张子剑 作品数:8 被引量:67 H指数:3 供职机构: 北京中医药大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
基于亲和层析方法研究栀子苷的药物靶标 被引量:3 2016年 目的:运用亲和层析方法初步探索栀子苷的特异结合蛋白。方法:采用环氧氯丙烷(Epichlorohydrin,ECH)作为活化试剂对琼脂糖凝胶进行环氧基修饰,通过偶联栀子苷与环氧活化的琼脂糖凝胶(epoxy activated Sepharose CL-6B,EAS6B),制备以栀子苷为配基的亲和介质,以高效液相色谱法验证其偶联。利用栀子苷-EAS6B亲和介质,从小鼠脑组织总蛋白中筛选特异结合蛋白。结果:优化偶联条件后,得到最佳的活化反应条件:15%ECH、0.8 mol/L Na OH于37℃反应3 h,环氧基密度达到122μmol/m L,琼脂糖凝胶亲和介质的偶联量为19.53%,偶联率为17.08μmol/m L。从小鼠脑组织总蛋白中筛选得到3个栀子苷特异结合蛋白的条带,经质谱鉴定,发现主要是由热休克蛋白、脑酸溶性蛋白和谷氨酰胺合成酶等组成。结论:确立了琼脂糖凝胶环氧活化的最佳条件,制备了栀子苷-EAS6B亲和介质并应用其筛选出栀子苷的结合蛋白。 张琦 张子剑 谭琰 王旭 赵洁 张傲哲 李亚楠 万亮琴 华茜关键词:栀子苷 高效液相色谱 栀子及栀子苷抗炎作用机制的最新研究进展 被引量:42 2017年 通过细胞炎症分子、信号通路、免疫系统应答角度总结了近年来栀子及栀子苷抗炎作用的分子机制,旨在为栀子及栀子苷的深入研究及其在医药方面的开发应用提供参考。 万亮琴 张子剑 谭琰 王旭 张傲哲 赵洁 李亚楠 王雪 徐自慧 华茜关键词:栀子 栀子苷 抗炎 活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜中Hippo信号通路的影响 被引量:6 2017年 目的观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜中Hippo信号通路的影响。方法选用健康SD大鼠24只,禁食12 h,一次性腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg),诱导糖尿病模型。将造模20周后的大鼠随机分为模型组和活血解毒方组。另选取10只大鼠作为正常对照组,给予等体积蒸馏水灌胃。每组每天干预1次,共12周。分别采用免疫组织化学方法、蛋白质印迹(Western blot)方法检测各组视网膜中磷酸化哺乳动物不育系20样激酶(P-MST)、大肿瘤抑制基因1(Lats1)、磷酸化Yes-相关蛋白(P-YAP)、转录相关因子(TAZ)、TEA结构域转录因子(TEAD)蛋白表达水平的变化。结果免疫组织化学方法的结果显示:与正常组比较,模型组大鼠视网膜中P-MST及P-YAP蛋白表达水平降低;与模型组比较,活血解毒方组大鼠视网膜中P-MST及P-YAP蛋白表达水平升高。Western blot的结果显示:与正常组比较,模型组大鼠视网膜中Lats1、TAZ及TEAD蛋白表达水平升高;与模型组比较,活血解毒方组大鼠视网膜中Lats1、TAZ及TEAD蛋白表达水平降低。结论活血解毒方可能通过Hippo信号通路改善糖尿病视网膜病变。 吕甜甜 王宏亮 邢玮 吴晏 王伟 张子剑 韩静关键词:活血解毒方 糖尿病视网膜病变 核酸适配体的体外筛选方法的最新研究进展 被引量:11 2017年 核酸适配体是用配体指数富集系统进化技术(SELEX)在体外筛选得到的一小段寡核苷酸序列,能够选择性的与不同的靶标特异性的结合,包括蛋白质、小分子、有机物、金属离子、药物等,具有高亲和力和高特异性。这项技术的诸多优势,使其迅速得到重视,核酸适配体在生物传感器、基因芯片、新药开发、纳米技术等诸多方面应用广泛。但是传统的SELEX方法操作繁琐,筛选周期长,需要几个月的时间才能筛选出与靶标具有高特异性的核酸适配体。随着SELEX的快速发展,近年来出现了很多新型的筛选方法,这些新的方法大大提高了筛选周期,极大的提高了筛选效率,拓展了核酸适配体的应用。总结介绍了近三年来出现的几种新型的核酸适配体的筛选方法,包括氧化石墨烯SELEX(Multiple GO-SELEX)、单壁碳纳米管辅助细胞SELEX(SWCNTs-assisted cell-SELEX)、基于芯片的细胞SELEX(on-chip Cell-SELEX)、序列构造SELEX(Sequence-constructive SELEX)、高保真SELEX(High-Fidelity SELEX),有助于人们进一步了解、认识核酸适配体筛选技术的发展现状,更好促进核酸适体在各个领域中的应用前景。 李亚楠 赵洁 张傲哲 谭琰 华茜 张子剑关键词:核酸适配体 SELEX 附子对高糖刺激下施万细胞中Krox20-Oct6信号通路及其调控的髓鞘蛋白的影响 2017年 目的观察附子对高糖培养下施万细胞中Krox20-Oct6途径及其调控的髓鞘蛋白的影响,以揭示附子治疗糖尿病周围神经病变的机制。方法将施万细胞分为以下6组:(1)正常组(低浓度葡萄糖);(2)对照组(甘露醇);(3)模型组(高浓度葡萄糖);(4)附子水提物高、中、低剂量组(10μg/mL,1.0μg/mL,0.1μg/mL)。常规培养3天后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞Oct6、Krox20、髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白Z mRNA的表达水平,采用Western blot法检测各组细胞的Oct6和Krox20蛋白的表达水平,采用免疫荧光法检测各组细胞的髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白Z蛋白的表达水平。结果 PCR结果显示,与正常组相比,模型组中Oct6、Krox20、髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白Z m RNA表达水平下降;与模型组比,附子水提物各剂量组中Oct6、Krox20、髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白Z m RNA表达水平上升。Western blot结果证明,与正常组相比,模型组中Oct6蛋白、Krox20蛋白表达水平下降;与模型组比,附子水提物各剂量组中Oct6蛋白、Krox20蛋白表达水平上升。免疫荧光结果提示,与正常组相比,模型组中髓鞘碱性蛋白蛋白及髓鞘蛋白Z蛋白表达水平下降;与模型组比,附子水提物各剂量组中髓鞘碱性蛋白蛋白及髓鞘蛋白Z蛋白表达水平上升。结论高浓度葡萄糖通过抑制Krox20-Oct6途径使施万细胞髓鞘蛋白生成能力下降,而附子可能通过Krox20-Oct6途径促进髓鞘蛋白的形成,从而改善糖尿病周围神经病变。 吕甜甜 王宏亮 邢玮 吴晏 王伟 张子剑 韩静关键词:糖尿病周围神经病变 附子 施万细胞 核酸适体技术在生物医学研究中的应用 被引量:2 2014年 以单链随机寡核苷酸序列为文库,通过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)能够获得与靶标特异性结合的核酸适体,这是一类新型的分子识别探针,其与靶标的亲和力可以同抗原抗体相媲美,甚至优于抗原抗体的结合。核酸适体广泛应用在生化分析、疾病诊断、药物研发等领域。该文将介绍核酸适体的筛选和特点以及核酸适体在生物分子检测、疾病的诊断和治疗中的应用,最后介绍核酸适体在神经系统疾病研究中的应用。 赵洁 张琦 王旭 华茜 张子剑关键词:核酸适体 生化检测 疾病诊断 神经系统疾病 活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜组织中microRNA表达的影响 被引量:1 2017年 目的观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜组织中microRNA-125a-3p、microRNA-212-3p、microRNA-290、microRNA-129-5p、microRNA-30c-5p、microRNA-153-3p和microRNA-423-5p表达的影响,探讨其改善糖尿病视网膜病变的机制。方法选取SPF级雄性SD大鼠15只。一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型大鼠10只,随机分为模型组和活血解毒方组,另设5只为正常对照组。造模成功后第20周开始给药,给药12周后摘取眼球,提取视网膜组织中的总RNA。采用Real-time PCR技术检测microRNA-125a-3p、microRNA-212-3p、microRNA-290、microRNA-129-5p、microRNA-30c-5p、microRNA-153-3p和microRNA-423-5p的表达。结果与正常对照组相比,模型组microRNA-125a-3p、microRNA-212-3p、microRNA-290、microRNA-129-5p和microRNA-30c-5p表达降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.05,P>0.05),microRNA-153-3p和microRNA-423-5p表达升高(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,活血解毒方组microRNA-125a-3p、microRNA-212-3p、microRNA-290、microRNA-129-5p和microRNA-30c-5p表达升高(P>0.05,P<0.05,P>0.05,P<0.01,P<0.05),microRNA-153-3p和microRNA-423-5p表达降低(P<0.01,P<0.01)。结论推测活血解毒方是通过上调糖尿病大鼠视网膜组织中microRNA-125a-3p、microRNA-212-3p、microRNA-290、microRNA-129-5p和microRNA-30c-5p的表达,下调microRNA-153-3p和microRNA-423-5p的表达来起到延缓糖尿病视网膜病变的发生和发展进程的作用。 王宏亮 吕甜甜 邢玮 韩静 吴晏 张子剑 王伟关键词:糖尿病视网膜病变 活血解毒方 MICRORNA 基于核酸适配体技术对清开灵注射液中胆酸的研究 被引量:2 2017年 目的利用免疫磁珠分离技术和核酸适配体相结合的方法剔除清开灵注射液中胆酸小分子,借此研究胆酸在清开灵注射液对细胞脱颗粒中的作用。方法将标记有生物素的胆酸的核酸适配体与表面有链霉亲和素包被的磁珠偶联,然后将偶联物与清开灵注射液进行孵育,使胆酸与核酸适配体特异结合,最后利用磁性分离将清开灵注射液中的胆酸剔除。对胆酸剔除前后的清开灵注射液进行细胞脱颗粒实验,以研究其类过敏反应的性质。结果磁珠与适配体的偶联反应具有浓度依懒性。适配体剔除清开灵注射液中的胆酸也具有浓度依懒性。剔除部分胆酸后的清开灵注射液对细胞的脱颗粒作用,与清开灵注射液相比,有显著下降。结论利用胆酸的核酸适配体与免疫磁珠分离技术能够剔除清开灵注射液中的胆酸,为研究小分子物质在中药注射液中的作用提供了新的研究方法。 赵洁 华茜 李亚楠 张傲哲 王旭 张子剑关键词:核酸适配体 胆酸 清开灵注射液 免疫磁珠分离