分析Ang-1蛋白的表达。结果 PCR产物电泳分析可见大小约1.5 kbp的特征性条带,测序结果显示基因序列与Gen Bank提供的Ang-1序列一致,经HEK293细胞包装后腺病毒滴度为1×109pfu/ml,转染293T细胞后培养上清Western Blot分析可见大小58 k D特征性条带,即转染后能分泌正确大小的重组Ang-1蛋白。结论 Ang-1基因重组腺病毒载体可成功构建,为进一步研究Ang-1蛋白对造血干细胞动员及血管新生的作用提供实验依据。
- 李天寿李桥川苏丽华聂胤超杨鹏程
- 关键词：促血管生成素-1腺病毒基因重组小鼠
- 促血管生成素-2过表达重组腺病毒载体的构建
- 2017年
- 目的构建小鼠促血管生成素-2(Ang-2)基因过表达重组腺病毒载体。方法化学合成小鼠Ang-2编码序列,经PCR扩增、鉴定后连接至穿梭质粒。将含目的基因的重组质粒转化DH5α感受态细胞,所得阳性转化子经电泳分析并测序鉴定。将携带目的基因的穿梭质粒与辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK293细胞,反复冻融获取重组腺病毒,终点稀释法测定病毒滴度,重组腺病毒转染HEK293细胞并提取蛋白,采用免疫印迹法分析Ang-2蛋白的表达。结果PCR产物电泳分析可见大小约1.5 kp的特征性条带,基因序列显示测序结果与GenBank提供的Ang-2序列一致,经HEK293细胞包装后腺病毒滴度为1×10^(8.8)pfu/ml,免疫印迹法分析可见大小57 kD特征性条带,即重组腺病毒可成功表达Ang-2蛋白。结论 Ang-2基因重组腺病毒载体可成功构建。
- 杨鹏程韦莉莉李桥川
- 关键词：促血管生成素-2基因重组腺病毒
- 过表达三突变型低氧诱导因子1α重组人脐静脉内皮细胞株的构建及鉴定
- 2018年
- 目的构建并鉴定过表达三突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)重组人脐静脉内皮细胞株EA.hy926。方法根据原有质粒pc DNA3.1+-HIF1-Ala402-Ala564-Ala803的HIF-1α三突变基因序列设计引物,经PCR扩增后连接至入门载体,将含有目的基因的入门载体与p T590质粒及p ENTR_L4_PCMV_R1质粒拼接为三突变型HIF-1α重组慢病毒载体,将该载体转化至DH5α感受态细胞,挑选阳性的克隆测序鉴定。将三突变型HIF-1α重组慢病毒载体与辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK293T细胞,收集病毒液。将EA.hy926细胞分为感染重组HIF-1α过表达慢病毒的Lenti-HIF-1α组、感染阴性对照慢病毒的Lenti-negative组、只加培养基的MOCK组,给予相应干预后采用嘌呤霉素(1μg/ml)筛选高表达HIF-1α细胞株,观察病毒感染效率,采用蛋白免疫印迹法分析HIF-1α蛋白表达情况。结果测序鉴定结果提示成功合成三突变型HIF-1α重组质粒。荧光显微镜下观察到HEK293T细胞中有大量增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达。重组慢病毒感染EA.hy926细胞后,荧光显微镜下可见大量EGFP表达,Lenti-HIF-1α组细胞稳定表达HIF-1α蛋白,且其表达水平高于Lenti-negative组及MOCK组。结论重组三突变型HIF-1α慢病毒过表达载体可成功构建,并可获得稳定表达HIF-1α的人脐静脉内皮细胞株。
- 李慧杨鹏程韦莉莉李桥川
- 关键词：低氧诱导因子1Α过表达慢病毒载体人脐静脉内皮细胞
