王占锋
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：湖南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒2型湖南分离株全基因扩增及感染性克隆构建
- 猪圆环病毒(Porcine circo virus,PCV)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circo virus)的成员,是目前发现的最小的哺乳动物病毒。PCV2主要有两种基因型(亚型)：PCV2a...
- 王占锋
- 关键词：猪圆环病毒感染性克隆
- 文献传递
- 杆状病毒介导猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在PK15细胞中的表达与鉴定被引量：2
- 2016年
- 以pFastBac I为载体骨架,通过PCR从pcDNA3.3-TOPO载体引入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV3.3)强启动子及不同功能调控元件,构建成含有双启动子,能在PK15细胞(porcine kidney cell)中表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的昆虫杆状病毒转移(穿梭)载体pFastBac I-CMV3.3-eGFP。收获重组杆状病毒,侵染PK15细胞。倒置荧光显微镜下验证该重组转移载体构建成功,根据荧光水平筛选出重组杆状病毒侵染PK15细胞的最佳MOI(multiplicity of infection)和最佳表达强度时间。另将PRRSV(porcine reproductive and respiratory syndrome virus)GP5蛋白基因克隆到pFastBac I-CMV3.3载体。获得的重组杆状病毒以MOI=100侵染PK15细胞48h后收获细胞产物。Western blot鉴定目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了重组杆状病毒介导PRRSV GP5蛋白在PK15细胞表达系统。因此,建立的重组杆状病毒在PK15细胞中高效表达GP5蛋白的方法,将为研究PRRSV吸附机制,GP5蛋白与宿主细胞互作蛋白的筛选和针对PRRSV基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。
- 呼高伟余婉婷朱哲王占锋邹亚文王乃东王爱兵邓治邦杨毅
- 关键词：PK15细胞WESTERNBLOT
- 猪圆环病毒2型湖南分离株HNLYYA1全基因组的多引物滚环扩增和序列分析被引量：3
- 2016年
- 首先采用常规PCR法对7份湖南省某地区猪病料进行猪圆环病毒2型(PCV2)的检测,然后对1份PCV2阳性病料的总DNA进行多引物滚环扩增(MPRCA)反应,最后利用限制性内切酶(Eco RⅠ和NcoⅠ)酶切MPRCA产物。结果显示,酶切后的MPRCA产物条带与PCV2基因组或片段的大小一致。将回收的目的条带与Psp72载体连接,转化DH5α菌,最后对提取的重组质粒进行测序和序列比对。获得的PCV2分离株HNLYYA1提交于Gen Bank(登录号KJ867555),其全基因组大小为1 767 bp,基因型为PCV2b-1C。该株PCV2 Cap蛋白与其他毒株进行比对,发现其具有独特的氨基酸突变,NLS区34位组氨酸(H)突变为酪氨酸(Y)、LOOP GH区169位精氨酸(R)突变为甘氨酸(G)、LOOP HI区206位赖氨酸(K)突变为异亮氨酸(I)。本研究揭示了湖南PCV2分离株HNLYYA1的全基因组特征,并为环状病毒的全基因组分离研究提供新的技术途径。
- 王占锋朱哲湛洋邓治邦王爱兵杨毅王乃东
- 关键词：猪圆环病毒2型
