董慧莹
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 供职机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水禽细小病毒基因重组研究进展被引量：2
- 2017年
- 水禽细小病毒包括鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)和番鸭细小病毒(muscovy duck parvovirus,MDPV)。GPV可感染鹅和番鸭而MDPV仅能感染番鸭,给世界各地的水禽养殖业带来了巨大的经济损失。水禽细小病毒基因组曾被认为进化率较低,其适应性进化主要是通过点突变累积的方式来进行的。然而,最近的研究结果表明,基因重组在水禽细小病毒的进化过程中扮演着极其重要的角色,并由此产生了新的水禽细小病毒。本文综述了在水禽细小病毒基因重组领域的最新研究成果,为对水禽细小病毒的认识及防控带来有益的帮助。
- 黎明于天飞董慧莹郭磊韦大杰张子豪
- 关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒基因重组
- 番鸭细小病毒YL08株VP1基因重组分析
- 2017年
- 为确定番鸭细小病毒(MDPV)YL08株的起源和进化过程,基于VP1全基因序列,将YL08株与其他6株MDPV中国大陆株进行了基因重组分析。系统进化树分析表明:7株MDPV可分成3组,MDPV-Ⅰ、MDPV-Ⅱ和MDPV-Ⅲ。MDPV-Ⅰ仅仅包括1株MDPV,为黑龙江的YL08株;MDPV-Ⅱ包括3株MDPV,为广东GD株以及福建P株和P1株;MDPV-Ⅲ包括2株MDPV,为广西MDPV-GX5株和上海SAAS-SHNH株。通过Sim Plot软件和系统进化树进行的重组分析表明,MDPV YL08株来源于MDPV-Ⅱ和MDPV-Ⅲ之间的重组。这是首次发现在MDPV VP1基因间存在重组现象。
- 黎明董慧莹于天飞
- 关键词：番鸭VP1基因系统进化树
- 番鸭细小病毒YL08株VP1基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2016年
- 为明确番鸭细小病毒结构蛋白（VP1）基因的分子特征,本研究利用PCR方法从番鸭细小病毒（MDPV）黑龙江分离株YL08中扩增出VP1基因,并对其进行了克隆测序和分析。基因测序结果表明：MDPV YL08株VP1基因全长为2 199 bp,编码732个氨基酸;MDPV YL08株VP1基因与国内外其他已发表的MDPV分离株核苷酸序列的同源性为92.7%~95.8%;系统进化树分析表明：MDPV各分离株在遗传进化上存在较为明显的地域性。本研究中MDPV YL08株与其他MDPV中国大陆分离株处于不同的分支,提示其可能具有独特的遗传起源。
- 于天飞董慧莹黎明樊兴冬闫冰
- 关键词：番鸭细小病毒VP1克隆
- 番鸭细小病毒非结构蛋白B细胞线性抗原表位的鉴定被引量：1
- 2016年
- 为了分析番鸭细小病毒(muscovy duck parvovirus,MDPV)YL08株NS1蛋白(氨基酸序列全长627 aa)抗原表位,本研究设计了一套覆盖整个NS1蛋白的短肽,短肽长为30个氨基酸左右,有10个氨基酸重叠。为了表达这些短肽,共设计合成了31对互补的寡核苷酸片段。每对寡核苷酸片段5'端磷酸化。上述寡核苷酸片段退火后,插入至原核表达载体p ET-32a(+)中,经IPTG诱导获得了相应重组蛋白的表达。利用切胶纯化的方法对表达蛋白进行了纯化。应用MDPV YL08株人工感染番鸭血清对表达的31个重组蛋白的抗原性进行了检测,Western blot结果表明,表达的7个融合蛋白NS(481-510)、NS(501-530)、NS(521-550)、NS(541-570)、NS(561-590)、NS(581-610)和NS(601-627)能被MDPV感染血清所识别,而其他融合蛋白不能被MDPV感染血清所识别。同时,上述7个表达的融合蛋白不与灭活MDPV免疫番鸭血清反应。综合上述试验结果,MDPV YL08株NS1蛋白的B细胞线性抗原表位区位于NS1蛋白的羧基末端481 aa^627 aa。Dot-ELISA试验表明,重组蛋白NS(501-530)的抗原性相对更强。本研究为建立基于抗原表位的MDPV自然感染和人工免疫番鸭的鉴别诊断方法提供了理论依据。
- 于天飞董慧莹黎明樊兴冬闫冰于志丹
- 关键词：番鸭细小病毒非结构蛋白抗原表位
- 猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白亲和肽的原核表达及其病毒亲和性分析被引量：4
- 2019年
- 为了研究猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白(M蛋白)亲和肽的病毒亲和性,建立快速有效的TGEV检测方法,设计了1条含有TGEV M蛋白亲和肽的串联基因,核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工基因合成获得了含有M蛋白亲和肽基因的重组质粒pUC57-MQHT。然后,根据合成基因的序列,设计合成了1条特异性引物,以pUC57-MQHT为模板,通过PCR获得了150 bp的TGEV M蛋白亲和肽基因。亲和肽基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1,获得重组质粒pET-32a-MQHT和pGEX-6p-MQHT。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT,分子质量分别为25,31 ku。切胶纯化后,重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT分别经His标签单克隆抗体和GST标签单克隆抗体鉴定,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。Western Blot分析表明,2种重组蛋白可与TGEV特异性结合。Dot-ELISA分析表明,在TGEV滴度为1×10 3,5×10 2,2.5×10 2 TCID50/mL时2种重组蛋白都可显示出阳性反应,而在1.25×10 2 TCID50/mL滴度时无可见斑点,具有良好的TGEV亲和性。阻断试验表明,1∶100或1∶200稀释的TGEV阳性血清可完全阻断TGEV H株(1×10 5 TCID50/mL)与2种重组蛋白的结合,特异性良好。为建立TGEV诊断方法奠定了一定的理论和物质基础。
- 于天飞董慧莹董慧莹谢鹏宇孙婉姝黎明黎明
- 关键词：传染性胃肠炎病毒膜蛋白原核表达亲和性
- 猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达被引量：1
- 2020年
- 【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID50为5×102 mL-1。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。
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- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒SPIKE蛋白原核表达
- 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位C的串联表达研究被引量：5
- 2017年
- 为比较含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗原表位C不同表位密度的重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位C的编码核酸序列进行串联,构建了重组表达质粒pET-(C_1C_2)_2~p ET-(C_1C_2)_6,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。Western blot分析表明,表达的6种重组蛋白r-C_1C_2~r-(C_1C_2)_6均具有良好的抗原性。采用Dot-ELISA方法对各重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,含有12个表位肽的重组蛋白r-(C_1C_2)_6的抗原性强于其它重组蛋白。本研究制备的串联重组蛋白为建立TGE血清学诊断方法奠定了物质基础。
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- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白
- 猪传染性胃肠炎病毒血清抗体Dot-ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2018年
- 为快速检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体,本研究以原核表达系统串联表达的含有TGEV S蛋白抗原表位C的重组蛋白r-(C_1C_2)6为包被抗原建立TGEV血清抗体的Dot-ELISA检测方法。经反应条件优化结果显示,抗原最适包被量为62.5 ng/点;血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶80和45 min;羊抗猪IgG-HRP最佳工作浓度和工作时间分别为1∶800和45 min;最适封闭条件分别为5%脱脂乳37℃,45 min;血清和酶标抗体最适反应温度均为37℃;最佳显色时间7.5 min。结果显示该方法与猪轮状病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。该方法对TGEV阳性血清最低检测限为1∶1 280。采用建立的Dot-ELISA对27份临床猪血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA与TGEV/PRCV抗体检测试剂盒检测结果的符合率为92.6%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异,适合用于TGE快速诊断。
- 于天飞董慧莹董慧莹张喜文谢鹏宇孙婉姝
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒DOT-ELISA
