张必雄
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生航空宇航科学技术一般工业技术更多>>
- 猪鼻支原体vlp家族重组蛋白的构建表达及黏附宿主细胞功能检测
- 目的 猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)在临床猪场的感染率极高,可引起猪的多种慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤具有相关性,属人兽共患性病原。目前对猪鼻支原体的黏附因子及致病机制等尚不清楚。本研究以猪鼻支...
- 王佳熊祺琰纪燕倪博张必雄马庆红刘茂军冯志新邵国青
- 重复区重复次数不等的猪鼻支原体可变脂蛋白家族的黏附细胞功能比较
- <正>背景/目的猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症,感染率极高,且与多种人类肿瘤有关,对人类健康构成威胁,另外其还是细胞培养的常见污染物。前期...
- 熊祺琰张必雄王佳倪博马庆红韦艳娜肖少波冯志新刘茂军邵国青
- 文献传递
- 猪鼻支原体表面可变脂蛋白vlpA黏附宿主细胞功能研究被引量：6
- 2016年
- 猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症,感染率极高,且与人类肿瘤的发生有关,对人类健康构成威胁。已有研究表明猪鼻支原体表面可变脂蛋白(vlp)家族参与支原体黏附宿主细胞的过程,本试验主要详细研究vlp家族成员之一vlpA的黏附细胞功能,特别是其Ⅲ区重复片段重复次数变化对其黏附能力的影响。根据GenBank中已公布的vlpA的基因序列,设计引物,从菌体DNA中扩增获得vlpA基因,或者人工合成Ⅲ区重复片段重复次数不等的一系列vlpA基因,均克隆至pET-32a(+)质粒中进行表达,获得目的蛋白质。同时利用固相合成法制备含两段Ⅲ区重复片段的多肽。利用间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测所制备的各种重组vlpA蛋白和多肽的黏附功能。通过诱导表达和镍柱亲和层析纯化,成功获得纯度较高的各个目的蛋白质。利用间接免疫荧光试验证实vlpA可以黏附宿主细胞;利用微孔板黏附试验定量检测不含Ⅲ区的重组vlpA0蛋白及Ⅲ区重复片段多肽的黏附能力,结果发现vlpA0可黏附细胞,而Ⅲ区重复片段多肽无明显黏附能力;进一步利用微孔板黏附试验检测含Ⅲ区重复片段次数分别为3、6、9、12次的重组蛋白vlpA3、vlpA6、vlpA9、vlpA12的黏附能力,结果显示四种重组蛋白质均可黏附细胞,但黏附水平均低于不含Ⅲ区的重组vlpA0蛋白,且随着Ⅲ区重复片段重复次数的增加黏附能力下降。本研究结果提示vlpA为猪鼻支原体黏附因子之一,其Ⅱ区含有黏附位点,而整体分子的黏附能力随着Ⅲ区重复片段重复次数的增加明显减弱。本研究结果有助于进一步研究猪鼻支原体的黏附及致病机制。
- 张必雄熊祺琰王佳纪燕倪博韦艳娜冯志新刘茂军邵国青
- 关键词：细胞黏附
- 猪鼻支原体表面可变脂蛋白VlpB黏附宿主细胞功能研究被引量：3
- 2018年
- 猪鼻支原体表面可变脂蛋白(Vlp)家族在黏附宿主细胞中起重要作用。为研究Vlp家族成员VlpB的黏附细胞功能,包括不同区段的黏附能力,以及其Ⅲ区重复片段的重复次数对黏附能力的影响。本研究利用间接免疫荧光和微孔板黏附试验验证了VlpB的黏附细胞能力。然后根据GenBank中登录的vlpB基因序列,构建了仅含Ⅱ区基因的重组质粒pET-32a(+)/vlpBn,诱导表达后纯化,获得纯度较高的重组蛋白Vlp B0;同时化学合成Ⅲ区重复片段PepVlpB并与KLH偶联;进一步合成Ⅲ区重复次数分别为3、6、9、12的一系列vlpB基因,构建pET-VlpB,诱导表达获得相应的重组蛋白VlpB3、VlpB6、VlpB9和VlpB12。利用微孔板黏附试验定量检测上述重组蛋白和偶联蛋白的细胞黏附能力。结果显示,仅含Ⅱ区的重组蛋白Vlp B0及含Ⅲ区重复片段的偶联蛋白KLH-PepVlpB可黏附宿主细胞;比较不同Ⅲ区重复次数的VlpB蛋白的黏附水平,结果显示,随着Ⅲ区重复次数增多,VlpB黏附能力逐渐下降。本研究证实Vlp B作为猪鼻支原体的黏附因子之一,其Ⅱ区和Ⅲ区均含有黏附位点,而整体分子的黏附能力随Ⅲ区重复次数增加而降低。本研究结果为猪鼻支原体黏附及致病机制研究提供启示。
- 胡永婷张必雄王佳冯志新邵国青熊祺琰
- 重复区重复次数不等的猪鼻支原体可变脂蛋白家族的黏附细胞功能比较
- 目的 猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症,感染率极高,且与多种人类肿瘤有关,对人类健康构成威胁,另外其还是细胞培养的常见污染物。前期研究已证明...
- 熊祺琰张必雄王佳倪博马庆红韦艳娜肖少波冯志新刘茂军邵国青
- 猪鼻支原体可变脂蛋白家族重组蛋白的构建表达及黏附细胞功能检测被引量：2
- 2016年
- 目的本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力。方法根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆。重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白。利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定。结果成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌。经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白。间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显。结论本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子。
- 纪燕熊祺琰王佳张必雄倪博马庆红冯志新刘茂军邵国青
- 关键词：细胞黏附
