李海婧
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
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- 一种茶氨酸合成酶基因及其制备茶氨酸的方法
- 本发明公开了一种茶氨酸合成酶基因及其制备茶氨酸的方法，所述合成酶的基因cDNA全长为2886bp，阅读框长度为2532bp，所述基因cDNA序列如SEQ ID No.1所示。该茶氨酸合成酶基因可用于合成制备茶氨酸。具体方...
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- 文献传递
- 茶树谷氨酰胺合成酶同源基因的克隆及表达分析被引量：4
- 2017年
- 在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1)。结果显示:(1)GS1-2基因全长为1 710bp,开放阅读框长1 071bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%。(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白。(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺。
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- 关键词：茶树谷氨酰胺茶氨酸酵母表达
- 茶树γ-谷氨酰基转肽酶基因的克隆与功能分析
- γ-谷氨酰基转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GGT),又称γ-谷氨酰基转移酶,在生物体内广泛存在。已有研究表明E.coli和B.subtilis等微生物可利用GGT合成茶氨酸(N-乙基-γ-...
- 李海婧
- 关键词：茶树原核表达真核表达
- 文献传递
