李雪强
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪带绦虫亲环蛋白CyP的克隆表达与活性分析
- 亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类在生物体内普遍存在,结构上高度保守的多功能蛋白质,其最初作为免疫抑制剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)的细胞受体,其它功能还包括肽基脯氨酸顺/反异构酶活性...
- 张少华李雪强骆学农才学鹏
- 关键词：猪带绦虫亲环蛋白克隆表达抗体制备
- 猪带绦虫亲环蛋白CyP的克隆表达与活性分析
- 目的:对猪带绦虫亲环蛋白基因(Ts Cy P)进行克隆表达及功能分析,为进一步研究亲环蛋白对猪绦虫病的作用提供重要的实验基础。方法:根据猪带绦虫基因组及转录组数据库中亲环蛋白(Ts Cy P)序列设计特异引物;采用RT-...
- 张少华李雪强骆学农才学鹏
- 关键词：猪带绦虫亲环蛋白克隆表达抗体制备
- 文献传递
- 豆状带绦虫肌动蛋白基因克隆及其作为分子内参的应用被引量：2
- 2016年
- 目的克隆豆状带绦虫(Taenia pisiformis)肌动蛋白基因(Tp-actin)全长c DNA,分析其基因结构、系统进化及作为内参基因的适用性。方法采用RT-PCR法扩增Tp-actin基因片段,RACE-PCR法获得3′和5′端c DNA序列,分别测序后拼接Tp-actin全长c DNA。利用生物信息学软件进行基因结构和系统进化分析。应用Primer Express软件设计Tp-actin和豆状带绦虫组织蛋白酶L样半胱氨酸蛋白酶基因(Tp CP)的特异性引物,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测引物特异性和Tp-actin基因扩增效率,并以Tp-actin作为内参基因,分析Tp CP在豆状带绦虫六钩蚴、囊尾蚴、成熟节片和孕节片等不同发育阶段组织中的表达特征。结果测序结果显示,Tp-actin基因片段为1 048 bp,3′和5′端基因片段分别为428和945 bp,与预期结果一致。拼接获得的Tp-actin全长c DNA为1 279 bp,其中3′UTR长118 bp,5′UTR长30 bp,开放阅读框为1 131 bp,序列已提交Gen Bank(登录号为JX624787)。生物信息学分析结果显示,该序列编码376个氨基酸,推测蛋白相对分子质量(Mr)为41 749,等电点为5.29,含6种特定功能位点和3个actin蛋白家族特征位点。系统进化分析显示,Tp-actin序列与猪带绦虫(Taenia solium)和枝形裂头绦虫(Diphyllobothrium dendriticum)的同源性分别为100%和99.7%。q RT-PCR结果显示,Tp-actin和Tp CP基因经特异性引物扩增,分别获得82和108 bp片段,与预期结果一致;Tp-actin和Tp CP基因熔解曲线均呈单一信号峰,引物特异性强;Tp-actin基因标准曲线线性相关系数(R2)为0.999,符合q RT-PCR对扩增效率的要求;以Tp-actin基因为内参基因,Tp CP基因在孕卵节片中相对转录水平比值为1.65,显著高于六钩蚴(1.00)、成熟节片(0.87)和囊尾蚴(0.62)(P<0.05)。结论Tp-actin基因高度保守,可作为豆状带绦虫基因表达调控及量化分析的内标参照。
- 张少华骆学农李雪强才学鹏
- 关键词：肌动蛋白基因内参基因
- 小反刍兽疫病毒H基因或F基因重组山羊痘病毒活载体疫苗的研究被引量：15
- 2015年
- 为构建能够表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因或F基因的重组山羊痘病毒(GPV)并以此为活载体疫苗,在通用转移质粒pTKfpgigp的多克隆位点中插入PPRV的H基因或F基因,构建重组转移质粒pTKfpgigp-PPRV H和pTKfpgigp-PPRV F,并用Lipofectamine 2000转染已感染GPV的原代绵羊睾丸细胞,经同源重组产生重组GPV(rGPV)。用GFP和gpt选择标记筛选纯化rGPV,通过RT-PCR和免疫荧光技术检测rGPV在原代绵羊睾丸细胞中外源基因的表达情况。将获得的rGPV皮内接种山羊,检测抗山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒的特异性抗体的变化情况。结果显示,获得了含有PPRV H基因或F基因的病毒株rGPV-PPRV H和rGPV-PPRV F;在原代绵羊睾丸细胞中rGPV所含的外源基因进行了正常转录和翻译,表达产物能与PPRV抗血清产生特异性反应,动物免疫试验表明,2株rGPV能诱导产生高水平的抗山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒的特异性抗体。上述研究结果为PPRV重组标记疫苗的研制提供了参考。
- 李继东蒙学莲朱学亮李雪强尤亚南窦永喜骆学农才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒山羊痘病毒H基因F基因
- 猪带绦虫烯醇化酶基因的原核表达及鉴定被引量：1
- 2014年
- 为了探索猪带绦虫烯醇化酶基因的生物学功能,以猪带绦虫幼虫cDNA为模板,PCR扩增获得烯醇化酶基因的ORF,并将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒。经IPTG诱导表达后,纯化表达产物,采用免疫印迹法分析表达产物的免疫反应性,并测定它与纤溶酶原的结合特性及酶活力。结果显示,该基因的ORF大小为1 302bp,表达大小约为53ku的重组蛋白;表达产物可被猪囊尾蚴病阳性血清识别;该重组蛋白具有纤溶酶原结合特性及酶活力。据此推测,猪带绦虫烯醇化酶可能在寄生虫入侵宿主过程中发挥作用,有作为药物靶标或疫苗候选分子的潜力。
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- 关键词：猪带绦虫纤溶酶原酶活力
