章先
- 作品数：32 被引量：75H指数：7
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生环境科学与工程更多>>
- 基于量子点标记的赭曲霉毒素A快速、高灵敏荧光免疫层析检测方法的建立及应用被引量：10
- 2019年
- 赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素。本研究通过采用量子点荧光微球(quantum dots,QDs)标记OTA单克隆抗体,并基于免疫层析原理,优化、建立了OTA高灵敏荧光免疫层析检测方法(FICGA),15min即可实现对农产品中OTA污染的快速定量检测。该方法检测下限(IC10)达到0.04ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.05–0.59ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.18ng/mL。与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为7.3%和11.9%,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1和DON均无交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达83.2%–117.8%,与LC-MS/MS同时对天然样本中OTA含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的FICGA快速、灵敏,可满足基层单位和现场的快速检测需求,具有很好的应用前景。
- 杨眈王作欢蒋小武方维焕方维焕章先
- 关键词：赭曲霉毒素A免疫层析量子点单克隆抗体
- 基于纳米金和辣根过氧化物酶双标记抗体的黄曲霉毒素B_1高灵敏检测方法的建立及应用被引量：7
- 2018年
- 黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)在自然界普遍存在,可污染多种粮食作物和饲料,给动物和人类健康造成严重威胁。为建立AFB_1高灵敏度的快速检测方法,本研究通过采用纳米金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记AFB_1单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(HRP-AuNPs IC-ELISA),检测下限(IC10)为0.017ng/mL,检测区间(IC_(20)–IC_(80))为0.026–0.376ng/mL,半数抑制率(IC_(50))为0.099ng/mL,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.7%、9.3%、2.1%和5.3%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素B_1、桔青霉素、展青霉毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。在玉米和面粉样本中的加标回收率可达88.93–103.55%,与LC-MS/MS同时对天然样本中AFB_1含量进行检测,结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的HRP-AuNPs IC-ELISA耗时短且灵敏度高,可用于实际样本中AFB_1的快速定量检测与分析,也为其他霉菌毒素的精准检测技术开发提供参考。
- 章先章先付子贤周一钊方维焕宋厚辉
- 关键词：黄曲霉毒素B1纳米金颗粒辣根过氧化物酶单克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析被引量：4
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h,可检测到120ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。
- 温贵兰张涵淞扈鸿霞章先张毅王晓杜李肖梁方维焕
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 双重定量蛋白毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法
- 本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种双重定量蛋白毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法。该试纸条在聚氯乙烯背板表面依次布置样品垫、量子点抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有两条检测线和一条质控线；...
- 方维焕章先李肖梁王歆谢珲时玉菲孙孟娇
- 文献传递
- 双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法
- 本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法。该试纸条在聚氯乙烯背板表面依次布置样品垫、量子点抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有两条检测线和一条质控线；...
- 方维焕章先李肖梁谢珲王歆孙孟娇
- 文献传递
- 黄曲霉毒素B1竞争ELISA检测技术研究
- 黄曲霉毒素B1(Aflatoxin Bi,AFBi)是由某些真菌菌株产生的次生代谢产物.由于其具有极强的毒性、致癌性以及在自然界存在的普遍性,可污染多种粮食作物,严重威胁消费者的健康.因此,许多国家规定了AFBi在各类粮...
- 谢珲章先时玉菲王歆方维焕
- 关键词：黄曲霉毒素B1单克隆抗体
- 一种免疫学反应孵孕箱
- 本发明公开了一种免疫学反应孵孕箱，涉及孵孕箱技术领域，一种免疫学反应孵孕箱，包括用于对免疫学细胞培养的箱体，还包括用于在断电状态进行辅助供热的辅助加热机构，用于控制辅助加热机构在断电状态自动开启的加热开启机构，用于控制辅...
- 章先彭慧琴于晓虹鲍建芳王继璇丁伟勇
- 二联定性真菌毒素胶体金免疫层析试纸条及制备方法
- 本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种二联定性真菌毒素胶体金免疫层析试纸条及制备方法。包括作为基材的黑色长条状聚氯乙烯背板；在沿背板长度方向在其表面依次布置样品垫、胶体金抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，相邻垫或膜间...
- 章先程昌勇王晓杜李肖梁方维焕宋厚辉
- 文献传递
- 黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究被引量：24
- 2015年
- 【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%-120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。
- 谢珲章先王歆凡鹏程时玉菲方维焕
- 关键词：黄曲霉毒素B1单克隆抗体间接竞争ELISA
- 能检测多种猪猝死症病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒
- 本发明涉及生物检测技术，旨在提供一种能检测多种猪猝死症病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒包括：反转录和预扩增引物混合液、探针混合液、MLPA缓冲液、连接缓冲液A、连接缓冲液B、连接酶Ligase‑65、PCR反应...
- 宋厚辉周莹珊王晓杜邵春艳陈琳章先程昌勇杨杨
