- 肠上皮细胞损伤模型中细胞自噬对Caco-2细胞紧密连接蛋白表达的影响
- 2017年
- 目的探讨脂多糖(LPS)诱导肠上皮细胞损伤模型中,肠上皮细胞自噬对肠上皮Caco-2细胞紧密连接(TJ)蛋白表达的影响。方法在人肠癌细胞系Caco-2细胞中建立LPS诱导肠上皮细胞损伤模型,细胞分为空白对照组(A组)、单独的LPS处理组(B组)、LPS+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(C组)。以电阻仪分别检测3组Caco-2细胞跨上皮电阻(TER)值;通过检测荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(FITC-dextran)透过率,分别观察3组细胞的细胞间通透性;以Western blot方法检测3组细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、肠上皮细胞TJ蛋白Zonula occluden-1(ZO-1)、claudins-2(CL-2)、occludin(OC)的表达水平;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测肠上皮细胞CL-2、ZO-1和OC mRNA表达。结果 C组在各时点TER值较A、B组明显降低(F=83.82~271.83,P<0.05);C组细胞间FITC-D4的透过率高于A、B组(F=724.92,P<0.05);C组的LC3Ⅱ蛋白表达低于A、B组(F=134.72,P<0.05);C组与B组相比CL-2蛋白表达增加,ZO-1和OC蛋白表达降低,差异均有统计学意义(F=90.03~329.08,P<0.05);RT-PCR检测结果显示,C组CL-2 mRNA较B组表达增加,而ZO-1和OC mRNA表达降低,差异均有统计学意义(F=339.81~580.32,P<0.05)。结论在LPS诱导肠上皮细胞损伤模型中,肠上皮细胞自噬可能降低肠上皮细胞CL-2表达,提高ZO-1和OC表达,以此维持肠上皮细胞TJ作用,从而保护肠上皮屏障。
- 温伟伟郑红梅姜英健李洪波张佃良
- 关键词：肠黏膜CACO-2细胞
- 肠黏膜屏障损伤与结肠癌患者恶病质的关系被引量：8
- 2018年
- 目的探讨细菌易位（bacterial translocation，BT）与结肠癌患者恶病质的关系。方法选取2015年9月至2017年5月间青岛市市立医院和南京大学医学院附属金陵医院收治的292例接受右半结肠切除术结肠癌患者的临床资料，分为恶病质组和非恶病质组。采用细菌培养方法检测外周血和肠系膜淋巴结细菌，利用PCR技术检测外周血中细菌DNA，用流式细胞计数法检测肠黏膜T细胞亚群数和NK细胞数，用Western blot和免疫荧光法检测紧密连接蛋白Occludin、Claudins-2、Zonula occluden-2在肠上皮细胞中的表达，用荧光原位杂交检测易位细菌；用免疫组织化学方法检测小肠壁内毒素。结果恶病质组BT率高于非恶病质组（27．8％比7．2％，χ^2=20．871，P〈0．001）。BT（＋）患者肠黏膜中BT与肠上皮细胞中T细胞亚群和NK细胞水平降低有关（CD3^＋T、CD4^＋T、CD8^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T、NK细胞水平分别为：36．69％±5．87％比41．63％±5．03％、44．08％±5．12％比49．58％±7．01％、65．68％±5．51％比61．43％±5．58％、0．71％±0．21％比0．91％±0．23％、27．86％±3．93％比34．69％±4．52％，均P〈0．01）。恶病质组BT（＋）患者小肠壁内可以检测到内毒素。在BT（＋）患者中Claudin-2蛋白升高（0．63±0．13比0．21±0．06，t=-2．936，P〈0．01），而Occludin和Zonula occluden-2蛋白降低（0．37±0．13比0．84±0．17，t=2．151，P〈0．05；0．16±0．07比0．58±0．19，t=2．111，P〈0．05）。结论BT可能促进结肠癌患者恶病质的发生，BT可能经肠上皮紧密连接发生。
- 黄路桥姜英健李畅张佃良
- 关键词：结肠肿瘤恶病质细菌易位
- 铁死亡在重症急性胰腺炎引起的急性肾损伤中的作用及其机制被引量：7
- 2021年
- 目的探讨铁死亡在重症急性胰腺炎(SAP)诱发急性肾损伤(AKI)的作用及其机制。方法胰腺炎建模后24 h,将36只SD大鼠(购自青岛大学医学部实验室动物中心)采用完全随机分组法分为3组(n=12):假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预组(SAP+Fer组)。建立SAP模型24 h后,检测血清淀粉酶(AMY)、肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平;检测肾组织中铁含量、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)变化及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺和肾脏组织学改变;透射电镜(TEM)观察铁死亡的形态学特征;蛋白质印迹法(Western blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色等方法分析长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)等铁死亡相关蛋白和基因的表达。组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果SAP组大鼠血清AMY[(6276.5±562.2)比(1086.6±192.3)U/L]、Cr[(98.0±16.2)比(19.5±5.2)μmol/L]、BUN[(17.1±2.8)比(7.2±1.7)mmol/L]水平明显高于SO组(t=30.314、15.927、10.375,P值均<0.01),差异均有统计学意义;肾组织铁[(0.65±0.13)比(0.44±0.12)mg/g]、MDA[(7.25±0.81)比(1.84±0.24)μmol/g]、ROS[(68.54±7.04)比(15.67±5.21)×104/mg]高于SO组(t=3.855、22.167、11.496,P值均<0.01),GSH[(358.38±41.59)比(518.64±55.72)nmol/g]和GPX4[(7.75±1.09)比(14.72±2.56)U/mg]明显低于SO组(t=7.984、8.674,P值均<0.01),差异有统计学意义;胰腺和肾组织病理损伤程度增加;线粒体出现明显萎缩;肾脏ACSL4蛋白(0.84±0.03比0.34±0.02)表达高于SO组(t=7.876,P<0.01),GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达低于SO组(t=5.651、8.134,P值均<0.01),差异有统计学意义;ACSL4、铁响应元件结合蛋白2(IREB2)mRNA(0.87±0.06比0.24±0.03、1.23±0.05比0.32±0.02)表达高于SO组(t=12.864、15.163,P均<0.01),差异有统计学意义。SAP+Fer
- 马德亮李洪波苏晓晓姜英健张佃良
- 关键词：急性肾损伤重症急性胰腺炎
- Sprouty-2对胃癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响
- 2017年
- 目的:研究Sprouty2(SPRY2)基因在胃癌肿瘤细胞上皮间质转化(EMT)和侵袭转移的影响。方法:体外培养人胃癌细胞(BGC-823),采用慢病毒介导的sh RNA沉默SPRY2基因,并用实时定量PCR与Western blot检测其SPRY2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达,采用细胞划痕实验、Transwell实验检测SPRY2基因沉默后的胃癌细胞侵袭转移能力变化。结果:在慢病毒介导sh RNA沉默SPRY2基因的人胃癌BGC-823细胞中,SPRY2的m RNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),SPRY2沉默后人胃癌细胞E-cadherin的蛋白表达增多(P<0.05),vimentin的蛋白表达减少(P<0.05)。此外,SPRY2沉默后,胃癌细胞迁移能力和侵袭能力明显减弱(P值均P<0.05)。结论:Sprouty-2基因通过调节E-cadherin与vimentin的表达参与胃癌细胞的上皮-间质转化,进而促进胃癌细胞的迁移与侵袭。
- 温伟伟李洪波姜英健秦凯强梁忆波马雷郑红梅张佃良
- 关键词：胃癌上皮-间质转化
- 铁死亡调控机制及其与其他细胞死亡关系的研究进展被引量：9
- 2020年
- 铁死亡是近年来新发现的一种调节性细胞死亡方式,其主要特征是铁离子依赖和脂质过氧化,铁诱导的脂质活性氧(ROS)积聚导致细胞发生过氧化反应。它在形态和生化上与已知的其他调节性细胞死亡类型不同。大量的研究已经证明了铁死亡在人类疾病中的重要性,因此对其调控机制及其与其他调节性细胞死亡关系的探究具有重要意义。本文就这两个方面进行综述,以期为铁死亡相关疾病治疗提供新的研究方向。
- 马德亮姜英健李洪波张佃良
- 关键词：细胞死亡铁脂质过氧化作用
