蒋菲
- 作品数：15 被引量：49H指数：4
- 供职机构：中国动物疫病预防控制中心更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- H5亚型禽流感病毒样颗粒的制备及其免疫原性的初步研究被引量：2
- 2019年
- 本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体p FastBac1,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒。将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制试验、透射电镜、Western-blot等方法鉴定。利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化VLPs,选择不同剂量VLPs免疫6周龄SPF鸡,评价其免疫原性。结果显示,成功构建重组杆粒,转染的sf9细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;在细胞盲传3代后,含有VLPs的细胞上清液的血凝效价可达1∶27;Western-blot证实3个目的蛋白均成功表达;透射电镜观察结果表明,VLPs与天然禽流感病毒颗粒具有相似的形态特征;动物试验结果表明,二免后2周,血清抗体效价最高可达到1∶210,抗体亚型主要为Ig G1。本研究首次成功构建了2.3.4.4分支H5亚型禽流感VLPs,为开发新型、安全、高效的H5亚型禽流感疫苗奠定了基础。
- 高晓艺蒋菲王传彬王乃迪李建峰杨林石玉祥刘玉良
- 关键词：H5亚型禽流感病毒样颗粒杆状病毒表达系统
- 坚守初心不忘本 为民服务解难题——河北省丰宁县苏家店村肉牛产业发展专题调研
- 2019年
- 按照"不忘初心,牢记使命"主题教育活动的要求,2019年7月24日至26日,中国动物疫病预防控中心一行7人(其中2人是专家),对河北省丰宁县苏家店村的肉牛产业发展开展了专题调研.期间,我们坚持按照为民服务解难题的总要求,坚持问题导向,深入基层了解民情、掌握实情.召开了两次座谈会,为苏家店村部分养牛户,重点是贫困养牛户举办了专题讲座,入户调研6户,调研与该村肉牛养殖相关联的肉牛养殖企业1家.调研情况如下.
- 沙玉圣刘兴国蒋菲于自强张之谦陈西钊
- 关键词：肉牛产业动物疫病
- 小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究被引量：1
- 2019年
- 为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。
- 孙雨宋晓晖肖颖李秀梅王睿男吕园园蒋菲辛盛鹏杨林王传彬
- 关键词：小反刍兽疫核衣壳蛋白
- 重组牛IFN-γ蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化和鉴定被引量：5
- 2021年
- 为合成与天然构象相似的干扰素γ蛋白,通过优化干扰素序列的密码子序列,利用杆状病毒表达系统合成真核重组牛IFN-γ蛋白。实验化学合成牛IFN-γ基因,并将该基因克隆至真核表达载体pFastBacHTA中,将构建成功的重组载体与DH10Bac感受态大肠杆菌进行转座形成穿梭载体,穿梭载体质粒瞬时转染至SF9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒,最后利用SF9昆虫细胞悬浮培养大量表达目的蛋白。蛋白纯化后经Western Blotting和BOVIGAM牛分枝杆菌IFN-γELISA检测试剂盒检测分析,具有较好的免疫原性和反应原性。研究结果为牛IFN-γ的单克隆抗体制备以及牛结核病临床诊断奠定了基础。
- 王睿男蒋菲刘亚涛宋晓晖刘永生王文储岳峰曹小安王传彬孙雨
- 关键词：杆状病毒真核表达蛋白纯化
- 禽白血病病毒抗原高敏荧光微球快速定量检测方法的建立被引量：3
- 2021年
- 为建立快速定量检测家禽样本中禽白血病病毒抗原的方法,对禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体细胞株2E5和3D5进行复苏、鉴定,通过反应条件优化,建立了禽白血病病毒抗原高敏荧光微球快速检测方法。该方法能够快速定量检测家禽样本中禽白血病病毒,敏感性高、特异性强,对其他家禽病原无交叉反应且具有良好的检测重复性。对采自全国的240份临床家禽样品进行检测,同时用美国IDEXX公司生产的ELISA抗原试剂盒开展比较,结果发现两种方法符合率达93.98%,其中阳性样品符合率为90.83%,阴性样品符合率为95.83%;组内与组间变异系数分别低于10%和15%。本研究建立的禽白血病病毒p27抗原高敏荧光微球快速检测方法,特异性高、敏感性强,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。
- 孙雨刘亚涛王睿男蒋菲马英李秀梅王文原小燕顾小雪王传彬
- 关键词：禽白血病快速定量检测
- 种鸡场鸡白痢净化效果及可行性分析被引量：14
- 2017年
- 为了解我国种鸡场鸡白痢净化的效果及其可行性,2016年9月通过问卷调查和现场走访的方式,选择净化程度较高的8个种鸡场开展了鸡白痢净化动态、投入和产出调查,并进行分析和总结,以期从专业技术层面和产业经济学角度为推动我国种鸡场净化工作提供可靠的参考数据资料。
- 刘洋顾小雪杨卫铮张倩蒋菲訾占超毕一鸣王传彬杨林辛盛鹏
- 关键词：种鸡场鸡白痢
- 口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 为建立快速定量检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,本研究通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。该方法能够检测羊血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的羊类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率为98%,阴性样品符合率为92%,总符合率为95%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法同传统的ELISA方法相比,特异性相当、敏感性更高,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。
- 孙雨宋晓晖肖颖毕一鸣王睿男蒋菲张存瑞王旭杨林王传彬
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白时间分辨荧光免疫分析
- 基于不同重组小反刍兽疫病毒N蛋白建立的双抗原S-ELISA抗体检测方法的比较研究被引量：3
- 2019年
- 为探索建立小反刍兽疫病毒抗体双抗原夹心ELISA方法的原料,本研究成功使用pET-30a与p ET-32a两个不同原核载体分别表达与纯化了小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白N抗原。使用不同原核载体表达的N抗原组合建立的双抗原夹心ELISA抗体检测方法、相同原核载体表达的N抗原组合建立的双抗原夹心ELISA抗体检测方法、N抗原包被建立的抗体间接ELISA检测方法以及血清中和试验方法分别对已知背景的小反刍兽疫抗体阳性血清与小反刍兽疫抗体阴性血清进行检测。综合考虑方法的敏感性、特异性和稳定性,最终选择用不同原核载体表达的pET-30a-(N)与pET-32a-(N)抗原组合建立的小反刍兽疫病毒抗体双抗原夹心ELISA检测方法。
- 孙雨宋晓晖肖颖李秀梅吕园园王睿男蒋菲孙航杨林王传彬
- 关键词：原核表达载体小反刍兽疫
- 羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3A-3B1-3B2抗体ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2019年
- 为建立检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的间接ELISA方法,通过优化抗原表达条件,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒。该方法对其他相关的羊类病毒病原无交叉反应,其重复性组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,与国内市售的口蹄疫非结构蛋白抗体检测试剂盒进行比较,阳性样品符合率为96.67%,阴性样品符合率为94%,总符合率为95.33%。本研究建立的羊血清中口蹄疫病毒3A-3B1-3B2蛋白抗体间接ELISA检测方法,特异性高、敏感性强,操作简单快速,具有较高的应用推广价值。
- 孙雨宋晓晖肖颖王旭董浩王睿男毕一鸣蒋菲李晓霞杨林王传彬
- 关键词：口蹄疫病毒可溶性表达ELISA
- 牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。
- 王旭孙雨王睿男肖颖蒋菲毕一鸣李硕杨林董虹宋晓晖王传彬
- 关键词：牛血清口蹄疫病毒非结构蛋白时间分辨荧光免疫分析
