勾英
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科学技术基金博士科研启动基金更多>>
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- 慢病毒介导过表达NTCP的NTCP-SK-Hep1细胞系构建被引量：1
- 2017年
- 目的建立钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)过表达的肝癌细胞系,以作为研究乙肝病毒(HBV)感染的细胞模型。方法构建NTCP慢病毒重组质粒Gv-NTCP,挑取克隆进行PCR扩增和序列测定;将阳性重组质粒与慢病毒辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装Gv-NTCP慢病毒并进行病毒滴度测定;Gv-NTCP慢病毒感染人肝癌细胞株SK-Hep1,嘌呤霉素筛选,通过荧光显微镜,PCR和Western blot检测NTCP的表达。结果测序结果证实Gv-NTCP慢病毒载体构建成功;在HEK293T细胞中包装的Gv-NTCP慢病毒滴度为2.0×10~8TU/m L;该病毒感染SK-Hep1细胞后,在荧光显微镜下可见感染细胞表达绿色荧光,PCR结果显示感染组的NTCP表达明显增高,WB结果显示感染组的NTCP蛋白表达明显增高。结论成功建立了NTCP过表达的人肝癌细胞系NTCP-SK-Hep1。
- 勾英刘正芸肖冬焱周艳萌罗果高兴红王欢
- 关键词：慢病毒载体
- NO供体药JS-K对HepG2.2.15细胞的增殖抑制研究
- 2016年
- 目的一氧化氮(NO)供体药JS-K对多种肿瘤细胞生长有抑制作用,但尚无见对HBV(乙肝病毒)阳性肝癌细胞报道。病毒感染是肝癌发生的一个关键因素,故本实验研究了JS-K对HBV转染的Hep G2.2.215细胞增殖的抑制作用及可能涉及的机制。方法以不同浓度的JS-K处理Hep G2.2.15细胞,并在不同时间下用显微镜从形态学上观察JS-K作用于Hep G2.2.15细胞后形态学的变化;CCK-8法检测JS-K对Hep G2.2.15细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测JS-K作用于Hep G2.2.15细胞后细胞凋亡及细胞周期的变化;Western蛋白印迹法检测细胞凋亡相关蛋白(BAD,cleaved caspase-7和cleaved PARP)和DNA损伤相关蛋白(p-H2AX,p-CHK1和p-CHK2)的含量变化。结果通过显微镜观察加药后的Hep G2.2.15细胞,发现明显的抑制作用,细胞皱缩变圆,有浓度(0,1,10和20μmol·L-1)依赖性。CCK8结果显示,JS-K能明显抑制Hep G2.2.15细胞的增殖,具有时间(24,48和72 h)及浓度(0,1,3,10和30μmol·L-1)依赖性。流式细胞术结果显示JS-K浓度为5μmol·L-1时就引起G1期细胞比例从62.38%下降至27.27%,G2期细胞比例从9.50%上升至52.07%,将细胞阻滞在G2期。双染AV和PI结果显示,JS-K能明显诱导细胞凋亡,在浓度为30μmol·L-1时,细胞凋亡率高达70.83%。而且,JS-K(0,1,10和20μmol·L-1)使凋亡相关蛋白BAD、cleaved caspase-7和cleaved PARP及DNA损伤相关蛋白p-H2AX,p-CHK1和p-CHK2的蛋白表达上调。结论 JS-K抑制Hep G2.2.15细胞增殖的效应与细胞凋亡和DNA损伤有关。
- 刘正芸勾英肖冬焱刘杰王欢
- 关键词：细胞凋亡DNA损伤
- NO供体药JS-K对HepG2.2.15细胞的增殖抑制研究
- 目的 一氧化氮(NO)供体药JS-K对多种肿瘤细胞生长有抑制作用,但尚无见对HBV(乙肝病毒)阳性肝癌细胞报道.病毒感染是肝癌发生的一个关键因素,故本实验研究了JS-K对HBV转染的HepG2.2.215细胞增殖的抑制作...
- 刘正芸勾英肖冬焱刘杰王欢
- 关键词：细胞凋亡DNA损伤
- NO供体药物JS-K在新建HBV感染细胞模型中的抗病毒效应初探
- 目的：建立NTCP过表达的HBV感染细胞模型，利用该模型探讨NO供体药物JS-K的抗病毒效应。 方法：⑴牛磺胆酸钠共转运多肽（NTCP)慢病毒载体构建及NTCP-SK-Hep1稳转细胞系的建立：构建NTCP慢病毒重组质...
- 勾英
- 关键词：抗病毒药生化药理
- JS-K的抗肿瘤作用研究进展被引量：1
- 2017年
- 肿瘤已经成为当今社会的重大健康问题,作为抗肿瘤药物开发的一氧化氮供体药JS-K在这方面引人注目,其具有广谱的抗肿瘤活性。到目前为止,已有研究表明JS-K在白血病、多发性骨髓瘤、肝癌、肺癌和乳腺癌等多种肿瘤细胞中有良好的抗肿瘤作用,也有研究表明JS-K具有对正常细胞几乎没有杀伤作用的特点,本课题组前期研究发现JS-K也具有抗病毒的作用,并对乙肝病毒转染的HepG2.2.15细胞有很好的生长抑制作用。本文通过查阅国内外相关文献,对JS-K的抗肿瘤研究进展作一综述,以期为JSK对抗病毒引起的肝肿瘤的研究提供一定的参考和借鉴。
- 刘正芸勾英刘杰王欢
- 关键词：一氧化氮抗肿瘤
- NO前体药物JS-K体外对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察一氧化氮前体药物JS-K体外对乙肝病毒HBs Ag和HBe Ag的影响。方法以携带有HBV基因组的Hep G2.2.15细胞作为研究工具,MTT法检测JS-K(0、1、2、5、10μM)对细胞的毒性作用;荧光染色检测JS-K作用于细胞后一氧化氮的释放情况;ELISA及免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测的方法,检测不同浓度JS-K对细胞中HBs Ag和HBe Ag表达的影响。结果包括最高浓度组(10μM)在内的各浓度JS-K对细胞均无统计学意义(P>0.05);JS-K作用于细胞24 h后,细胞内一氧化氮的释放明显增多;随着JS-K浓度的增高,HBs Ag的表达明显降低,HBe Ag的表达有一定的减少。结论一氧化氮前体药物JS-K在体外对乙肝病毒的抗原有一定的抑制作用。
- 王欢周艳萌勾英刘正芸惠景刘杰
- 一氧化氮前体药JS-K安全性的初步观察被引量：4
- 2016年
- 目的一氧化氮前体药,JS-K体内外均具有良好的抗肿瘤效应,但其毒性研究却鲜有报道。本文初步观察了小鼠长期口服和短期皮下注射JS-K的毒性,旨在为JS-K的后续研究提供毒性方面的实验依据。方法雄性昆明小鼠40只,随机分为溶酶(等容量羧甲基纤维素钠,CMC)对照组、JS-K低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)和高剂量(10 mg/kg)组。连续口服给药3个月,观察小鼠的生长状况、体重,计算肝肾脏器指数,检测肝肾功能及肝肾组织病理学。另10只小鼠随机分为生理盐水对照组和JS-K 5 mg/kg组,每天皮下注射给药,连续5 d,检测小鼠骨髓和外周血造血干细胞的比率。结果 JS-K口服或皮下注射给药与对照组小鼠比较,给药和对照组动物在试验期间均生长状态良好、体重增加;肝和肾脏指数及肝肾功能与对照组之间无明显差异(P>0.05),均在正常范围;HE染色没有发现JS-K产生明显肝肾毒性;小鼠骨髓造血干细胞中阳性细胞的比率,对照组2.19%,JS-K组1.98%;外周血造血干细胞中阳性细胞比率,对照组为0.110 6%,JS-K组0.128 3%,两组间无明显差异(P>0.05)。结论小鼠连续口服JS-K 3个月(最高剂量10mg/kg)没有发现对肝肾产生明显的毒性,对小鼠的生长未见明显影响;小鼠连续皮下注射JS-K(5 mg/kg)5 d,对骨髓造血功能没有明显的影响。
- 刘正芸杨智文徐尚福勾英周艳萌刘杰王欢
- 关键词：一氧化氮口服皮下注射
