苏敬阳
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用被引量：1
- 2017年
- 目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。
- 苏敬阳邵冬雪雷明康泽赵君方涵田郭凤赵美眯郝丽英封瑞
- 关键词：NT纯化CAMGS
- Cav1.2钙离子通道三维结构的同源建模及其应用被引量：4
- 2017年
- 目的构建心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,检验模型的准确性与可靠性。方法利用SWISS-MODEL同源建模服务器,对豚鼠心肌细胞Cav1.2通道α1亚基进行同源建模,建模结果提交至加州大学蛋白质结构在线检测服务器进行检测评估,并对结构模型进行打分。利用MOE软件分子对接程序模拟阻断剂或药物与Cav1.2通道模型的结合,进一步验证通道模型的准确性与可靠性。结果在SWISS-MODEL服务器上搜寻到的模板序列Cav1.1α1S与目标序列Cav1.2α1C均为L型钙通道,序列比对结果显示其同源性高达71.5%,选择自动模式(automated mode)进行同源建模。L型钙通道阻断剂维拉帕米、硝苯地平、地尔硫卓能结合到Cav1.2通道三维结构模型的特定区域,而钠通道特异性阻断剂河豚毒素并未与该模型相结合,中药有效成份白花前胡甲素和小檗碱与该模型也有一定的结合。结论成功构建了心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,为后续研究提供了可靠样本,也为同源建模在研究离子通道三维结构预测中的应用奠定了基础。
- 雷明苏敬阳李卓晏珊孙雪菲朱彤郝丽英
- 关键词：离子通道同源建模分子对接
- 超声破碎法联合应用DTT提取纯化Ca_V1.2钙通道CT3蛋白被引量：1
- 2016年
- 目的探讨心肌Ca_V1.2钙通道CT3蛋白片段提取与纯化的方法。方法将CT3的cDNA插入pG EX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CT3的GST融合蛋白表达,并采用超声破碎法进行分离纯化,在10mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情况下,PreScission蛋白酶切除GST标签,凝胶电泳鉴定CT3蛋白,检测蛋白纯度和相对分子质量。结果 SDSPAGE结果显示,超声破碎法可以纯化得到GST-CT3融合蛋白,且单纯应用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段浓度较低,而采用PreS cission蛋白酶联合应用DTT则可以成功提取纯化出浓度较高的CT3蛋白片段。结论超声破碎法联合应用DTT与PreScission蛋白酶能够提取纯化出高浓度和纯度的CT3蛋白片段,为深入研究CT3的生物学功能奠定了基础。
- 苏敬阳封瑞吕力婷邵冬雪李墨方涵田魏贵贵孙雪菲郝丽英
- 关键词：DTT融合蛋白纯化
