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生物反应器-微载体技术培养Vero细胞制备柯萨奇病毒A组16型被引量：7: 2017年; 目的利用生物反应器-微载体培养技术培养Vero细胞制备柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)。方法应用生物反应器-微载体培养法进行Vero细胞培养,待细胞长成致密单层时,接种CA16,于37℃培养,每隔24 h观察细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果 Vero细胞在微载体上吸附140 h后,绝大部分细胞在微载体上长成致密单层,细胞密度约为12.3×10~5个/ml;接种CA16后72 h,Vero细胞完全病变,几乎全部从微载体上脱落,病毒滴度达最高,约7.75 TCID_(50)/ml。结论成功采用生物反应器-微载体培养技术培养Vero细胞制备了CA16,且病毒滴度较高,为CA16灭活疫苗的研制奠定了基础。; 刘志成卿琰岳凤先井敏敏黄芬井申荣; 关键词：生物反应器微载体 VERO细胞柯萨奇病毒A组16型

产气肠杆菌组成型启动子的筛选及其活性测定被引量：2: 2016年; 目的：从产气肠杆菌基因组中筛选组成型启动子，并检测其活性。方法用Sau3 AⅠ限制性内切酶将产气杆菌的基因组酶切到500 bp大小，连接到pCMR8 a载体上，转化DH5α感受态后涂布氯霉素和卡那抗生素的双抗平板上筛选启动子，经SDS－PAGE分析启动子的蛋白表达能力，筛选较强启动子并对其进行截短和顺反性实验，最后利用截短启动子表达不同的蛋白。结果成功筛选到了5个启动子序列，获得到了表达能力最强启动子的截短核心序列，验证了其具有反向启动外源蛋白表达的能力，成功表达了其他外源蛋白。结论本实验通过大肠埃希菌表达系统成功的筛选并验证了产气杆菌的一种组成型启动子，具有较强的启动外源蛋白表达能力，对工业上蛋白的生产及实验室表达某种蛋白具有重要意义。; 苑荣亮仉秋实汪玉婷岳风先刘志成张成井敏敏毛小琴井申荣; 关键词：产气肠杆菌组成型启动子蛋白表达活性测定

预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法: 本发明公开了预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法。本发明公开的预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗，活性成分为将SEQ ID No.1的第20‑156位或SEQ ID No.1的第1‑156位所示的蛋白质糖基化得...; 王恒樑刘志成潘超朱力吴军冯尔玲刘先凯孙鹏王东澍曾明王斌井申荣; 文献传递

膜联蛋白A2在病毒复制过程中的作用: 2016年; 膜联蛋白A2是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，是膜联蛋白家族中最具有代表性的成员之一，参与了细胞的多种生物学功能。在病毒感染细胞时，与膜联蛋白A2存在多种相互作用。文章综述了膜联蛋白A2在病毒复制过程中发挥的功能及作用机理，为膜联蛋白A2的相关研究以及抗病毒药物的筛选提供参考。; 刘志成井申荣; 关键词：膜联蛋白A2 病毒复制

人星状病毒非结构蛋白nsP1a／1表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：1: 2016年; 目的：表达纯化人星状体病毒（ human astrovirus， HAstV）非结构蛋白nsP1a／1，免疫动物制备多克隆抗体。方法利用PCR技术扩增nsP1a／1基因序列，构建到大肠埃希菌原核表达系统中表达重组nsP1a／1蛋白，使用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS-PAGE）和二噻啉甲酸（BCA）实验对重组蛋白的纯度与浓度进行分析，以重组的nsP1a／1蛋白为抗原，免疫雄性SPF级SD 大鼠获得多抗血清，用 ELISA 测定抗体效价、 Western 印迹检测抗体特异性。结果nsP1a／1-pET28a原核表达载体构建成功，将其转化至大肠埃希菌BL21（DE3）细菌中诱导表达了重组蛋白，免疫大鼠获得的多抗血清几何平均效价达到1∶406374。结论本实验成功地运用原核表达系统表达并鉴定了人星状体病毒非结构蛋白nsP1a／1，为进一步研究人星状病毒的复制及病毒感染的临床诊断奠定基础。; 苑荣亮崔成成井敏敏刘志成汪玉婷岳风先张成井申荣毛小琴; 关键词：多克隆抗体 NON-STRUCTURAL PROTEINS

柯萨奇病毒A16型2 B基因的酵母双杂交诱饵载体的构建及其特性鉴定: 2016年; 目的：构建柯萨奇病毒A16的2B基因的酵母诱饵表达载体，用于筛选与2B相互作用的蛋白。方法 PCR扩增2B全序列，克隆入pGBKT7？BD，将构建好的 pGBKT7？2B转化到酵母细胞 Y2HGold；用Western印迹分析诱饵蛋白的表达，检测诱饵蛋白有无毒性和自激活效应。结果成功克隆了pGBKT7？2B并转化至Y2 HGold中，转化细胞Y2 HGold [pGBKT7？2B]可以表达诱饵蛋白2B，2B蛋白对转化细胞无细胞毒性和自激活效应。结论成功构建了酵母诱饵表达载体pGBKT7？2B，可用于酵母双杂交筛选与2B蛋白相互作用的宿主靶蛋白。; 张成刘志成苑荣亮黄芬井申荣; 关键词：酵母双杂交柯萨奇病毒A16

一种人防御素蛋白的新用途: 本发明公开了一种人防御素蛋白的新用途，即其在抵抗非囊膜类病毒感染中的应用，该蛋白为人体天然免疫系统中的一种效应分子，实验证明该人防御素蛋白可以抵抗EV71、柯萨奇病毒A16、CB5、脊髓灰质炎病毒对细胞的感染，而且是在细...; 井申荣刘志成陈伟闫沁男曾韦锟黄芬; 文献传递

人星状病毒非结构蛋白nsP1a/3的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2015年; 目的原核表达、纯化人星状病毒(human astrovirus,HAstV)非结构蛋白nsP1a/3,并制备多克隆抗体。方法酶切质粒nsP1a/3-pCDNA3.1,获得nsP1a/3基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒nsP1a/3-pET-28a,转化大肠埃希菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,并优化表达条件。表达的重组蛋白经Ni2+亲和层析纯化后,经腹腔免疫SD大鼠,共4次,最后1次免疫7 d后,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测多抗效价,Western blot鉴定多抗的特异性。结果重组表达质粒nsP1a/3-pET-28a经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为22500,以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度为86.6%,浓度为1.26mg/ml;制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶30 000,且特异性较好。结论成功地原核表达、纯化了HAstV非结构蛋白nsP1a/3,并制备了特异性良好的鼠多克隆抗体,为进一步研究nsP1a/3蛋白在病毒侵染靶细胞时的作用机制奠定了基础。; 李攀张成杨思达崔成成刘志成曾韦锟黄芬井申荣; 关键词：原核细胞纯化多克隆抗体

鲍曼不动杆菌的多糖结合疫苗研究: 鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)是自然界中广泛存在的一种革兰氏阴性菌,属于一种机会致病菌,极易感染免疫功能低下的人,同时也是医院感染中最典型的临床病原菌之一。因其增殖速度快,粘附力极强...; 刘志成; 关键词：鲍曼不动杆菌糖基化纯化疫苗; 文献传递

原核生物糖基转移酶PglL的研究进展被引量：2: 2016年; 原核生物蛋白质糖基化修饰系统包括N-糖基化和O-糖基化两种,其中O-糖基化修饰系统中的寡糖基转移酶PglL对底物和糖链的特异性更低,在利用蛋白糖基化制备多糖结合疫苗中应用范围更广。简要综述了PglL的基本结构及其在糖基化反应中的特异性,为以后PglL的应用提供初步指导。; 刘志成潘超朱力井申荣王恒樑; 关键词：原核生物糖基转移酶糖蛋白特异性

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刘志成

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