赵欢
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：厦门大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 以乙肝病毒核心蛋白为载体制备肠道病毒71型非结构蛋白3D单克隆抗体
- 2017年
- 目的:预测肠道病毒71型(EV71)非结构蛋白3D的表位,以HBc蛋白为载体展示多肽,制备并鉴定抗EV71-3D的特异性单克隆抗体(m Ab)。方法:应用生物信息学方法分析预测出EV71 3D蛋白亲水性和免疫原性指数较高的多肽片段,并运用HBc颗粒型蛋白载体展示肽段,构建多肽融合蛋白,免疫BALB/c雌鼠,通过杂交瘤技术和亲和层析技术制备和纯化抗EV71-3D蛋白的特异性m Ab,用间接ELISA、ELISPOT、IFA和IHC对m Ab的性质进行初步鉴定。结果:构建表达分别嵌合3D蛋白34~43位氨基酸残基、61~76位氨基酸残基、151~164位氨基酸残基的HBc重组蛋白,免疫并经过多轮克隆化筛选,获得抗EV71-3D单克隆抗体3E1,其亚类为Ig G2a;免疫荧光试验、ELISPOT法和免疫组织化学染色结果显示其可与EV71特异性结合。结论:成功制备可特异性识别EV71的单克隆抗体3E1,为病毒的检测及进一步研究3D蛋白的功能奠定了基础,同时还验证了生物信息学技术与HBc颗粒型载体展示多肽技术相结合可快速高效地制备单克隆抗体。
- 李永超朱瑞徐龙发巫洋涛赵欢吴坤刘东晓程通夏宁邵
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体
- 水痘-带状疱疹病毒ORF43蛋白的单克隆抗体制备及初步研究被引量：1
- 2021年
- 水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起水痘和带状疱疹这两种临床表现不同病症的共同致病原,其基因组中ORF43是VZV在宿主细胞中复制的必需基因,但目前尚无针对VZV ORF43编码蛋白性质与功能的研究报道。本研究目的是制备抗VZV ORF43单克隆抗体,以初步研究该蛋白在细胞内的表达与分布情况。本研究构建了VZV ORF43蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中进行了该蛋白的表达,纯化蛋白免疫小鼠后,使用杂交瘤技术及克隆化筛选,获得一株特异性强、反应性好的抗VZV ORF43单克隆抗体2D3。本研究使用该抗体鉴定出VZV ORF43蛋白在质粒转染细胞与病毒感染细胞中表达的分子量大小均约为70kD,但分别呈现出细胞质和细胞核的不同亚细胞定位。以上工作为后续进一步探究该蛋白在VZV感染与致病过程中的作用奠定了基础。
- 翟兵可潘德全付文锟蔡雨泽王玮赵欢阙玉琼程通夏宁邵
- 关键词：单克隆抗体
- 水痘带状疱疹病毒ORF41的单克隆抗体制备及其初步研究被引量：1
- 2023年
- 目的:制备水痘-带状疱疹病毒(VZV)衣壳蛋白ORF41的单克隆抗体(mAbs),并对该蛋白性质进行初步研究。方法:截取VZV ORF41蛋白亲水性及免疫原性较优的片段,用大肠杆菌蛋白表达系统对相关区段进行表达并纯化,免疫BALB/c小鼠后,通过杂交瘤细胞技术制备并筛选出针对VZV ORF41的mAbs,并利用制备得到的mAbs进行ELISA、Western blot和免疫荧光实验,检测所得抗体的亲和性和特异性,同时分析VZV ORF41蛋白在细胞中的表达与分布特征。结果:本研究筛选到的VZV OR41 mAb 12C3具有较高的亲和性和特异性,可特异性识别在质粒转染及VZV感染细胞中表达的ORF41蛋白,且发现检测出的VZV ORF41蛋白在细胞质与细胞核中均有分布。结论:本研究获得针对VZV ORF41反应性、特异性良好的mAb,为进一步开展VZV ORF41蛋白功能和作用机制的研究提供基础。
- 蔡雨泽潘德全杨睿曦袁成先赵灿阳赵欢程通王玮(指导)夏宁邵
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒衣壳蛋白单克隆抗体
- 埃可病毒25型新型中和实验方法的建立与应用被引量：5
- 2016年
- 目的：建立一种新型的快速、高通量的埃可病毒25型（ECHO25）中和抗体检测方法,并初步评价其在ECHO25中和抗体筛选和血清流行病学调查中的应用价值。方法：应用免疫荧光方法筛选ECHO25高亲和性抗体并将其作为检测单抗,结合酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT）建立ECHO25中和抗体检测方法;使用不同效价的血清评价该方法的准确性;采用所建立的中和方法对ECHO25单克隆抗体、临床血清样品进行检测。结果：建立了快速检测ECHO25中和抗体的Nt-ELISPOT方法,以ECHO25单克隆抗体5B9作为检测抗体;相比经典的中和实验方法 Nt-CPE,该方法可显著缩短检测时间（从5～7 d缩短至1 d以内）,检测结果具有较好的一致性;采用所建立的Nt-ELISPOT方法首次筛选获得3株对ECHO25具有较好中和能力的单克隆抗体;临床血清样品检测结果显示厦门地区可能存在ECHO25的流行。结论：该方法可以应用于中和抗体筛选和血清学的临床辅助诊断,为ECHO25的防治研究提供支持。
- 李姝璇杨立生侯汪衡赵欢万俊凯陈梦媛何水珍程通夏宁邵
- 关键词：酶联免疫斑点法中和抗体
- 肠道病毒68型新型中和试验方法的建立及其初步应用被引量：2
- 2017年
- 针对肠道病毒68型(EV-D68)建立一种新型快速、高效的中和试验方法,并初步评价其在EV-D68流行病学研究中的应用价值。以灭活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;筛选反应性好、特异性强的抗EV-D68单克隆抗体作为检测抗体,基于酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立EV-D68高效中和试验方法;进一步比较该方法与传统中和试验方法 Nt-CPE的一致性,并使用该方法对临床血清样本进行检测。共获得10株分泌抗EV-D68单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取一株性能最优的15C5进行生产纯化,鉴定其为IgG3亚型;以15C5为检测抗体,建立了快速检测EV-D68中和抗体的Nt-ELISPOT方法;与Nt-CPE方法比较,Nt-ELISPOT方法将检测时间由5~7d缩短至1d以内,并且两种方法检测结果一致性良好;应用所建立的Nt-ELISPOT方法对厦门地区146份人群血清样本进行检测,显示血清样本EV-D68中和抗体阳性率为98.6%(144/146),提示厦门地区可能存在过EV-D68的流行。本研究基于ELISPOT建立的新型EV-D68中和试验方法快速可靠,适合通量检测,可以应用于EV-D68中和抗体水平的血清学调查,为EV-D68感染的防控工作提供帮助。
- 万俊凯王玮侯汪衡李姝璇赵欢郑清炳何水珍程通夏宁邵
- 关键词：中和抗体血清检测
- 寨卡病毒NS2B蛋白的表达纯化及单克隆抗体制备
- 2020年
- 目的:应用大肠杆菌重组表达并纯化寨卡病毒NS2B蛋白,制备抗NS2B蛋白的单克隆抗体。方法:构建携带NS2B基因的重组原核表达质粒,采用大肠杆菌ER2566作为表达菌株,以IPTG诱导表达,通过亲和层析纯化获得NS2B目的蛋白。用纯化后的NS2B蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选制备抗NS2B蛋白的单克隆抗体,并初步分析抗体的反应活性和特异性。结果:表达并纯化获得寨卡病毒NS2B蛋白,筛选获得可与NS2B蛋白结合并具有较好反应活性的单克隆抗体2H11,该单抗可识别寨卡病毒感染细胞后表达的NS2B蛋白。结论:筛选获得靶向寨卡病毒NS2B蛋白的单克隆抗体,可为后期深入开展寨卡病毒NS2B蛋白的功能和相关抗病毒药物研究提供支持。
- 吴钰彬李姝璇侯汪衡杨宏伟赵欢吴林丽吴文伟朱峻毅张军程通
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 寨卡病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及性能评价
- 2020年
- 目的制备抗寨卡病毒衣壳(Capsid,C)蛋白的单克隆抗体,并对该抗体的性质进行初步分析。方法设计并合成寨卡病毒C蛋白多肽,将多肽与BSA偶联后免疫小鼠,采用细胞融合技术融合、筛选杂交瘤细胞株,制备抗寨卡病毒C蛋白的单克隆抗体,并应用ELISA,Western blot及免疫荧光等方法对抗体的反应效价、亚型和特异性进行分析。结果筛选获得1株与C蛋白具有良好结合活性的小鼠单克隆抗体9C1,属于IgM亚型,其重链约为50 ku,轻链约为25 ku,该抗体能够与寨卡病毒感染细胞后表达的C蛋白反应。结论筛选获得了抗寨卡病毒C蛋白的单克隆抗体,该抗体具有良好反应性和特异性,为开展C蛋白的功能和寨卡病毒病的相关防治方法奠定了实验基础。
- 吴林丽侯汪衡吴钰彬李姝璇杨宏伟赵欢朱峻毅阙玉琼程通夏宁邵
- 关键词：C蛋白单克隆抗体
