邵冬雪
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用被引量：1
- 2017年
- 目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。
- 苏敬阳邵冬雪雷明康泽赵君方涵田郭凤赵美眯郝丽英封瑞
- 关键词：NT纯化CAMGS
- 细胞内高镁对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的调节作用
- 目的研究细胞内高镁对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响及其作用机制。方法利用Langendroff灌流装置,采用胶原酶法急性分离单个豚鼠心室肌细胞。应用膜片钳技术,采用细胞贴附模式和膜内面向外模式记录单个L型钙通道电流,观察...
- 赵美眯于丽凤连雯雯邵冬雪曾本清孙雪菲封瑞郝丽英
- 文献传递
- Calmodulin及其突变体与去磷酸化的Cav1.2钙通道片段CT1的结合情况
- 目的研究Calmodulin(CaM)及其突变体与去磷酸化CT1的结合情况。方法本实验中研究的CaM突变体包含CAM12(N-lobe上的两个Ca结合发生突变)、CAM34(C-lobe上的两个Ca结合发生突变)和CAM...
- 王红梅何桂林邵冬雪封瑞孙威郝丽英
- 文献传递
- 重组钙调蛋白及其突变体蛋白的分离纯化及活性鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的建立一种简单稳定高效分离纯化体外重组钙调蛋白(CaM)及其突变体蛋白的方法。方法将CaM及其三种钙结合位点突变体的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CaM及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度;采用膜片钳技术检测纯化后蛋白的活性。结果纯化的CaM及突变体蛋白具有较高的纯度;CaM及突变体蛋白得到了大量表达;纯化后蛋白可恢复已"run-down"心肌细胞膜钙通道的活性。结论本研究成功建立了一种稳定高效简单的重组CaM及其突变体蛋白的分离纯化方法,为深入研究CaM的生物学功能奠定了基础。
- 何桂林郭凤封瑞胡慧媛邵冬雪郝丽英
- 关键词：钙调蛋白GST突变体膜片钳
- 超声破碎法联合应用DTT提取纯化Ca_V1.2钙通道CT3蛋白被引量：1
- 2016年
- 目的探讨心肌Ca_V1.2钙通道CT3蛋白片段提取与纯化的方法。方法将CT3的cDNA插入pG EX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CT3的GST融合蛋白表达,并采用超声破碎法进行分离纯化,在10mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情况下,PreScission蛋白酶切除GST标签,凝胶电泳鉴定CT3蛋白,检测蛋白纯度和相对分子质量。结果 SDSPAGE结果显示,超声破碎法可以纯化得到GST-CT3融合蛋白,且单纯应用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段浓度较低,而采用PreS cission蛋白酶联合应用DTT则可以成功提取纯化出浓度较高的CT3蛋白片段。结论超声破碎法联合应用DTT与PreScission蛋白酶能够提取纯化出高浓度和纯度的CT3蛋白片段,为深入研究CT3的生物学功能奠定了基础。
- 苏敬阳封瑞吕力婷邵冬雪李墨方涵田魏贵贵孙雪菲郝丽英
- 关键词：DTT融合蛋白纯化
- 体外重组CaV1.2不同蛋白片段纯化及其与CaM相互作用的研究被引量：4
- 2013年
- 目的纯化CaV1.2不同蛋白片段并研究其与CaM的相互作用。方法质粒转化、筛选得到转化成功BL21菌株,利用IPTG诱导GST钙通道融合蛋白表达,Glutathione-Sepharose 4B beads纯化钙通道不同蛋白片段;采用GST pull-down assay实验研究钙通道蛋白不同片段与CaM以及突变体的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得钙通道不同蛋白片段;GST pull-down assay结果显示CT1可与CaM及突变体结合,且GST-CT1与野生型CaM结合量显著多于与突变体CaM结合量。结论成功纯化CaV1.2钙通道蛋白片段并顺利完成GST pull-down assay实验,为深入研究蛋白相互作用或发现新的蛋白相互作用奠定了基础。
- 何桂林邵冬雪印丹丹胡慧媛郭凤王红梅郝丽英
- 关键词：CAM融合蛋白
- High intracellular Mg2+ affects upon the activities of L-type calcium channel in guinea-pig ven-tricular myocytes
- This study is aimed to investigate the effects of high intracellular Mg2+(Mg2+i)upon the gating-mechanism of L...
- 赵美眯雷明邵冬雪王红梅封瑞胡慧媛孙雪菲郭凤赵金生郝丽英
- 文献传递
- ACE2与新型冠状病毒肺炎的心肾损伤被引量：1
- 2020年
- 由新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)不仅可以诱发典型的呼吸系统疾病,也能导致心肾系统等相关疾病。SARS-CoV-2的受体为血管紧张素转换酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)。本文通过阐述ACE2在心脏和肾脏中的作用,分析SARS-CoV-2感染引起患者心肾损伤的可能机制,为临床治疗COVID-19及研发抗SARS-CoV-2药物提供参考依据。
- 张晨阳邵冬雪郑曦焦光宇郝丽英
- 关键词：新型冠状病毒心脏肾脏ACE2
- 钙调蛋白镁结合位点突变体载体的构建、表达纯化及鉴定
- 2016年
- 目的构建钙调蛋白3种镁离子结合位点突变体的质粒载体,并进行表达纯化及鉴定,为深入研究钙调蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用钙调蛋白cDNA进行点突变,制备3种镁离子结合位点突变的cDNA。将突变后的cDNA分别插入pGEX-6P-3载体,制备钙调蛋白突变体载体质粒。质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,培养大肠杆菌,并诱导GST融合蛋白表达。利用Glutathione-Sepharose 4B珠子和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序证实成功构建钙调蛋白突变体质粒;表达纯化得到的钙调蛋白突变体经电泳图鉴定纯度较高,浓度约1.0mg/mL。结论本研究成功构建了钙调蛋白镁结合位点突变体融合蛋白原核表达质粒,分离纯化可获得较高浓度较高纯度的钙调蛋白突变体。
- 赵美眯李卓邵冬雪梁洪玥晏珊封瑞孙雪菲郭凤郝丽英
- 关键词：钙调蛋白突变体融合蛋白
- 钙调蛋白的N末端和C末端片段载体构建和蛋白制备
- 2016年
- 目的构建钙调蛋白(Ca M)的N末端片段(N-lobe)、C末端片段(C-lobe)及其钙离子(Ca2+)结合位点突变体(N-lobe12,Clobe34)原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和活性鉴定。方法将上述c DNA片段插入PGEX-6p-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。利用Glutathione-Sepharose 4B beads进行分离纯化。采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,Bradford方法测定纯化后蛋白浓度,GST pull-down方法和膜片钳技术检测纯化后蛋白活性。结果蛋白高表达,纯化后获得高纯度、高浓度目的蛋白,纯化后蛋白能与Cav1.2型钙通道结合并可恢复已"rundown"心肌细胞膜钙通道的活性。结论本研究成功构建可以表达生物活性蛋白的N-lobe、C-lobe、N-lobe12及C-lobe34原核表达载体,为深入研究Ca M的生物学功能奠定了基础。
- 邵冬雪孙嘉瑶杜逸李墨唐子鉴于佳慧胡慧媛孙雪菲孙胜男郝丽英
- 关键词：钙调蛋白突变体膜片钳
