刘艳菲
- 作品数：27 被引量：47H指数：4
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学理学更多>>
- 抑癌基因BCSC-1原核表达载体的构建及诱导表达
- 2010年
- 目的 构建BCSC-1基因原核表达载体并进行诱导表达、纯化.方法 PCR方法从腺病毒穿梭载体pDC316-BCSC-1扩增BCSC-1基因,构建原核表达载体ET30a-BCSC-1,转化感受态E.coli BL21（DE3）,并用IPTG进行诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测目的 蛋白的表达,并用超声洗涤方法进行目的 蛋白洗涤纯化.结果 成功构建原核表达载体pET30a-BCSC-1;在IPTG诱导下在E.coli BL21（DE3）中高效表达相对分子质量（Mr）为86 000的重组BCSC-1蛋白,目的 蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,经超声洗涤纯化后,重组蛋白纯度可达85%以上.结论 利用构建的原核表达载体成功表达出BCSC-1蛋白,为进一步制备抗BCSC-1的单克隆抗体及在临床中的应用打下良好基础.
- 袁芳鞠吉雨王丽娜邸大琳刘艳菲冯永堂
- 关键词：原核表达
- BGN结合TLR调控肝癌细胞生长浸润的作用及机制研究
- 肖伟玲李娜付晓燕刘艳菲林志娟梁淑娟
- 关键词：TLR肝癌
- mOX40-Fc的真核表达及其对混合淋巴细胞反应的影响被引量：2
- 2008年
- 构建重组pcDNA3.1-mOX40-Fc真核表达载体,在CHO细胞中表达,并初步研究融合蛋白mOX40-Fc对MLR中细胞增殖的影响。克隆编码hIgG1Fc基因片段,与编码小鼠OX40胞外段的基因融合,构建mOX40-Fc融合基因及其分泌型真核表达载体pcDNA3.1-mOX40-Fc;转染CHO细胞构建融合蛋白的稳定真核表达细胞株,用RT-PCR及夹心ELISA检测其表达,纯化后经SDS-PAGE及Western blot法对其进行鉴定,混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果:核苷酸序列测定显示构建的mOX40胞外段和hIgG1Fc段基因序列与GenBank序列一致、阅读框完整;RT-PCR、ELISA和Western blot检测表明转染细胞有分泌型重组蛋白的表达;功能实验提示mOX40-Fc能抑制MLR中的细胞增殖。成功构建mOX40-Fc真核表达载体并获得高效表达,该重组蛋白可在体外通过抑制OX40/OX40L共刺激通路抑制淋巴细胞增殖。
- 刘艳菲冯永堂鞠吉雨林志娟孙萍王丽娜
- 关键词：融合蛋白真核表达混合淋巴细胞反应
- 胸腺基质淋巴细胞生成素在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜的表达被引量：4
- 2011年
- 目的：探讨过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）的表达及分布。方法：5~6周龄BALB/c雌性小鼠经卵白蛋白（OVA）隔1周2次致敏,实验组小鼠第2次致敏1周后每隔1 d给予溶解于350μL无菌PBS的OVA灌胃,而对照组则不予致敏,仅在致敏后接受与实验组相同的干预,于第10次灌胃后2 h内处死,取血离心收集血清做ELISA检测IL-4、IFN-γ及OVA-IgE水平,取肠系膜淋巴结分离细胞培养72 h离心收集上清测IL-4及IFN-γ的水平,取肠组织行HE染色观察肠组织病理改变,行免疫组织化学染色观察TSLP的分布,实时定量RT-PCR检测TSLP mRNA的表达情况。结果：与对照组相比,实验组小鼠结肠黏膜充血水肿,腺区有大量炎性细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞。TSLP染色强度显著增强,在上皮呈连续性表达,并在腺区大量分布。TSLP mRNA平均表达水平较对照组显著提高（P〈0.01）。TSLP mRNA表达水平与肠系膜淋巴结分离细胞的培养上清中IL-4表达水平呈显著正相关（r=0.904,P〈0.01）;而与IFN-γ水平呈显著负相关（r=-0.886,P〈0.01）;同时实验组小鼠血清中可见高水平OVA-IgE的表达。结论：TSLP在正常肠黏膜存有生理性表达,而在过敏性腹泻小鼠结肠近端黏膜表达量显著增加,TSLP的过度表达可能是促进过敏性腹泻发生发展的重要环节。
- 徐灵芝冯永堂刘艳菲林志娟鞠吉雨梁淑娟杨京玉
- 关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素TH1/TH2
- TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜组织中表达的关系
- 研究背景:胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一种新近证实的与过敏性炎症有关的类IL-7细胞因子,在调节Th2型炎症的细胞因子起着重要作用。我们前期的研究发现,过...
- 冯永堂杨京玉徐灵芝刘艳菲孙萍苗乃发鞠吉雨林志娟
- 关键词：TSLPOX40OX40L
- mOX40-hIgG1Fc的构建、表达及其生物学活性的初步研究
- 目的:构建mOX40-hIsG1Fc融合蛋白真核表达载体,转染COS-7细胞进行表达获得mOX40-hIgG1Fc融合蛋白,并通过体外实验初步研究其生物学效应,为OX40分子的进一步研究奠定良好的基础。方法:①Trizo...
- 刘艳菲冯永堂牟东珍苗乃法梁淑娟王丽娜邸大琳吴国庆魏兵孙萍
- 关键词：OX40COS-7细胞
- 文献传递
- 三质粒慢病毒包装细胞体系的构建及其感染效率检测被引量：4
- 2013年
- 目的建立一种基于三质粒的慢病毒包装细胞体系并对其感染效率进行检测。方法利用双酶切方法构建一个pLVTHM重组慢病毒表达载体，然后与pSPAX2，pMD2．G共转染HEK293T获取慢病毒原液，利用高速离心的方法对其进行浓缩纯化。设定不同感染复数（1，5，10，15，20），将上述制备的慢病毒制品感染HEK293T和HepG2肝癌细胞，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达水平以确认制备的病毒是否成功，其感染效率如何。结果利用一段非沉默性基因片段，构建了一个pLVTHM重组慢病毒表达栽体，将其与两个包装质粒共转染HEK293T细胞后，荧光显微镜下可见发出明亮绿色荧光，证明上述栽体成功转染到包装细胞中。于转染后42h和66h分剐收集细胞培养上清，获得含有慢病毒的原液，对病毒进行浓缩后获得浓度为l×10^8Tu／ml的病毒浓缩液。利用浓缩的病毒感染HEK293T和HepG2细胞，随着感染时间及感染复数值的增加，细胞内绿色荧光表达明显增强，感染后24h时HEK293T细胞内即可见明亮绿色荧光，其感染效率约为60％；在较难进行基因转染的HepG2细胞中，感染后24h后约40％的细胞可见明亮绿色荧光。结论成功建立了三质粒慢病毒包装细胞体系，该体系可成功表达含有目的基因的慢病毒，为后续系列研究提供了重要的工作平台。
- 岳翠青邵华明林志娟刘艳菲吴国庆梁淑娟
- 关键词：慢病毒载体
- 生物技术专业免疫学实验教学改革的效果分析被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨生物技术专业本科生免疫学实验课教学改革的效果。方法:采用问卷调查的方法,以潍坊医学院2006级生物技术专业本科学生作为实验对象进行调查。结果:95%的同学认为开设实验课非常必要,大多数同学评价实验课各环节是重要的,对实验内容的安排满意,认为目前的安排符合专业特点。结论:通过改革实验内容及教学模式,免疫学实验教学取得了较好的效果。
- 孙萍牟东珍刘艳菲林志娟梁淑娟
- 关键词：免疫学实验教学教学改革
- 人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定
- 2010年
- 目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.
- 崔杰辛宁冯永堂鞠吉雨王成伟刘艳菲苗乃法
- 关键词：OX40单克隆抗体杂交瘤
- CBS教学法在医学留学生免疫学教学中的应用与思考被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨CBS教学法在医学留学生免疫学授课中的教学效果。方法:将留学生随机分为实验组和对照组,分别采用CBS教学法和传统教学法授课,授课结束后分别统计理论知识和实验操作成绩,并进行教学满意度问卷调查。结果:实验组学生理论知识和实验操作成绩均显著高于对照组(P<0.05)。调查问卷结果显示,CBS教学法能有效激发学生学习兴趣,得到学生的高度认可。结论:CBS教学法能有效提高医学留学生免疫学教学质量。
- 邸大琳陈蕾李进刘艳菲魏兵鞠吉雨
- 关键词：医学留学生CBS教学法免疫学
