刘星
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
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- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目江苏省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 嵌合双串联OVA T细胞表位的RHDV VP60蛋白免疫特性研究
- 2015年
- 为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利用透射电镜观察VLPs的形成,发现均可形成形态大小与VP60相似的VLPs。将3种嵌合蛋白分别腹腔注射C57BL/6雌性小鼠,利用间接ELISA检测首免后0、4和6周小鼠血清样品中VP60特异性抗体,结果表明嵌合蛋白组与VP60组均能够诱导产生较高水平的抗VP60特异性抗体,2组间无显著差异。首免后6周,利用合成的OVA多肽刺激脾淋巴细胞,ELISPOT检测特异性IFN-γ的分泌水平,结果表明3种嵌合蛋白均能诱导特异性IFN-γ的分泌。该研究扩展了VP60作为载体可携带的外源片段的耐受性及有效递呈T细胞表位的能力,为VP60-VLPs展示系统的研究提供了理论依据。
- 宋艳华张燕胡波范志宇魏后军刘星黄兵薛家宾徐为中王芳
- 关键词：RHDVOVAT细胞表位嵌合蛋白免疫原性研究
- 一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用
- 本发明提供一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用，涉及生物技术领域。分泌抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5H3，保藏号为CCTCC？NO：C2015150。本发明所述单克...
- 宋艳华王芳范志宇胡波魏后军刘星仇汝龙薛家宾
- 兔肝细胞中与RHDV VP60 P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定被引量：1
- 2016年
- 兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究。提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合。结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用。本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索。
- 李腾姜平王芳王芳宋艳华胡波范志宇魏后军刘星
- 兔源IL-6基因启动子的克隆及转录调控被引量：1
- 2016年
- 通过体内感染兔出血症病毒后发现白介素6(Interleukin-6,IL-6)基因表达水平明显升高。为体外研究IL-6启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的基本转录原件,首先利用染色体步移技术扩增得到兔IL-6基因的启动子区序列,经测序全长为763 bp;经同源性分析,与人源IL-6基因的启动子高度同源;生物信息学分析发现,该启动子序列含有AP-1、CREB/NF-IL6、NF-κB和TATA-box等转录元件。随后将全长和一系列缺失体的IL-6启动子基因(-400/+58 bp、-250/+58 bp、-170/+58 bp、-100/+58 bp)定向亚克隆至荧光素酶表达载体p GL3-Basic中,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转录RK-13细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。结果显示,本试验所克隆的IL-6基因启动子区具有明显的活性,而且AP-1、CREB/NF-IL6和NF-κB在IL-6基因的转录调控中有着不可或缺的作用。以上结果为进一步研究兔IL-6基因的转录调控机制奠定了基础。
- 刘星宋艳华王芳范志宇胡波魏后军仇汝龙徐为中薛家宾
- 关键词：IL-6基因启动子转录调控
- 兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株ompA基因表达与免疫原性鉴定
- 2015年
- [目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体p GEX-domp A,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白omp A。[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性。[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础。
- 徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星
- 关键词：兔多杀性巴氏杆菌OMPA原核表达
- 患兔流行性腹胀病家兔肠道菌群结构的ERIC-PCR指纹图谱分析被引量：4
- 2016年
- [目的]建立患兔流行性腹胀病家兔肠道细菌的DNA指纹图谱,并分析其肠道菌群结构特征的整体差异。[方法]提取流行性腹胀病兔及健康兔肠道内容物细菌总DNA,应用肠杆菌基因间重复共有序列基因扩增技术(ERIC-PCR)建立肠道菌群的DNA指纹图谱,并分析其整体差异。[结果]病兔大肠样本DNA条带明显少于健康兔对照,而小肠样本在二者间无明显差异,说明病兔与健康兔大肠肠道菌群存在整体差异。病兔大肠样本DNA在约350 bp处出现1条主带,同时伴有若干较弱的带,而健康兔对照大肠样本DNA条带均无明显规律。病兔大肠肠道的微生物群落多样性指数为(2.03±0.49),健康兔大肠肠道的微生物群落多样性指数为(3.30±0.31),差异极显著(P<0.01)。[结论]兔流行性腹胀病发病兔大肠中肠道菌群结构多样性降低,可能存在单一或几种特定的肠道优势菌群。
- 胡波范志宇王芳魏后军宋艳华仇汝龙刘星徐为中薛家宾
- 关键词：肠道菌群
- 兔源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定被引量：5
- 2015年
- 从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、恩诺沙星和磺胺六甲氧嘧啶等药物敏感。
- 徐为中王芳胡波范志宇魏后军宋艳华薛家宾仇汝龙刘星
- 关键词：多杀性巴氏杆菌
- 兔出血症病毒感染机体后炎性因子的检测分析被引量：1
- 2016年
- 兔出血症病毒(RHDV)感染成年兔可以诱导兔体内产生强烈的炎性反应,是病毒感染后急性死亡的重要原因之一。为揭示病毒感染机体后体内重要炎性因子的表达情况,采用荧光定量PCR方法检测RHDV感染后6、12、24、30、36 h兔外周血、肝脏和脾脏内病毒增殖情况以及IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ炎性因子的表达情况。结果表明,兔出血症病毒拷贝数在外周血、肝脏和脾脏内随着感染时间的变化呈快速上升的趋势。外周血、肝脏和脾脏在病毒感染中,促炎性因子IL-6和TNF-α表达水平都明显上调。肝脏促炎性因子IL-6在30 h左右达到最大值,而在外周血和脾脏中则持续上调。抑炎因子IL-10随着炎性因子的上调也随之上升,但其表达水平只有较低程度的上调。IFN-γ相对表达水平在肝脏和脾脏有短暂的上调,在外周血中则持续下调。
- 仇汝龙范志宇王芳胡波宋艳华魏后军刘星徐为中薛家宾
- 关键词：兔出血症病毒炎性因子荧光定量PCR脾脏
- 一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用
- 本发明提供一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用，涉及生物技术领域。分泌抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5H3，保藏号为CCTCC NO：C2015150。本发明所述单克...
- 宋艳华王芳范志宇胡波魏后军刘星仇汝龙薛家宾
- 文献传递
