李维维
- 作品数：4 被引量：22H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- NS5B和整合素β3在猪瘟病毒复制增殖中的作用和分子机制研究
- 猪瘟（CSF）是一种具有高度传染性和致死性的传染病，给养猪业造成了巨大的经济损失。目前我国控制猪瘟的方法主要是疫苗预防和扑杀患病动物，虽然收到了明显的防疫效果，但慢性猪瘟和非典型猪瘟在我国仍不断发生，给猪瘟的防疫带来了困...
- 李维维
- 关键词：猪瘟病毒NS5B整合素Β3MICRORNA
- 文献传递
- 整合素干扰载体的构建及细胞转染试验
- 2012年
- 应用RNA干扰方法,设计合成了整合素的2个不同干扰位点的shRNA及空白对照载体,转化E.coli DH5α菌株,扩大培养后提取质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞。RT-PCR方法检测显示,干扰载体在mRNA水平上的干扰效果明显。该干扰载体的构建及转染,为进一步研究整合素对猪细胞增殖特性及猪瘟病毒在细胞中的增殖作用奠定了基础。
- 李维维张彦明王刚程敏陈婷
- 关键词：整合素细胞转染
- 猪瘟病毒实时定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2012年
- 为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方法。该方法的检测灵敏度可达每微升10个拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高出1个数量级;对标准品质粒检测的线性范围是1.0×109～1.0×101μL-1。对1.0×107、1.0×105、1.0×103μL-13种稀释度的标准品质粒进行重复试验,批内变异系数分别是0.30%、0.85%、0.43%,批间变异系数分别是0.81%、1.36%、0.63%,具有良好的重复性。应用该方法对45份临床样品进行检测,检出26份阳性样品,而常规PCR只检测出19份阳性样品,说明该实时定量PCR方法的敏感性高于常规PCR。可见,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可用于检测病料中的猪瘟病毒。
- 程敏郭抗抗张彦明何雷董玲娟李维维刘伟曹伟伟张渭东
- 关键词：猪瘟病毒实时定量PCRTAQ
- 猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：19
- 2011年
- 【目的】建立一种能够实际应用于猪瘟兔化弱毒疫苗中猪瘟病毒含量检测的荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中登录号为AF091507的猪瘟病毒（CSFV）兔化弱毒株的全长基因组序列,在其5′非编码区设计2对特异性引物（标准品引物、定量引物）和1条探针（qPCR-P）,通过标准品引物进行RT-PCR扩增及T7 RNA聚合酶体外转录构建标准品RNA。对荧光定量PCR方法的各项条件进行优化,建立猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR检测方法,并采用该法对成品猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量进行检测。【结果】成功构建了体外转录的标准品RNA,建立了检测猪瘟兔化弱毒的荧光定量PCR方法。该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,比RT-nPCR方法的灵敏度高出1个数量级;该法对标准品RNA检测的线性范围为1.0×108~1.0×102拷贝/μL。对1.0×108,1.0×106,1.0×103拷贝/μL 3种稀释度的标准品RNA进行重复性试验,批内变异系数分别为0.54%,0.52%和0.39%;批间变异系数分别为1.47%,1.85%和1.01%,具有良好的可重复性。应用该方法对不同厂家猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量进行测定,可知同一厂家脾淋苗中的病毒含量比细胞苗高出1~2个数量级,而不同厂家同一类型疫苗中病毒含量也有差异,其中脾淋苗差异不大,而细胞苗间的差异较大,最高可达27.2倍。【结论】建立的猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR方法,具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,为实际工作中对猪瘟兔化弱毒疫苗的质量监控提供了重要的技术支撑。
- 邓力张彦明李维维杨幼聪谭晓妮
- 关键词：猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR体外转录
