郭文庆
- 作品数:2 被引量:7H指数:2
- 供职机构:内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生农业科学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的表达可促进NIH3T3细胞增殖被引量:5
- 2016年
- 目的研究外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(ex JSRV Env)对NIH3T3小鼠成纤维细胞增殖的影响。方法构建含完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(ex ISRV-env)的重组质粒pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env,并鉴定其正确性。采用脂质体转染技术pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞,利用反转录PCR和Western blot法检测Env的表达,利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测Env表达对NIH3T3细胞增殖的影响。结果成功构建了含ex JSRV-env的重组真核表达质粒pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env;以重组质粒瞬时转染NIH3 T3细胞,检测到JSRV Env蛋白的表达,CCK-8法和平板克隆形成实验结果表明转染pc DNA4/myc-His/ex JSRV-env的细胞增殖速度显著高于对照组(空白及阴性)细胞。结论 NIH3T3细胞表达的JSRV Env蛋白可促进NIH3 T3细胞的增殖。
- 杜方原陈大勇张宇飞孙晓林郭文庆刘淑英
- 关键词:绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白细胞增殖
- 绵羊肺腺瘤病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与验证被引量:2
- 2017年
- 根据Gen Bank上发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的基因序列,分别设计合成巢式RT-PCR引物及扩增exJSRV-env全基因的引物,建立exJSRV的检测方法。将病肺的巢式外套与内套RT-PCR扩增产物与载体连接,对重组质粒送检测序进行序列分析。结果显示,巢式外套与内套RT-PCR扩增产物的序列与JQ837489.1序列的同源性分别为99.7%和99.4%。通过对3份鼻液以及75份血样的临床检测,将检测阳性的1份鼻液和2份血样送检测序,序列比对结果显示,鼻液、血样的巢式外套和内套RT-PCR扩增产物与JQ837489.1的同源性分别为99.8%、99.7%、99.7%和98.9%、100%、99.4%,且扩增基因序列的氨基酸序列中具有exJSRV特有的致病性YXXM序列。敏感性试验表明,巢式RT-PCR诊断方法的敏感性是普通RT-PCR的10倍,最低能够检测出9.72 fg的标准模板RNA。说明本试验所建立的方法,具有良好的临床应用价值,灵敏性高、特异性好,对exJSRV的临床早期检测提供了一种方便、可靠、经济实用的诊断方法。
- 郭文庆孙晓琳冷冉刘淑英
- 关键词:绵羊肺腺瘤病巢式PCR内源性绵羊肺腺瘤病毒