王歆
- 作品数：3 被引量：32H指数：2
- 供职机构：浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究被引量：24
- 2015年
- 【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%-120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。
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- 关键词：黄曲霉毒素B1单克隆抗体间接竞争ELISA
- 金黄色葡萄球菌A型肠毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用被引量：8
- 2016年
- 【目的】建立一种快速、灵敏、特异的金黄色葡萄球菌A型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin A,SEA)检测方法。【方法】以原核表达的可溶性重组SEA蛋白为免疫原,获得特异性强、亲和力高的单克隆抗体作为捕获抗体,同时制备抗SEA兔多抗血清作为检测抗体建立双抗体夹心ELISA(Double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。【结果】该方法对SEA的线性检测区间为2-128μg/L(y=1.102x-0.07,R2=0.994),检测下限为1.89μg/L,与SEB、SEC2和SED之间无交叉反应;鲜奶SEA人工污染试验测定回收率为94%-114%,变异系数小于10%。应用该方法对46株金黄色葡萄球菌水产品分离株和164株奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌分离株的体外培养上清进行检测,阳性率分别为4.4%和50.6%,表明SEA污染普遍存在。【结论】建立的DAS-ELISA方法特异性、灵敏度和稳定性好,为检测SEA的食源性污染提供了有效手段。
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- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 金黄色葡萄球菌A型肠毒素双抗体夹心ELISA检测方法及初步应用
- 为建立一种快速、灵敏、特异的金黄色葡萄球菌A型肠毒素(staphylococcal enterotoxin A,SEA)检测方法,本研究以原核表达的可溶性重组SEA蛋白为免疫原,获得了特异性强、亲和力高的单克隆抗体作为捕...
- 时玉菲章先谢珲王歆方维焕
- 关键词：家畜单克隆抗体
- 文献传递
